Том 13, № 1 (2023)
- Год: 2023
- Дата публикации: 01.04.2023
- Статей: 22
- URL: https://iimmun.ru/iimm/issue/view/61
Весь выпуск
ОБЗОРЫ
Роль нейтрофильных экстрацеллюлярных сетей (NETs) в иммунопатогенезе тяжелого COVID-19: потенциальные иммунотерапевтические стратегии, регулирующие процесс формирования и активность NETs
Аннотация
Роль нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в патогенезе COVID-19 связана с рекрутированием НГ в очаги воспаления, активацией их функций и усиленным образованием нейтрофильных экстрацеллюлярных сетей (NETs). В данном обзоре нами проанализирован достаточно большой объем научной литературы, посвященной особенностям формирования NETs, их роли в патогенезе COVID-19, участию в возникновении иммунотромбозов, васкулита, острого респираторного дистресс-синдрома, синдрома цитокинового шторма, мультиорганных поражений. Приведены убедительные данные, четко указывающие на значительное участие NETs в иммунопатогенезе COVID-19 и связанными с ними тяжелыми осложнениями, возникающими в результате усиления процесса воспаления, который является ключевым для течения инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2. Представленная роль НГ и NETs, наряду с ролью других клеток иммунной системы и провоспалительных цитокинов, чрезвычайно важна в понимании развития гиперактивного иммунного ответа при тяжелой форме COVID-19. Полученные научные результаты, доступные на сегодняшний день, позволяют идентифицировать возможности регуляторных воздействий на гиперактивированные НГ, на процессы формирования NETs на различных этапах и на ограничение негативного воздействия уже сформированных NETs на различные ткани и органы. Все вышеперечисленное должно помочь в создании новых, специализированных иммунотерапевтических стратегий, предназначенных для увеличения шансов на выживание, уменьшения тяжести клинических проявлений у пациентов с COVID-19, а также в значительном снижении показателей смертности. В настоящее время возможно применение уже существующих лекарственных препаратов, и разрабатывается целый ряд новых лекарственных средств, действие которых может регулировать количество НГ, позитивно влиять на функции НГ и ограничивать интенсивность формирования NETs. Продолжение исследований роли гиперактивированных НГ и нетоза, а также понимание механизмов регуляции феномена образования и ограничения активности NETs при тяжелом COVID-19, по-видимому, являются приоритетными, поскольку в дальнейшем полученные новые данные могли бы стать основой в разработке таргетных подходов не только к иммунотерапии, направленной на ограничение образования и блокирование негативных воздействий уже сформировавшихся NETs при тяжелом COVID-19, но и к иммунотерапии, которую можно было бы использовать в комплексном лечении других нетопатий, в первую очередь, аутоиммунных болезней, аутовоспалительных синдромов, тяжелых гнойно-воспалительных процессов, в том числе бактериального сепсиса и гематогенного остеомиелита.
Четвертый этический комментарий к COVID-19 (три года спустя). Доверие и вера: социально-нравственный срез вакцинации
Аннотация
Подведение смысловых и системных итогов пандемии COVID-19 является актуальной задачей современной стратегии и должно составить очередную фазу прохождения и осмысления пандемии коронавирусной инфекции как эпидемической и гуманитарной катастрофы глобального характера. На страницах журнала «Инфекция и иммунитет» нами регулярно и последовательно были представлены данные этического взгляда на нормативно-правовой характер обеспечения планового и оперативного управления пандемией и рассмотрены проблемы административного регулирования системы общественного здравоохранения. Анализ и этическая оценка ситуации затрагивает обширный круг вопросов, включающий как базовый законодательный ресурс, так и тактическую адаптацию нормативного поля в условиях кризисной ситуации. Самостоятельного решения требовали нравственные и логистические вызовы в сфере оказания медицинской помощи, экстренного порядка разработки и производства средств диагностики, лечения и профилактики, а также всех аспектов, связанных с организацией и проведением вакцинации. Всем вышеобозначенным сюжетам были посвящены три предшествующих этических комментария, сделанные и представленные нами ранее в ходе пандемии коронавирусной инфекции в 2020–2022 гг. Современная работа, оформленная в рамках общей серии, как «четвертый этический комментарий» вытекает непосредственно из данных, полученных в процессе обработки и исследования актуального опыта проведения вакцинации в контексте регионального кластера — государств — участников Содружества независимых государств (СНГ), детально описанных в предыдущей статье. Осознанная необходимость и очевидная значимость данной работы состоит в регистрации объективных параметров уязвимости вакцинации при пандемии COVID-19, а также выявлении ответного спектра формирования соответственно доверия/недоверия к вакцинации в различных слоях общества, в зависимости от комплекса социальных и нравственных факторов, включающих принадлежность к определенной религиозной конфессии. Исследованные и представленные в настоящей статье материалы имеют первостепенное значение для поиска нравственных путей поддержки и стабилизации ответственного отношения к защите морального, социального и физического здоровья граждан в чрезвычайных ситуациях.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Изучение антигенных свойств штаммов коронавируса SARS-CoV-2, выделенных на территории РФ в 2020–2022 гг., в реакции нейтрализации с использованием гипериммунных сывороток мышей
Аннотация
Введение. Быстрое распространение новой коронавирусной инфекции среди населения многих стран мира способствовало генетической эволюции вируса, следствием чего явилось появление множества генетических вариантов коронавируса SARS-CoV-2. Мутации в вирусном геноме могут влиять на способность вируса обходить иммунную защиту и затруднять разработку диагностических и профилактических препаратов. Данные о нейтрализующей активности сывороток, полученных против циркулировавших ранее генетических вариантов вируса, в отношении актуальных штаммов SARS-CoV-2, могут служить научным обоснованием для выбора антигенов при разработке вакцин. Целью работы явилось изучение кросс-реактивности штаммов коронавируса SARS-CoV-2, относящихся к разным генетическим вариантам, которые были выделены на территории Российской Федерации в период 2020–2022 гг. в реакции нейтрализации с использованием гипериммунных сывороток мышей. Материалы и методы. Использованы 10 штаммов коронавируса SARS-CoV-2, относящихся к разным генетическим вариантам (3 штамма, не являющиеся VOC, альфа, бета, гамма, дельта, дельта+AY, омикрон 1 и омикрон 2). Штамм hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (Ухань) был включен в исследование в качестве прототипного варианта. Мышей линии BALBc иммунизировали инактивированным концентрированным антигеном в смеси с адъювантом 1:1, в качестве которого использовали вирусоподобные иммуностимулирующие комплексы на основе сапонинов Квиллайи мыльной (Quillaja saponaria). Титр антител определяли в реакции нейтрализации. Результаты. Показано значительное снижение нейтрализующей способности антител, специфичных к генетическим вариантам коронавируса SARS-CoV-2 не относящимся к VOC, против бета VOC и, в меньшей степени, против альфа и гамма VOC. Различия уровня нейтрализующей активности антител для альфа и бета VOC между собой незначительны, с вариантом гамма VOC — не достоверны. Нейтрализующая способность антител, специфичных к дельта VOC, против вариантов альфа и бета VOC снижена в 4 раза. Нейтрализующая активность сывороток, полученных к вариантам омикрон 1 и 2, по отношению к прототипному варианту коронавируса снижена в 18 раз, к гамма-варианту — в 12 раз, к дельта-вариантам — более чем в 30 раз, для остальных вариантов она еще ниже. Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о наличии кросс-реактивности между штаммами коронавируса, относящимися к генетическим линиям Ухань, альфа, бета, гамма; для дельта-вариантов она слабее. Мутации в геноме вариантов омикрон VOC привели к значимому снижению антигенных перекрестов с более ранними генетическими вариантами коронавируса. Эти сведения объясняют низкую эффективность вакцин, созданных на основе генетического варианта вируса, циркулировавшего в первые недели пандемии, синтетических иммуногенов и рекомбинантных белков на его основе против вариантов омикрон VOC, которые вызвали подъем заболеваемости с начала 2022 г., а также случаи повторного заболевания людей при инфицировании новыми генетическим вариантов коронавируса.
Поддержание иммунологической памяти к вирусу SARS-CoV-2 в условиях пандемии
Аннотация
Вопрос о продолжительности и эффективности постинфекционного иммунитета к SARS-CoV-2 и сопоставление его с поствакцинальным остается в центре изучения многих исследователей. Целью работы было исследование продолжительности поддержания постинфекционного и поствакцинального иммунитета к вирусу SARS-CoV-2, а также формирование гибридного (вакцинация после перенесенной инфекции) и прорывного (повторное заболевание или заболевание после вакцинации) иммунитета в условиях продолжающейся пандемии. Обследованы 1–6 раз 107 взрослых, перенесших COVID-19 в легкой или среднетяжелой форме, спустя 3–18 месяцев после заболевания, и 30 человек, привитых двукратно вакциной «Спутник V». Антитела к вирусу SARS-CoV-2 определяли методом ИФА на тест-системах «SARS-CoV-2-IgG количественный-ИФА-БЕСТ». Авидность антител определяли с помощью дополнительной инкубации с денатурирующим раствором и без него. Мононуклеары выделяли из крови методом градиентного центрифугирования, инкубировали с S-белком коронавируса и без него 20 ч, окрашивали флюоресцентно-меченными антителами и подсчитывали процент CD8highCD107a+ на цитометре FACSCanto II. Показано, что в группе переболевших и привитых уровень специфичных к вирусу антител снижался более выражено у лиц с изначально высоким гуморальным ответом, но после 9-и месяцев снижение замедлялось и выходило на плато. Авидность антител поднималась до 50% и сохранялась 18 мес. Клеточный иммунитет у переболевших не менялся на протяжении 1,5 лет, а у привитых постепенно снижался после 6 мес., но оставался на детектируемом уровне. После ревакцинации привитых отмечен значимый подъем уровня антител, авидности до 67,6% и клеточного иммунитета до исходного уровня. Гибридный иммунитет оказался значимо более высоким, чем постинфекционный и поствакцинальный. Уровень антител возрос до 1218,2 BAU/мл, авидность — до 69,85%, а клеточный иммунитет — до 9,94%. Прорывной иммунитет был значимо выше, чем после первого заболевания. Уровень антител поднялся до 1601 BAU/мл, авидность — до 81,6%, клеточный иммунитет — до 13,71%. На примере динамического наблюдения за четырьмя лицами, перенесшими COVID-19, показано, что в условиях продолжающейся пандемии и активной мутации коронавируса происходит естественное бустирование, как бессимптомно, так и в результате легкой повторной инфекции, что препятствует исчезновению гуморального и клеточного иммунитета, специфичного к SARS-CoV-2.
Особенности субпопуляционного состава лимфоцитов новорожденных детей, рожденных у матерей, перенесших COVID-19 на разных сроках беременности
Аннотация
Взаимосвязь между заболеваемостью COVID-19 беременных, перенесших коронавирусную инфекцию на разных сроках гестации, и состоянием здоровья рожденных от них детей вызывает большой интерес. Убедительных данных, полно отражающих особенности течения неонатального периода, состояния иммунной системы, влияющих на особенности ведения постнатального периода у данной категории детей, недостаточно. Исходя из изложенного становится очевидной актуальность исследования, целью которого явилось изучение особенностей клинико-иммунологического состояния здоровья новорожденных у матерей, перенесших новую коронавирусную инфекцию COVID-19 на разных сроках гестации. В проспективное исследование были включены 131 женщина и 132 ребенка. Основную группу составили женщины (n = 61), перенесшие COVID-19 во время беременности, и их новорожденные дети (n = 62) гестационного возраста (ГВ) 37–41 неделя, группу сравнения — женщины без лабораторно подтвержденного COVID-19 во время беременности (n = 70) и их новорожденные дети (n = 70) того же ГВ. При анализе анамнеза пациенток не было отмечено значимых различий по соматическим и акушерско-гинекологическим заболеваниям. Анализ течения настоящей беременности выявил, что статистически значимо чаще в основной группе проводилась терапия низкомолекулярными гепаринами. Срок и частота родоразрешения путем кесарева сечения у беременных в основной группе не имели статистически значимых различий по сравнению с контрольной группой. Значимых различий по частоте причин, определявших тяжесть состояния новорожденных у матерей, перенесших COVID-19 в разные триместры гестации, выявлено не было. Проведено исследование субпопуляционного состава лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов и определение антител класса IgG к SARS-CoV-2. При исследовании субпопуляционного состава лимфоцитов новорожденных, рожденных у матерей, перенесших COVID-19 в разные триместры гестации, выявлены различия только в содержании NK-клеток (CD56+) у детей, рожденных у матерей, переболевших COVID-19 в первом триместре. В приведенном исследовании в целом не было выявлено тяжелых перинатальных исходов у новорожденных, матери которых перенесли COVID-19 во время беременности. В исследованной выборке матерей не было случаев среднетяжелого и тяжелого течения COVID-19. Поэтому необходимы дальнейшие проспективные исследования, чтобы оценить влияние степени тяжести COVID-19 на исходы родов для матери и плода и уточнить оптимальное ведение беременных в таких случаях.
Динамика матурации авидности IgG-антител к RBD SARS-CoV-2 в зависимости от срока и типа иммунизации
Аннотация
Цель исследования — изучение динамики матурации авидности IgG-антител к RBD SARS-CoV-2 в зависимости от пути иммунизации (вакцинация или перенесенная инфекция), а также от срока и кратности иммунизации. Материалы и методы. Исследование было проведено на двух выборках образцов, полученных в разные временные промежутки от начала пандемии COVID-19. Первая выборка (группа № 1) — 87 образцов сывороток крови, полученными от реконвалесцентов, однократно переболевших COVID-19 в период с марта по сентябрь 2020 г. Вторая выборка включала 204 образца, полученных в сентябре 2021 г. у двух групп добровольцев. Группа № 2 (n = 64) — добровольцы, иммунизированные полным курсом Гам-Ковид-Вак, группа № 3 (n = 140) — добровольцы, переболевшие COVID-19 и получившие курс вакцины Гам-Ковид-Вак («гибридный иммунитет»). Результаты и выводы. Исследование динамики матурации авидности антител класса G к RBD SARS-CoV-2 в зависимости от способа и кратности иммунизации показало, что наиболее эффективный иммунитет формируется у пациентов, переболевших COVID-19 и вакцинированных полным курсом препарата Спутник V (n = 64). В образцах добровольцев с таким анамнезом было показано не только достоверно более высокое (по сравнению с добровольцами групп № 1 и № 2) количественное содержание IgG (медианный уровень 228 BAU/ml против 75 или 119 BAU/ml, p < 0,001), но и более высокий уровень их авидности (ИА 90,5% против 54,5 и 76,6 соответственно, p < 0,001, 4М мочевина). В тесте для определения индекса авидности с 8М мочевиной в качестве денатурирующего агента у пациентов с «гибридным иммунитетом» медианный уровень ИА составил 25% против 14,8 и 16% у переболевших и вакцинированных соответственно (p < 0,001), и только у 8 пациентов был выше 50%. При сравнении таких способов иммунизации, как перенесенный однократно COVID-19 или вакцинация полным курсом Спутник V, было показано, что вакцинация приводит к более высоким уровням IgG (медианные значения в группах 119 и 75 BAU/ml, p < 0,001) и к более высокому индексу их авидности (76,6% против 54,5%). При этом эффективность вакцинации была выраженной уже на ранних стадиях иммунизации (до 4 месяцев) — в период, когда матурация IgG еще не завершена. В этот период вакцинация приводит к выработке антител с ИА уже на медианном уровне 82% против 36% у тех, кто перенес заболевание в тот же срок.
Коллективный иммунитет к SARS-CoV-2 населения Республики Армения
Аннотация
Введение. Пандемия COVID-19 стала серьезным глобальным кризисом в области здравоохранения, не имеющим аналогов в мировой истории. Динамика инфекции может иметь специфические особенности в разных странах в силу социальных, экономических, климатических или географических факторов. Цель: изучить особенности коллективного иммунитета против SARS-CoV-2 среди населения Армении. Материалы и методы. Поперечное рандомизированное исследование коллективного иммунитета проводили по программе, разработанной Роспотребнадзором и Санкт-Петербургским институтом Пастера с учетом рекомендаций ВОЗ. Исследование одобрено этическими комитетами Национального центра инфекционных болезней (Армения) и Санкт-Петербургского института Пастера (Россия). Была сформирована когорта добровольцев (N = 6057), рандомизированная по возрасту и региону. Анализ исследования включал: доли и распределение антител (АТ) к нуклеокапсиду (Nc), антигену (Ag) и рецепторсвязывающему домену (RBD) S-1 Ag в когорте; и количественное определение этих антител с помощью ELISA. В ходе опроса в анамнезе прививки указали 4395 человек. Результаты. Общая серопозитивность, сформированная во всей когорте (к 14 апреля 2022 г.), составила 98.6% (95% ДИ: 98.1–98.7). Оно не зависело от возраста, места жительства или рода занятий. При количественном определении антител Nc и RBD доля добровольцев с уровнями антител Nc 1–17 BAU/мл и уровнями антител RBD 22.6–220 BAU/мл была наименьшей и составила 6.9% (95% ДИ: 6.2–7.5). и 20.4% (95% ДИ: 19.4–21.4) соответственно. При повышении концентрации в сыворотке (Nc > 667 BAU/мл, RBD > 450 BAU/мл) доля лиц с соответствующими уровнями составляла 20.2% для Nc (95% ДИ: 19.2–21.3) и 54.2% для RBD (95% ДИ: 52.9–55.5). Охват вакцинацией составил 72.6% (95% ДИ: 71.5–73.7). Наиболее часто использовались Sinopharm/BIBP (32.4%), AZD1222 (22.3%) и Gam-COVID-Vac (21%). Остальные вакцины (CoronaVac, mRNA-1273, BNT162b2, CoviVac) использовали 24.3% привитых. При суммировании вакцин по платформам установлено, что: векторные вакцины применялись в 40.34% (95% ДИ: 33.57–42.39) случаев; цельновирионные вакцины использовались в 26.83% (95% ДИ: 24.76–32.20); и мРНК-вакцины использовались в 6.33% (95% ДИ: 4.84–8.91). Вывод. Эпидемическая ситуация в Армении к апрелю 2022 г. характеризовалась высоким уровнем коллективного иммунитета, не зависящим от возрастных и региональных факторов. Наибольшее распространение получили векторные и цельновирионные вакцины.
Молекулярная детекция и филогеография гипервирулентного субтипа Mycobacterium tuberculosis Beijing 14717-15
Аннотация
Цель исследования — разработка метода для выявления штаммов Mycobacterium tuberculosis, относящихся к высоколетальному, гипервирулентному и мультирезистентному кластеру Beijing 14717-15 и его применение для скрининга ретроспективных коллекций M. tuberculosis из различных регионов России. Изученная коллекция включала образцы ДНК M. tuberculosis, собранные в результате популяционных исследований. Сполиготипирование и генотипирование 24 локусов вариабельного числа тандемных повторов проводили по стандартным протоколам. Филогенетический анализ проводили на основе данных полногеномного секвенирования. Полиморфизм в геномной позиции 2423040 A > G, специфический для кластера Beijing 14717-15 (согласно номенклатуре MIRU-VNTRplus.org), выявляли с использованием метода ПЦР-ПДРФ и рестриктазы HhaI. Проведенный биоинформационный и филогенетический анализ данных полногеномного секвенирования 205 штаммов ранней древней сублинии генотипа Beijing M. tuberculosis показал, что штаммы с профилем VNTR 14717-15 и близкие ему группировались в монофилетический кластер родственных штаммов, который мы определили как Beijing 14717-15-кластер. Среди SNP, специфичных для кластера 14717-15, мы выбрали функционально нейтральный SNP в геномной позиции 2423040 A > G (Rv2161c Val33Ala) и разработали метод его детекции в формате ПЦР-ПДРФ. Далее этот метод был применен для скрининга коллекций ДНК из регионов Европейской и Азиатской частей России и стран Азии. Результаты демонстрируют присутствие штаммов кластера Beijing 14717-15 только в Азиатской части России с пиком в Бурятии (18%). Таким образом, нами разработан метод детекции гипервирулентного и высоколетального генетического кластера M. tuberculosis Beijing 14717-15 на основе выявления специфической мутации в гене Rv2161c с помощью ПЦР с последующей HhaI-рестрикцией продукта ПЦР и электрофорезом в агарозном геле для дискриминации дикого и мутантного аллелей. Преимуществами предлагаемого способа являются быстрота, простая и однозначная интерпретация результатов, возможность выявления контаминации и микст-инфекции, пригодность для производительного анализа больших коллекций штаммов М. tuberculosis.
Генотипирование риккетсий, циркулирующих на территориях Республики Алтай и Хабаровского края
Аннотация
Цель — верификация возбудителя сибирского клещевого тифа (СКТ) при микст-инфицированности иксодовых клещей на территории Республики Алтай и Хабаровского края с применением комплексного молекулярно-биологического подхода. Материалы и методы. Материалом для исследования служили 304 имаго иксодовых клещей шести видов. Сбор клещей проводился на территории Республики Алтай и Хабаровского края в 2014–2022 гг. ДНК риккетсий идентифицировали методом двухраундовой ПЦР с использованием родо- и видоспецифических праймеров генов gltA и ompA с последующим секвенированием и с помощью ПЦР с использованием наборов реагентов «РеалБест ДНК R. sibirica/R. heilongjiangensis» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Результаты. Частота выявления ДНК риккетсий в иксодовых клещах в Республике Алтай составила 82,6% (ДИ: 69,1–96,1), в Хабаровском крае — 53,1% (ДИ: 44,9–61,3). Видовой состав риккетсий в различных видах иксодовых клещей на этих территориях, эндемичных по сибирскому клещевому тифу, характеризуется наличием микст-инфицированности. ДНК Rickettsia sibirica и R. raoultii удалось обнаружить в клещах Dermacentor nuttalli, Haemaphysalis concinna, D. silvarum. В клещах Ixodes persulcatus, I. pavlovskyi и в гибридах I. pavlovskyi/persulcatus выявлена ДНК только Candidatus R. tarasevichiae. ДНК R. heilongjiangensis обнаружена в клещах H. concinna в Хабаровском крае. В клещах D. nuttalli и H. concinna из Республики Алтай выявлена только ДНК Candidatus R. tarasevichiae. ДНК «классического» патогенного вида — R. sibirica выявлена в клещах D. nuttalli и H. concinna в Республике Алтай, клещах D. silvarum, H. concinna и H. japonica douglasi — в Хабаровском крае. Кроме того, в Хабаровском крае в клещах H. concinna обнаружена ДНК — R. heilongjiangensis, в клещах H. japonica douglasi выявлен фрагмент ДНК, общий для R. sibirica subsp. mongolitimonae и R. conorii, что требует дальнейшего изучения. ДНК Candidatus R. tarasevichiae детектирована в клещах рода Ixodes (I. persulcatus, I. pavlovskyi и их гибридах), в Республике Алтай — в клещах D. nuttalli и H. concinna. ДНК R. raoultii выявлена в клещах рода Dermacentor — D. nuttalli — в Республике Алтай и D. silvarum в Хабаровском крае. Выводы. При молекулярно-биологическом мониторинге риккетсий на эндемичных территориях выявление R. raoultii «маскирует» присутствие этиологического агента СКТ — R. sibirica. Этот феномен позволяет объяснить высокий уровень заболеваемости СКТ на изучаемых территориях при редкой выявляемости ДНК R. sibirica при молекулярно-биологическом скрининге в иксодовых клещах.
Противовирусные свойства вердазилов и лейковердазилов и их активность в отношении энтеровирусов группы B
Аннотация
Энтеровирусы — группа безоболочечных вирусов рода Enterovirus семейства Picornaviridae, вызывающих разнообразные заболевания человека: от острых респираторных и кишечных до более тяжелых, включая полиомиелит, энцефалит, миокардит, панкреатит. На сегодняшний день отсутствуют зарегистрированные противовирусные препараты прямого действия для терапии энтеровирусных инфекций, вакцинация доступна только для профилактики полиомиелита и инфекции, вызванной энтеровирусом 71. Перспективен поиск молекул — ингибиторов жизненного цикла энтеровирусов для разработки новых лекарственных средств для терапии энтеровирусных инфекций. В данной работе были исследованы противовирусные свойства стабильных свободных радикалов — вердазилов, и их предшественников — лейковердазилов. Было показано, что лейковердазилы, в отличие от вердазилов, способны повышать выживаемость пермиссивной клеточной культуры при инфицировании вирусом Коксаки. Был исследован спектр активности соединения-лидера в отношении РНК-содержащих и ДНК-содержащих вирусов человека (методом снижения титра вирусного потомства) и его предполагаемый механизм действия (в тесте на время добавления исследуемого соединения). Соединение-лидер мощно подавляло репродукцию энтеровирусов группы В in vitro, обладало слабой активностью в отношении вируса гриппа А, при этом активность в отношении вируса герпеса 1 типа и аденовируса 5 типа отсутствовала. Наблюдалось максимальное снижение вирусных титров при добавлении этого соединения к инфицированным клеткам на ранних и средних стадиях жизненного цикла вируса. Таким образом, заключили, что исследованное соединение обладает выраженной ингибирующей активностью в отношении энтеровирусов группы В, при этом оно не относится к классу ингибиторов связывания капсида (в отличие от вещества сравнения плеконарила) и не проявляет вирулицидных свойств. Ранее были описаны антиоксидантные свойства лейковердазилов. Известно, что многие вирусные инфекции сопровождаются образованием активных форм кислорода и окислительным стрессом, а ряд соединений с антиоксидантными свойствами обладают противовирусным потенциалом. Необходимо расширить библиотеку лейковердазилов за счет направленных химических модификаций, выполнить дальнейшие исследования механизма действия лейковердазилов и исследования in vivo на животных моделях энтеровирусных инфекций. Тем не менее результаты исследования могут быть полезными для будущей разработки новых противовирусных препаратов для терапии энтеровирусной инфекции.
Фармацевтическая активность синтетического гетероциклического (C15H12N5OCl) соединения в отношении Entamoeba histolytica и Giardia lamblia
Аннотация
Актуальность. Кишечные паразиты являются одними из наиболее важных инфекционных агентов, влияющих на здоровье человека. Действительно, при отсутствии доступного варианта лечения такие паразиты могут представлять реальную проблему для здоровья населения. В настоящем исследовании мы впервые исследовали действие нового синтетического гетероциклического соединения [(C15H12N5OCL)2-(бензо(d)(1,2,3)триазол-1-ил)-N-бензилиденацетогидразин] в отношении двух кишечных паразитов (Entamoeba histolytica и Giardia lamblia). Методы. Тестируемые изоляты паразитов были собраны от амбулаторных пациентов в Главной детской больнице в Киркуке, Ирак, в период с сентября 2019 г. по январь 2020 г. Таким образом, мы изучили фармацевтическую активность использованного соединения in vivo и in vitro в отношении обоих паразитов. Токсичность вещества изучалась по некоторым показателям крови и функциональным пробам печени и почек. Результаты. После пяти дней лечения действие препарата in vivo на G. lamblia привело к степени ингибирования 88,2% при дозе 1 мг/кг. С другой стороны, мы наблюдали, что влияние указанного синтетического вещества на культуру E. histolytica было очень близко к действию метронидазола. Максимальный результат был получен при концентрации 1 г/мл через 72 ч инкубации со степенью ингибирования 89,4%. Соединение не влияло на показатели крови или изучаемые функции печени и почек. Заключение. Можно сделать вывод, что данное вещество обладает высокой эффективностью как в отношении E. histolytica, так и в отношении G. lamblia и не оказывает токсического действия. Таким образом, соединение может быть эффективным фармпрепаратом в отношении кишечных простейших паразитов, включая E. histolytica и G. lamblia, а также альтернативой или конкурентом доступных в настоящее время лекарственных средств.
Клиническая характеристика и лабораторные исследования у доношенных новорожденных с сепсисом во Вьетнамской Национальной Детской Больнице (Северный Вьетнам)
Аннотация
Актуальность. Сепсис — опасное для жизни состояние, развивающееся в ответ на инфекционный агент и вызывающее полиорганное поражение. Сепсис у новорожденных часто имеет тяжелые последствия, приводя к инвалидности, а нередко и к летальному исходу . Вьетнам, страна Юго-Восточной Азии, отличается одним из самых высоких показателей инфекционных заболеваний в мире (высокий уровень инфицирования, инвалидности и смертности), а также является страной со средним уровнем дохода и стратифицированной системой здравоохранения. Цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить клинико-лабораторные характеристики пациентов с сепсисом во Вьетнамской национальной детской больнице. Материалы и методы. Описательное исследование было проведено с участием 85 доношенных новорожденных с сепсисом, поступивших во Вьетнамскую национальную детскую больницу в период с декабря 2019 г. по апрель 2021 г., имевших не менее 2 клинических симптомов и 2 лабораторных признаков в соответствии с критериями оценки неонатального сепсиса (Европейское агентство по лекарственным средствам, 2010 г.) в сочетании с положительными результатами посева крови. Результаты. Общие клинические симптомы у новорожденных с сепсисом включали вялое сосание (89,4%), дыхательную недостаточность (69,4%), лихорадку (51,8%), тахикардию (52,8%) и шок (25%). Преобладали больные с анемией (72,9%). Больные с повышенным содержанием лейкоцитов составили 41,2%, с пониженным содержанием лейкоцитов — 15,4%, с тромбоцитопенией — 49,6%. У большинства пациентов был повышен СРБ (88,3%). Среднее значение nCD64 составило 10167,1±6136,9 связанных молекул/клетку, mHLA-DR — 9898,4±14173,9 связанных молекул/клетку. Индекс сепсиса составил 274,6±287,5. Выводы. Нами обнаружены различия в клинических характеристиках и лабораторных показателях у доношенных новорожденных с сепсисом в Национальной детской больнице. Следует дополнительно исследовать показатели nCD64, mHLA-DR и индекс сепсиса, которые можно рассматривать как возможные рутинные биомаркеры в диагностике неонатального сепсиса.
Системный кандидозный диагностический тест с использованием шкалы Candida Score и подсчетом моноцитов у недоношенных новорожденных с поздним сепсисом: исследование в стране с ограниченными ресурсами
Аннотация
Введение. Candida является причиной большинства системных грибковых инфекций, играющих роль в патофизиологии сепсиса у новорожденных, особенно у недоношенных детей с поздним началом сепсиса. Шкала Candida score может использоваться для оценки возникновения системного кандидоза, где балл > 2.5 может точно идентифицировать пациентов с высоким риском заражения кандидозом. Моноциты также играют важную роль в предотвращении инвазии Candida. Материалы и методы. В настоящем исследовании использовался дизайн перекрестного исследования. Данные были собраны у недоношенных детей с поздним сепсисом при подозрении на системный кандидоз в стационаре для новорожденных, в период с ноября по декабрь 2021 г. Для соответствия критериям обработки и анализа данных требуется минимум 31 образец. Полученные данные были обработаны и проанализированы с использованием метода рабочих характеристик приемника (ROC) для получения значения площади под кривой (AUC). На основе кривой AUC осуществлялся поиск наиболее оптимального пересечения для получения значений чувствительности и специфичности. Результаты. Из 31 обследованных лиц количество с положительными результатами ПЦР составило 27 (76.93%), а с отрицательными — 4 респондента (12.9%). Среднее значение плотности ПЦР в положительной группе испытуемых составило 76.93, а диапазон — 40.23–122.78. При этом в группе испытуемых с отрицательным результатом значение плотности ПЦР равнялось 0. Результаты диагностического теста Candida score показали, что чувствительность составила 81%. Более высокая чувствительность и специфичность > 70% были обнаружены при комбинированном исследовании с использованием шкалы Candida score и подсчетом количества моноцитов в соответствии с отсечкой по сравнению с раздельными исследованиями. Выводы. Комбинированное исследование с использованием шкалы Candida score и подсчетом количества моноцитов может быть использовано в качестве диагностического теста на системный кандидоз у недоношенных детей с поздним сепсисом для рассмотрения вопроса о начале эмпирической противогрибковой терапии, как профилактической, так и терапевтической, особенно в условиях ограниченных возможностей лабораторной диагностики в Индонезии.
Прогнозный анализ эффективности дефицита витамина D с использованием модели дерева решений
Аннотация
Актуальность. Печень является основным местом синтеза витамина D (ВД), участвующего в различных патофизиологических механизмах при различных заболеваниях. Поэтому важно спрогнозировать степень дефицита ВД при помощи различных методов. Наше исследование было направлено на оценку эффективности дерева решений (DT) как одной из моделей машинного обучения для прогнозирования степени дефицита ВД. Методы. Всего было обследовано 292 пациента с ХГВ. У каждого из них определен уровень ВД в сыворотке. Для прогнозирования дефицита ВД использовались независимые характеристики, такие как возраст, пол, вес, рост, содержание цинка, индекс массы тела, жировые отложения, частота и продолжительность воздействия солнечного света и потребление молока. Информация 60% пациентов была внесена в обучающий набор данных случайным образом. Для оценки эффективности дерева решений результаты исследований оставшихся 40% пациентов были использованы в качестве набора данных тестирования. Валидация модели оценивалась кривой ROC. Результаты. Распространенность дефицита ВД среди пациентов была высокой (63,0%). Окончательные результаты экспериментов показали, что классификатор DT обеспечивает точность 96% и превосходит по производительности при обучении и тестировании набора данных о ВД. Кроме того, площади под кривой ROC AUC составила (0,78) при применении алгоритма DT со значимыми переменными путем перекрестной проверки, с получением значения AUC = 0,78 и точности 85,3%. Заключение. Мы пришли к выводу, что уровень цинка в сыворотке крови является важным сопутствующим фактором риска для выявления случаев дефицита ВД. Кроме того, риск дефицита ВД можно предсказать с высокой точностью с использованием алгоритма обучения дерева решений. Полученные данные можно применять в ходе противовирусной терапии у пациентов с ХГВ.
Использование ряда цитокинов, ассоциированных с костной тканью, в качестве предикторов тяжести ревматоидного артрита при помощи нейросетевого анализа
Аннотация
История вопроса. Ревматоидный артрит (РА) характеризуется воспалением синовиальной оболочки, приводящего к повреждению суставов. Многие более ранние исследования оценивали уровень цитокинов для улучшения диагностики РА. В настоящем исследовании для оценки тяжести заболевания с использованием нейронной сети и бинарного логистического регрессионного анализа были исследованы три костных биомаркера: остеопонтин, стромелизин-1 (ММР3) и фактор роста эндотелия сосудов А (VEGF). Методы. В исследовании приняли участие 87 больных РА и 44 здоровых человека контрольной группы. Уровень биомаркеров определяли методом иммуноферментного анализа. Показатель активности заболевания (28 суставов) и С-реактивный белок (CRP) (DAS28-CRP) рассчитывали с помощью DAS28-CRP-калькулятора. Пациенты с DAS28-CRP ≥ 5,1 считаются имеющими высокую активность заболевания (ВАЗ), в то время как при DAS28-CRP < 5,1 заболевание расценивается как умеренно активное (УАЗ). Нейросетевой анализ использовался для дифференциации между группами. Результаты. Результаты исследования показали, что наиболее чувствительным предиктором высокой активности заболевания (HDA) РА является MMP3, за которым следуют остеопонтин и VEGF. Эти три биомаркера могут существенно дифференцировать HDA и MDA с относительно высокой эффективностью (частичный η2 = 0,323, p < 0,001). Группа с ВАЗ имеет значительно более высокий уровень MMP3, CRP, RF и антител к цитруллинированному белку (ACPA), чем группа с УАЗ. MMP3 тесно связан с двумя индикаторами воспаления: СРБ и СОЭ. Выводы. Отмечалось значительное повышение уровня ММР3 в сыворотке крови и уровней у пациентов с РА с ВАЗ по сравнению с группой с УАЗ и контрольной группой. Высокие уровни DAS28, RF, CRP и ACPA были обнаружены у пациентов с ВАЗ по сравнению с группой пациентов с УАЗ. Использование нейросетевого анализа показало, что измеренные биомаркеры помогают прогнозировать ВАЗ у пациентов с РА. MMP3 и остеопонтин являются диагностическими биомаркерами тяжести заболевания РА с чувствительностью 88,9% и специфичностью 68,4% и связаны со многими характеристиками заболевания.
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Характеристика кишечной микрофлоры у детей, получающих противотуберкулезную терапию
Аннотация
Прогресс изучения микробиома у детей и подростков, его влияние на поддержание здоровья рассматривается как одно из наиболее значимых достижений современной медицины. У детей при различных заболеваниях изменяются качественные и количественные показатели микрофлоры кишечного тракта, что служит причиной развития дисбактериоза. Изучение изменений в состоянии микрофлоры кишечника у детей при лечении противотуберкулезными препаратами сохранило свою значимость и актуальность поскольку исследований в этой области недостаточно, что требует более подробного анализа данной проблемы. В представленной статье оценивается состояние микробного биоценоза кишечника детей, получающих противотуберкулезное лечение. Цель исследования: изучить микробный пейзаж толстокишечного содержимого у детей, получающих противотуберкулезную терапию. Материалы и методы. В исследовании включены 24 ребенка с установленным диагнозом туберкулеза органов дыхания, получающих лечение в условиях круглосуточного стационара Кузбасского клинического фтизиопульмонологического медицинского центра им. И.Ф. Копыловой. Исследование кишечной микрофлоры проводили количественным бактериологическим методом. Материалом исследования служил кал, забранный в стерильный одноразовый контейнер, который доставляли на базу кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии ФГБОУ ВО КемГМУ Минздрава России. Результаты. У всех детей, получающих противотуберкулезную терапию, был выявлен дисбиоз с преобладанием микроэкологических нарушений II (41,7%) и III (37,3%) степени. Микробный пейзаж кишечника характеризовался снижением количественного содержания представителей облигатной флоры Bifidobacterium spp. у 66,7% детей и Lactobacillus spp. у 45,8%, увеличением количества факультативных микроорганизмов — E. coli lac+ и Citrobacter freundii — у 12,5%. Поддержание полноценной и активной нормобиоты кишечника возможно при обеспечении ее динамического контроля у больных туберкулезом детей во время лечения. Результаты изучения особенностей микробиоты позволяют предположить, что пациенты нуждаются в пробиотической терапии во время лечения туберкулеза. Выводы. Микроэкологические нарушения у детей при противотуберкулезной терапии характеризовались снижением количественного содержания представителей облигатной флоры и увеличением количества факультативных микроорганизмов. Также в материале были выделены различные виды грибов рода Candida.
Особенности развития аутоиммунной патологии в условиях митохондриальной дисфункции у крыс
Аннотация
Центральная роль митохондрий в процессах энергообеспечения и реализации клеточной смерти делает указанные органеллы одним из перспективных объектов исследования патогенеза иммуновоспалительных заболеваний. Цель: изучить особенности патогенеза в условиях адъювант-индуцированной аутоиммунной патологии на фоне митохондриальных нарушений у крыс. Материалы и методы. Крысы линии Wistar, разделенные на группы негативного контроля (растворитель), позитивного контроля (однократное подкожное введение полного адъюванта Фрейнда (ПАФ) из расчета 0,1 мл/200 г веса), опытную (введение ПАФ 0,1 мл/200 г веса и через 5 недель купризон 0,2% по массе от корма). По окончании эксперимента (7 недель) животных тестировали в модели «открытое поле», усыпляли и проводили забор биоматериала для определения массовых коэффициентов внутренних органов, гематологических и гистологических исследований. Рассчитывали среднее, стандартную ошибку среднего; сравнение гипотез проводили по парному критерию Стьюдента. Результаты. В условиях нарушения иммунологической толерантности у крыс выявлен резко сниженный набор массы тела за исследуемый период (негативный контроль +74,7 г, позитивный контроль +10,3 г), на фоне модельной дисфункции митохондрий отмечено общее снижение массы на 6,7 г. Значения массовых коэффициентов свидетельствуют об относительной редукции массы печени, почек, селезенки и тимуса у экспериментальных животных. Количество лейкоцитов (× 109/л): негативный контроль — 8,68±0,37, позитивный контроль — 10,98±1,03 (p < 0,05), опыт — 12,28±0,63 (р < 0,001). В лейкоцитарной формуле и красном ростке существенных изменений не выявлено. На фоне модельной аутоиммунной патологии количество тромбоцитов увеличилось на 22,5% (р < 0,05), а в условиях введения купризона — снизилось на 6,3% (относительно негативного контроля). Митохондриальная дисфункция явилась причиной резкого снижения двигательной активности у крыс: количество пересеченных секторов у животных позитивного контроля составило 55,50±6,91, у опытных — 44,50±3,60 (при сравнении между группами р < 0,001). Позитивный контроль: в селезенке выявлено разрастание лимфатических узелков, просветление герминативных центров, уплотнение стенок пульпарных и центральных артерий; в красной пульпе обнаруживались единичные очаги кровоизлияний. Опыт: различная по степени выраженности атрофия лимфоидных фолликулов (относительно группы негативного и позитивного контролей), в красной пульпе многочисленные очаги кровоизлияний с гемосидерозом. Заключение. Дисфункция митохондрий сопровождается усилением патогенетических признаков аутоиммунной патологии, что может служить одним из ключей к пониманию механизмов развития заболеваний иммунной системы.
Опыт микробиологического мониторинга жидкости назального лаважа для раннего выявления и профилактики бактериальных осложнений легких у пациента с муковисцидозом
Аннотация
Тяжесть осложнений при муковисцидозе определятся микроорганизмами, колонизирующими нижние дыхательные пути. Однако параназальные синусы также способны быть резервуаром агрессивных патогенов. Нами был разработан способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования. В качестве клинического примера, иллюстрирующего возможности применения данной методики, приводится описание динамики микрофлоры пациента с муковисцидозом. У пациента отмечалась клиническая и микробиологическая картина эрадикации P. aeruginosa из легочной ткани, в связи с чем было остановлено проведение антибактериальной терапии. Спустя 6 месяцев было проведено исследование микрофлоры жидкости назального лаважа пациента с параллельным посевом мокроты. Получен рост культуры P. aeruginosa 102 КОЕ/мл, в мокроте роста культуры P. aeruginosa получено не было. Для решения вопроса о происхождении данного штамма была проведена оценка степени генетического родства между 5 штаммами, полученными от пациента в период с 2008 по 2016 гг. на основании их белкового профилирования. В качестве контрольного штамма был использован типовой штамм P. aeruginosa АТТС 27853. Установлено, что штаммы, выделенные от пациента в 2009 и 2016 гг., являются идентичными. Это обстоятельство свидетельствует о том, что проведенная антибактериальная терапия привела к эрадикации возбудителя в ткани легких, но при этом не воздействовала на него в верхних дыхательных путях. Спустя 3 месяца вновь был получен рост культуры P. aeruginosa в мокроте. Пациенту назначена антибактериальная терапия, включающая введение ингаляционных антибактериальных препаратов в параназальные синусы. При повторном исследовании жидкости назального лаважа с параллельным посевом мокроты пациента спустя 3 месяца получен рост культуры P. aeruginosa 101 КОЕ/мл из жидкости назального лаважа, то есть отмечена тенденция к снижению титра возбудителя в верхних дыхательных путях. В мокроте роста культуры P. aeruginosa получено не было. Пациент отнесен к группе риска по колонизации нижних дыхательных путей штаммами из верхних дыхательных путей. Клинический пример иллюстрирует необходимость и актуальность проведения регулярного микробиологического исследования жидкости назального лаважа с целью раннего выявления клинически значимых возбудителей и проведения профилактических мероприятий по недопущению их распространения в нижние дыхательные пути.
Взаимодействие SARS-CoV-2 и ренин-ангиотензиновой системы: краткий обзор последних данных
Аннотация
Коронавирус SARS-CoV-2 является причиной коронавирусной болезни (COVID-19), вызвавшей недавнюю глобальную пандемию, которая унесла тысячи жизней во всем мире и представляет собой проблему для здоровья, имеющую лишь несколько прецедентов в истории человечества. Ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE-2) был идентифицирован как рецептор, который облегчает доступ к SARS-CoV-2 в клетку; данные показывают, что его концентрация варьируется на разных стадиях вирусной инфекции. Терапевтические агенты, модифицирующие ренин-ангиотензиновую систему (РАС), могут быть способны модулировать концентрацию ACE-2 и различных компонентов системы. В этой статье мы исследуем последние доказательства связи между использованием агентов, модифицирующих RAS, и COVID-19. Наше исследование и данные литературы не предлагают прекращения лечения ACEIs/ARBs в клинической практике, поскольку для этого отсутствуют надежные доказательства. Тем не менее мы рекомендуем провести дальнейшие хорошо структурированные эпидемиологические исследования этой деликатной темы, результаты которых могут способствовать появлению новые принципов терапии COVID-19.
В ПОМОЩЬ ПРАКТИЧЕСКОМУ ВРАЧУ
Клинический случай тяжелого течения COVID-19 у ребенка на фоне морбидного ожирения
Аннотация
Пандемия коронавирусной инфекции характеризуется низким процентом осложнений и тяжелых форм у детей по сравнению со взрослым населением. Однако в литературе описаны случаи тяжелого течения COVID-19 у детей с коморбидными состояниями. К таким фоновым заболеваниям относится ожирение. Целью настоящего исследования стал анализ тяжелого течения новой коронавирусной инфекции на фоне морбидного ожирения у пациентки педиатрического профиля. Материалы и методы. Изучена вся сопроводительная медицинская документация пациентки. Результаты и обсуждение. Из анамнеза жизни известно, что больную длительное время беспокоил интенсивный прирост массы тела, по поводу которого неоднократно проходила обследования. В 2018 г. впервые диагностирован гипоталамический синдром пубертатного периода, по поводу которого пациентка принимала на постоянной основе гипогликемические и гипотензивные препараты, гепатопротекторы. В эпидемиологическом анамнезе установлен факт внутрисемейного контакта по COVID-19 с матерью. Основное заболевание началось остро, с подъема температуры тела до 39–39,5°C, кашля и слабости. На протяжении I недели болезни пациентка не обращалась за медицинской помощью и лечилась самостоятельно без должного эффекта. При измерении сатурации был отмечен низкий уровень кислорода (SpO2 71%). В связи с этим больной была выполнена компьютерная томография органов грудной клетки и выявлено двустороннее интерстициальное полисегментарное поражение легких с признаками консолидации. После экстренной госпитализации больной была назначена эмпирическая антибактериальная терапия, противоспалительное и антитромботическое лечение, а также оказана респираторная поддержка. В стационаре был получен положительный результат ПЦР мазка из зева и носа на SARS-CoV-2. В связи с плохим ответом на терапию больная была переведена в респираторный госпиталь. На момент поступления состояние было расценено как тяжелое за счет выраженной дыхательной недостаточности и наличия преморбидного фона. Комплекс лечебных мероприятий включал оксигенотерапию, антибактериальную и антикоагуляционную терапию, а также препараты сурфактанта и аналог нуклеозидов Ремдесивир. На фоне лечения отмечена положительная динамика, и через 6 дней госпитализации пациентка более не нуждалась в респираторной поддержке. По результатам повторной компьютерной томографии диагностирована двусторонняя интерстициальная полисегментарная пневмония с поражением легочной ткани до 95%. В последующие дни госпитализации состояние пациентки оставалось стабильным, признаки дыхательной недостаточности отсутствовали. На 20 день болезни больная была выписана из стационара с полным клиническим выздоровлением. Заключение. Данный клинический случай демонстрирует роль преморбидного фона в утяжелении клинической картины новой коронавирусной инфекции у ребенка. Тщательное изучение особенностей анамнеза является необходимым у пациентов любого возраста, даже с неосложненным течением болезни.
Клинический случай инфицирования SARS-CoV-2, осложненного нефрогенным отеком легких и COVID-ассоциированным пневмонитом, альвеолитом
Аннотация
COVID-19 — заболевание с высокой степенью передачи, особенно тяжело протекающий у пациентов с нефрогенной гипертензивной болезнью и хронической болезнью почек, так как у них частота инфекций всех видов выше, чем в общей популяции. Цель исследования — описание клинического случая инфицирования SARS-CoV-2, осложненного нефрогенным отеком легких и COVID-ассоциированным пневмонитом, альвеолитом. Больная К.С., 1975 г. рожд., в течение суток находилась на стационарном лечении в Больнице скорой медицинской помощи в связи с жалобами на повышение артериального давления до 180–200/110–120 мм рт.ст., температуры до 38,7°С, сухой кашель, чувство тяжести в грудной клетке, изменение цвета мочи. Диагноз COVID-19 был подтвержден при исследовании назофарингеального мазка методом ПЦР. По данным компьютерной томографии выявлена картина двустороннего COVID-ассоциированного пневмонита, альвеолита, с поражением 75%. На электрокардиограмме выявлены признаки гипертрофии миокарда левого желудочка. По результатам ультразвукового обследования определялись многочисленные кисты в почках. Общий анализ мочи при поступлении в стационар: лейкоциты — 499, эритроциты — 386. Скорость клубочковой фильтрации (CKD-EPI: 29 мл/мин/1,73 м2) соответствовала IV стадии хронической болезни почек. По данным коагулограммы: фибриноген: 32,3 (1,6–4,0) г/л, D-димер: 663 (0–250). Несмотря на проводимое лечение, состояние пациентки ухудшалось, нарастали явления сердечно-легочной и почечной недостаточности, что привело к летальному исходу. При вирусологическом исследовании секционного материала: РНК коронавируса SARS-CoV-2 была обнаружена в легком и почках. Выявлены признаки двустороннего COVID-ассоциированного пневмонита, альвеолита с диффузными клеточными инфильтратами в сочетании с изменениями со стороны альвеолярного аппарата, признаками отека легких. Со стороны сердца — отек интерстиция, мышечные волокна фрагментированные, часть из них — гипертрофирована, отмечалась волнообразная деформация кардиомиоцитов, смазанность поперечной исчерченности. Артерии с утолщенными склерозированными стенками. В почках — диффузное повреждение проксимальных канальцев нефрона с участками кортикального и проксимального некронефроза, участками фибриноидного набухания. Заключение. Причиной смерти пациентки 45 лет, явилось тяжелое течение двустороннего COVID-ассоциированного пневмонита, альвеолита, способствовавшего развитию ренальной медуллярной гипоксии и кардио-ренальному синдрому 1 типа, которые привели к раннему нефрогенному отеку легких.
МЕТОДЫ
Метод селективного выделения Acinetobacter baylyi из речной воды
Аннотация
Цель исследования — повышение селективности выделения бактерий Acinetobacter baylyi из речной воды. При разработке селективной среды использовали 5 штаммов A. baylyi, из них 4 были выделены из воды реки Невы, 1 — из клинического материала. Штаммы A. baylyi идентифицировали по комплексу фенотипических признаков и/или с помощью масс-спектрометрического метода (MALDI-ToF MS). В предварительных исследованиях было установлено, что бактерии A. baylyi не утилизируют L-фенилаланин в качестве единственного источника углерода и азота, а также в качестве единственного источника углерода на среде с минеральными источниками азота, но утилизируют L-фенилаланин в качестве единственного источника только азота, если он дополняется этанолом в качестве единственного источника углерода. На основе этого свойства A. baylyi была разработана селективная среда для выделения этих бактерий из речной воды. Состав и приготовление жидкой селективной среды: в 1 л дистиллированной воды вносят (г/л) L-фенилаланин (CAS 63-91-2) 2,0; NaCI 5,0; Na2SO4 2,0; KH2PO4 1,0; K2HPO4 2,5; MgSO4 0,1; растворяют при нагревании, кипятят 5 мин, добавляют в теплую среду 4 мл 96-градусного этанола, проверяют рН 7,2±0,2; разливают по 40 мл в стерильные флаконы. Плотная селективная среда: содержит на 1 л дистиллированной воды те же ингредиенты и дополнительно 15,0 г агара; приготовление такое же, среду разливают в стерильные чашки Петри. Методика применения селективной питательной среды для выделения A. baylyi из речной воды: воду реки Невы засевают в объеме 10 мл во флакон с 40 мл жидкой селективной среды, инкубируют в аэробных условиях при 28°С 48 ч, затем пересевают бактериологической петлей обогащенный материал из флакона на поверхность плотной селективной среды такого же состава в две чашки; инкубируют посевы в аэробных условиях при 28°С 48 ч. Отбирают для последующей идентификации по 10 изолированных колоний, пересевают их на секторы питательного агара, инкубируют при 28°С 24 ч и идентифицируют изоляты по комплексу фенотипических признаков, характерных для A. baylyi, и/или методом MALDI-ToF MS. В данном примере из 20 выделенных изолятов 19 являлись бактериями A. baylyi (95% изолятов). Исследование по указанной методике еще трех проб воды из реки Невы показали результаты одинаковой узкоселективной направленности — 90–95% изолятов составляли бактерии A. baylyi.