Том 9, № 2 (2019)

В обзоре освящены имеющиеся к настоящему времени данные, показывающие наличие врожденных осо- бенностей иммунного реагирования, предрасполагающих к рецидивирующему и инвазивному течению пневмо- кокковых инфекций у детей. Капсульные формы грампозитивной бактерии Streptococcus pneumoniae (пневмококка) являются в настоящее время ведущей бактериальной причиной заболеваемости и смертности детей раннего воз- раста, особенно в развивающихся странах и в популяциях с низким социально-экономическим статусом. При от- сутствии противопневмококковой вакцинации у значительной части носителей развиваются неинвазивные (пнев- мония, средний отит, синусит) и тяжелые инвазивные (бактериемия/септицемия, менингит) пневмококковые заболевания. Успешное проникновение пневмококка через слизистые оболочки зависит от большого количества факторов, как со стороны самой бактерии (факторов вирулентности), так и со стороны комплекса защитных ком- понентов иммунной системы организма-хозяина. Система TLR сигналинга играет важнейшую роль в неспеци- фической защитной реакции организма человека при его первой встрече с патогеном. TLR различных типов от- носятся к первому из описанных семейств паттерн-распознающих мембранных молекул, для которых лигандами являются специфические участки внешней оболочки бактерий. Система комплемента является древнейшим ком- понентом врожденного иммунитета, основной функцией которого является преимущественно интравас кулярная элиминация бактериальных агентов. Кроме того, протеины комплемента играют роль свое образного моста между системами врожденного и адаптивного иммунитета, обеспечивая адекватные условия для созревания и дифферен- циации В- и Т-лимфоцитов. Поскольку пневмококк секретирует IgA-протеазу, защитная роль локально продуци- руемых антител класса IgA при реализации активного инфекционного процесса в этом случае невелика. Именно поэтому дефекты адаптивного В-клеточного звена иммунитета и системы комплемента занимают ведущую пози- цию среди наследственно обусловленных причин тяжелого и рецидивирующего течения пневмококковых инфек- ций у детей. Мы пришли к выводу, что наиболее важными врожденными иммунными дефектами для инвазивных и рецидивирующих пневмококковых инфекций являются дисфункции B-лимфоцитов, дефицит компонентов комплемента и дисфункции рецептор-распознающих рецепторов (Toll-подобных рецепторов: TLR-2, -9, -4; про- теина-адаптера MYD88; ферментов TLR-каскада: IRAK4, NEMO; NOD-подобных рецепторов: NOD2, NLRP3; лек- тинов C-типа: MBL, Deсtin-2, а также, возможно, фиколина). Указанные данные целесообразно использовать при планировании иммунологического тестирования детей с инвазивными и рецидивирующими пневмококковыми инфекциями и организации иммуногенетических исследований в этой области. 

Распространенность рецидивирующих воспалительных заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки велика, однако роль микробов в развитии данной патологии оставалась неясной. Переломный момент в изучении этиологии воспалительных заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта произошел после опубликования B.J. Marshall и J.R. Warren (1983) результатов выделения Helicobacter pylori со слизистой оболочки желудка больного, страдающего гастритом, и методах культивирования этих бактерий. Большинство бактерий вида H. pylori при колонизации организма находятся в свободном состоянии, но около 20% присоединяется к эпителиальным клеткам желудка. Были проанализированы последствия взаимодействия H. pylori с эпителием слизистой оболочки желудка и активации защитных механизмов, вызванных колонизацией и циркуляцией бактерий. Показано, что наряду с запуском провоспалительного ответа, индуцированного белками VacA и CagA, в котором последний способен вызывать комплекс ответных реакций, как в фосфорилированной, так и в нефосфорилированной форме, H. pylori повреждает межклеточные контакты, нарушает полярность и пролиферацию эпителия, активирует фосфатазы SHP-2, что приводит к развитию различных клеточных ответов. Рассмотрены механизмы запуска митоген-активируемого протеинкиназного каскада (MAPK). Обсуждены способность H. pylori регулировать процесс апоптоза, а именно его подавления, через экспрессию киназы ERK и белка MCL1, что облегчает его выживание на слизистой желудка, а также позитивное влияние циркуляции бактерий на выживание эпителиоцитов посредством индукции антиапоптотических факторов в клетках эпителия желудка. В значительной мере такие процессы, как активация транскрипционных факторов (NF-κB, NFAT, SRF, T-клеточный лимфоидный энхансерный фактор [TCF/LEF]), регуляция активности белка MCL1, который в свою очередь является одним из основных антиапоптотических факторов, и индукция синтеза фактора торможения миграции (MIF) обусловливают персистенцию H. pylori. Рассмотрено участие цитотоксина VacA в индукции апоптоза эпителиоцитов посредством запуска каскадных реакций, осуществляемых каспазами. Инфицирование H. pylori сопровождается секрецией комплекса провоспалительных цитокинов, причем данные подтверждаются как in vitro, так и in vivo. Основную роль в выработке данных цитокинов играет уреаза, которая активирует транскрипционный фактор NF-κB. Кроме того, сигнальные системы эпителия желудка могут быть активированы в результате связывания бактерий с рецептором на поверхности эпителиоцитов (взаимодействие с CD74 и молекулами II класса главного комплекса гистосовместимости). Рассмотрено участие различных субпопуляций CD4⁺ T-клеток, в частности Т-хелперов 17 (Th17), в формировании иммунного ответа к антигенам H. pylori в слизистой оболочке желудка. 

Туляремия является антропозоонозной инфекцией, вызываемой бактериями Francisella tularensis. В клинической и санитарно-эпидемиологической практике традиционными методами диагностики этого заболевания являются серологические реакции по обнаружению специфических антител, которые служат основанием для постановки диагноза у больного и позволяют оценивать напряженность иммунитета вакцинированных людей. Ранее было показано, что специфические антитела в сыворотке крови переболевших туляремией людей, в отличие от вакцинированных живой туляремийной вакциной F. tularensis 15 НИИЭГ, могут взаимодействовать со специфическими эпитопами на молекулах липополисахаридов, выделенных из штаммов различных подвидов — F. tularensis (ЛПС Ft) и F. novicida (ЛПС Fn), тогда как в сыворотках крови вакцинированных людей иммуноглобулины к ЛПС Fn отсутствуют. Нами были проведены эксперименты по выявлению антител, обладающих сходной специфичностью, с использованием лабораторных животных различных видов — мышей, морских свинок и крыс, обладающих различной чувствительностью к туляремии, и штамма живой туляремийной вакцины и вирулентных штаммов для моделирования вакцинального и инфекционного процессов соответственно. Разработан методический подход, позволяющий проводить анализ гуморального ответа при моделировании инфекционного процесса у высокочувствительных к туляремии животных — мышей линии BALB/c и морских свинок, заключающийся в предварительной иммунизации живой туляремийной вакциной с последующим заражением вирулентными штаммами F. tularensis. Было показано, что у животных этих видов как после вакцинации, так и после заражения вирулентным штаммами происходит индукция специфических антител к ЛПС Ft. Было отмечено, что для мышей, в отличие от морских свинок и крыс, как при вакцинации, так и при заражении характерны значительно более низкие титры специфических ЛПС Ft-антител. Не удалось обнаружить специфического взаимодействия мышиной сыворотки с ЛПС Fn. У морских свинок, иммунизированных живой туляремийной вакциной с последующим заражением вирулентным штаммом, с помощью дот-блота было выявлено присутствие иммуноглобулинов с различной антигенной специфичностью к эпитопам ЛПС Ft и ЛПС Fn. В сыворотках крыс также появлялись антитела к ЛПС Fn при их инфицировании вирулентными, но не вакцинным, штаммами. Таким образом, на модели экспериментальной туляремии с использованием крыс и морских свинок были подтверждены полученные ранее данные о формировании иммуноглобулинов с различной антигенной специфичностью и продемонстрирована диагностическая значимость и целесообразность использования ЛПС Fn для подтверждения туляремийной инфекции у людей. 

Хронический гепатит В — тяжелое заболевание печени, связанное с персистенцией вируса гепатита В в гепатоцитах человека. Хронический гепатит В является одним из самых распространенных заболеваний в мире. По обновленной статистике, более 250 млн человек хронически инфицированы, и более 1 млн человек умирают ежегодно из-за последствий ХГВ, цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. Основная причина персистенции вируса гепатита В — особая суперспирализованная молекула кольцевой ковалентно замкнутой ДНК в ядре. Современные методы терапии подавляют вирусную инфекцию, но не действуют напрямую на матрицы кольцевой ковалентно замкнутой ДНК, поскольку она существует в ядре гепатоцитов в виде минихромосомы и является недоступной для действия противовирусных препаратов. Как правило, после прекращения курса терапии наступает реактивация инфекции, поэтому прием противовирусных препаратов может быть неопределенно долгим. Одной из современных технологий, способных действовать напрямую на кольцевую ковалентно замкнутую ДНК, является система сайт-специфических нуклеаз CRISPR/Cas9 организма Streptococcus pyogenes. SpCas9 белок можно привлекать к участку ккзДНК с помощью короткого РНК-проводника, в результате чего SpCas9 вносит двуцепочечные разрывы, разрушая или мутируя вирусный геном. Тем не менее на сегодняшний момент использование CRISPR/Cas9 для терапии хронического гепатита В сопряжено с рядом проблем, в том числе с такой, как внецелевое действие нуклеаз (разрезание генома клеток). В последние годы было заявлено о создании нескольких технологий, использование которых может усиливать нуклеолитическую активность CRISPR/Cas9 (модифицированные РНК-проводники) или увеличивать специфичность SpCas9 белка (eSpCas9, более безопасная форма классического белка Cas9). В этой работе было проведено сравнение противовирусного действия CRISPR/Cas9 с классической формой белка SpCas9 и белком eSpCas9 c модифицированными и немодифицированными РНК-проводниками на культуре клеток in vitro. Показано, что система SpCas9 подавляет транскрипцию и репликацию вируса гепатита В на 90%, а также снижает уровень ккзДНК на 94%, тогда как противовирусный эффект при использовании eSpCas9 оказывается существенно ниже. Несмотря на то что модифицированные РНК-проводники должны улучшать нуклеолитическую активность CRISPR/Cas9 систем, модификация РНК-проводников также значительно снижает противовирусное действие CRISPR/Cas9. Таким образом, CRISPR/Cas9 сама по себе обладает высокой эффективностью действия, почти полностью блокируя транскрипцию и репликацию вируса гепатита В. Использование описанных технологий по улучшению свойств CRISPR/Cas9 нерационально при создании методов терапии на основе CRISPR/Cas9, а для элиминации генома вируса следует сосредоточиться на поиске эффективных РНК-проводников. 

Helicobacter pylori вызывает хроническую инфекцию приблизительно у половины населения планеты. Проявления инфекции, вызываемой этим микроорганизмом, варьируют от бессимптомного инфицирования до гастрита и язвенной болезни. Предполагается, что манифестные формы этой инфекции ассоциированы с утратой иммунорегуляции и усилением провоспалительного клеточного иммунного ответа, индукторами которого являются специфичные к H. pylori Т-хелперы. В этой работе мы оценивали степень зрелости СD4⁺ Т-лимфоцитов крови и экспрессию на них хемокиновых рецепторов, участвующих в миграции в желудочно-кишечный тракт (CCR9 и CCR6), Т- и В-клеточные зоны лимфоидных органов (CCR7 и CXCR5). Показано, что при манифестных формах H. pylori-инфекции наблюдается изменение экспрессии хемокиновых рецепторов на Т-хелперах, которое зависит от формы заболевания. При хроническом гастродуодените в крови увеличивается содержание зрелых CD4⁺CD45RO⁺ клеток c рецептором CCR9, и незрелых CD4⁺CD45RO^- клеток, несущих рецептор CXCR5. При сочетании хронического гастродуоденита с язвенной болезнью наблюдается усиление активации зрелых Т-хелперов, что проявляется в увеличении количества СD4⁺CD45RO⁺ICOS⁺ клеток. Также у этих пациентов увеличивается содержание зрелых Т-хелперов, несущих рецептор CCR6 (в основном за счет наиболее зрелых CD4⁺CD45RO⁺CCR7^-CCR6⁺ клеток) и клеток с фенотипом фолликулярных Т-хелперов, появляется минорная группа CD4⁺CD45RO⁺CXCR5⁺CCR6⁺ клеток. В то же время, у пациентов с язвенной болезнью отсутствует увеличение количества CD4⁺CCR9⁺ лимфоцитов в крови. Полученные данные свидетельствуют о различиях в управлении тканеспецифической миграцией Т-хелперов при данных заболеваниях.

На территории Российской Федерации для иммунизации людей по эпидемическим показаниям используется живая аттенуированная вакцина, созданная на основе штамма Y.pestis линии НИИЭГ. Препарат характеризуется высокой эффективностью, однако колебания индивидуальных значений адаптивного иммунитета в ответ на вакцинацию  диктуют необходимость установления генов, контролирующих вариабельность иммунного ответа. Немаловажную роль в этом процессе играет полиморфизм генов HLA (Human Leukocyte Antigen). В ходе нашего исследования определены гаплотипы HLA II класса HLA-DRB1, HLA-DQA1 и HLA-DQB1 у 120 людей, проживающих на территории Прикаспийского природного очага чумы, иммунизированных против чумы. Выявлена корреляция групп аллелей HLA-DRB1*01 (р=0,03), HLA-DRB1*03 (р=0,01), HLA-DRB1*07 (р=0,01) и HLA-DRB1*11 (р=0,05) с продукцией цитокина IL-10. Корреляция с продукцией цитокина TNF-α была выявлена у групп аллелей HLA-DRB1*04 (р=0,05)  и DRB1*12 (р=0,01). Полученные результаты показывают, что полиморфизм генов HLA II класса может оказывать влияние на уровень секреции цитокинов в ответ на иммунизацию против чумы. Изучение генов, регулирующих продукцию факторов иммунитета,  позволит улучшить понимание механизмов, лежащих в основе вариаций иммунного ответа после вакцинации, а также будет способствовать прогнозированию иммуногенности и эффективности разрабатываемых вакцинных препаратов.

Клещевой энцефалит – природно-очаговая вирусная нейроинфекция, которая широко распространена в зоне умеренного климата Евразии. Тяжесть заболевания, которое в ряде случаев приводит к инвалидизации и летальным исходам, обуславливает его высокую эпидемиологическую значимость и является причиной неослабевающего внимания к его профилактике среди населения эндемичных территорий. При этом, эпидемиологические особенности проявления заболевания на различных территориях имеют существенные различия. Республика Саха (Якутия) не относится к эндемичным территориям Российской Федерации. В то же время на территории республики в последнее десятилетие отмечается рост показателей обращаемости населения по поводу присасывания иксодовых клещей. Одним из наиболее информативных критериев оценки интенсивности эпидемического процесса в очагах клещевого энцефалита является показатель иммунологической структуры населения к возбудителю. Поэтому целью настоящего исследования стала оценка состояния естественного популяционного иммунитета к вирусу клещевого энцефалита у населения Республики Саха (Якутия) в условиях роста показателей обращаемости по поводу присасывания клеща. В ходе работы были проанализированы сведения о числе нападений на людей иксодовых клещей, произошедших на территории республики в период с 2001 по 2017 гг. Проведено обследование населения г. Якутска и административных районов республики с регистрацией наибольшего количества обращений населения по поводу присасывания клещей. Обследованию подлежали постоянно проживающие на территории республики и не привитые против клещевого вирусного энцефалита жители. В ходе наблюдения отмечено расширение перечня административных территорий, где были зарегистрированы случаи нападения иксодовых клещей и рост общего количества обращений населения по поводу присасывания клеща. Показано, что наибольшее число пострадавших лиц ежегодно регистрируется в южных районах республики - Алданском, Нерюнгринском, Олекминском, Ленском, Хангаласском, в г. Якутске и его пригородах. Специфические иммуноглобулины к вирусу клещевого энцефалита были обнаружены у 5,7±0,68% обследованных жителей республики, что свидетельствует о контактах населения с возбудителем. Наибольшее число (8,9±1,85%) серопозитивных лиц было выявлено в Намском районе, расположенном в центральной части республики. В целом по субъекту показатели выявляемости антител среди взрослого населения (6,9±0,95%) оказались статистически значимо выше таковых среди детей (3,9±0,89%, р<0,05). Достоверных отличий показателей выявляемости антител у городского (5,8±1,12%) и сельского (5,63±0,84%) населения не установлено.

Коклюшная инфекция остается актуальной проблемой как для зарубежного, так и для отечественного здравоохранения. Рост заболеваемости коклюшем в разных возрастных группах населения заставляет исследователей искать новые пути борьбы с этой инфекцией и совершенствовать методы лабораторной диагностики коклюша. Учитывая непродолжительный эффект бесклеточной и цельноклеточной вакцин, одним из обсуждаемых в литературе вопросов является целесообразность введения второй и даже третьей ревакцинации против коклюша. Цель данной работы — проанализировать опыт и эффективность применения некоторыми странами бесклеточных вакцин, в профилактическом календаре которых используются вторая и третья ревакцинация против коклюша для определения перспективы стратегии и тактики иммунизации против коклюша в России. Анализ заболеваемости коклюшем показал, что в последние годы (2008–2015 гг.) в большинстве стран европейского региона, а также в Австралии, Канаде и США, на фоне высокого охвата прививками регистрируется большое количество заболевших этой инфекцией. Причины, способствующие повышению заболеваемости коклюшем, остались до конца не выясненными. Исследователи пытаются объяснить ситуацию невысоким охватом прививками среди подростков и взрослых; ослаблением иммунной защиты после вакцинации; генетическими изменениями Bordetella pertussis; меньшей продолжительностью протективного иммунитета у детей, привитых бесклеточной вакциной, по сравнению детьми, привитыми цельноклеточной вакциной; повышением информативности и отчетности о заболеваниях, и, наконец, совершенствованием метода лабораторной диагностики путем перехода от серологических и бактериологических к молекулярно-генетическим методам лабораторного исследования. Пытаясь разрешить проблему, ученые ряда стран объединились для обсуждения ситуации и выработки стратегии снижения заболеваемости этой инфекцией. Для нашей страны наиболее актуально усиление и/или совершенствование существующей стратегии иммунизации младенцев с целью обеспечения высокого охвата четырьмя дозами вакцины для снижения риска заболеваемости и смертности детей от коклюша. Представляет интерес и стратегия «кокона», учитывая высокий риск инфицирования детей первых месяцев жизни. Полагаем, что России целесообразно изучить возможность использования бесклеточной вакцины в качестве первой вакцинации детей 2–3 месяца жизни, что, прогнозируемо, увеличит охват прививками этого контингента детей, а также позволит увеличить долю детей, имеющих законченную вакцинацию к 5 месяцам. При этом рациональнее будет сохранить в действующем календаре профилактических прививок количество возрастных групп, подлежащих прививкам против коклюша, так как при расширении возрастных границ вакцинации есть риск увеличения заболеваемости коклюшем среди лиц старшего возраста, диагностика которого у таких лиц достаточно проблематична. 

В данной работе предложен хронобиологический метод изучения межмикробных взаимодействий в бактериально-грибковых ассоциациях на примере женского репродуктивного тракта. Культуры грибов и бактерий выделены у 45 женщин репродуктивного возраста от 19 до 35 лет, имеющие регулярный менструальный цикл, не пользующиеся гормональными контрацептивами, не имеющие в анамнезе гинекологических оперативных вмешательств, абортов, выкидышей с эубиозом и дисбиозом влагалища. У всех пациенток были исключены заболевания, передаваемые половым путем (ВИЧ-инфекция, сифилис, гонорея, трихомониаз, хламидиоз). Активность пролиферации, морфогенеза и фосфолипазы изучали в течение двух суток с 4-х часовым интервалом, в зимнее время года, IV фаза Луны. Результаты статистически обработаны с учетом критерия Стьюдента, критерия Уилкоксона, методу наимелбших квадратов. В первую группу вошли женщины с эубиозом, вторую группу составили пациентки с дисбиозом влагалища. У всех изучаемых культур С. albicans выявлена суточная динамика изучаемых показателей. Грибы, выделенные от здоровых женщин, характеризовались циркадианными (околосуточными) ритмами изучаемых свойств с одним пиком активности. У С. albicans, выделенных от женщин с дисбиозом влагалища, выявлены достоверные ультрадианные (около 12-ти часовые) ритмы с двумя пиками биологической активности всех изучаемых свойств. Согласованность и последовательность проявления физиологических функций клинических изолятов отражала стратегию распределения биологических ресурсов грибов во времени и зависила от формы инфекционного процесса. Экспериментально доказано, что под воздействием экзометаболитов доминантной и ассоциантивной микробиоты существенных изменений амплитудно-фазовых показателей C. albicans, выделенных при эубиозе влагалища, не выявлено. Полученные данные свидетельствовали, что временная организация изучаемых показателей C. albicans, выделенных от здоровых лиц, обладала стабильностью и независимостью от воздействия метаболитов бактерий. Иная закономерность установлена при дисбиозе влагалища. Доминантный микросимбионт ингибировал ритмы грибов, что может иметь значение при реализации лактобактериями колонизационной резистентности биотопа. Влияние метаболитов ассоциантов, характерных для дисбиоза, проявлялось повышение значений мезора, амплитуды, сохранение спектрального состава биоритмов изучаемых свойств, амплитудно - фазововой характеристики, что указывало на усиление или сохранение адаптивных возможностей С. albicans. Следовательно, амплитудно – фазовая характеристика физиологической активности C. albicans. являлась маркером оппозитного (усиление / ослабление) эффекта выживания микросимбионтов в парах «доминант-ассоциант».

В отношении пока неуправляемой норовирусной инфекции имеет место отчетливая тенденция к увеличению частоты ее регистрации, в том числе среди взрослых. При позитивной реакции клинического материала на норовирус симптоматика острой диареи у взрослых нередко отличается от классического патогенетически обусловленного течения норовирусной инфекции, что делает целесообразным проведение клинико-лабораторных сопоставлений. Проводили когортное ретроспективное исследование. Анализировали результаты клинико-лабораторного обследования 146 госпитализированных взрослых больных острой кишечной инфекцией (ОКИ) средней тяжести, в клиническом материале которых (фекалиях) выявляли маркер возбудителя норовирусной инфекции. Специфическое обследование для выявления  различных возбудителей острой диареи наряду с классическими стандартными методами (культуральный, серологический на основе определения специфических антител в диагностическом титре или при его 4-х кратном приросте, иммуноферментный) включало исследование фекалий пациента методом ПЦР с использованием набора «Амплисенс®ОКИ скрин-FL» (Интерлабсервис).

Анализ результатов обследования показал, что наряду с генетическим маркером норовируса у 54,1% взрослых больных острой диареей  одновременно выявляли другие энтеропатогены, в том числе бактериальные  - более, чем у трети (36,3%) пациентов. В клиническом материале пациентов, поступивших на 4 день острой диареи и позднее (в сравнении с теми, кто поступал в первые 3 дня болезни), значимо чаще (в 1,5 раза) выявляли ассоциацию норовируса с другими возбудителями острой кишечной инфекции (р=0,03), преимущественно за счет ассоциации с астровирусом (ПЦР методом) (р=0,04) и с Shigella spp. (культуральным и серологическим методами) (р=0,03).

В клиническом материале пациентов, принимавших антимикробные препараты на догоспитальном этапе, в сравнении с теми, кто эти препараты не использовал, наряду с норовирусом в 2,1 раза чаще одновременно выявляли ротавирус. На результаты детекции других, как бактериальных, так и вирусных энтеропатогенов этот фактор влияния не оказывал.

    При наличии проявлений синдрома колита в группе лиц с позитивной реакцией клинического материала на норовирус велика вероятность вирусно-бактериальной микст кишечной инфекции, что подтвердили выявлением Salmonella spp. культуральным и ПЦР методами, соответственно в 7,6 и 3 раза чаще, чем у больных без колита. У больных с признаками гемоколита в сравнении с теми, у кого гемоколит не документировали, в 11 раз чаще выявляли Salmonella spp. именно культуральным методом (р=0,01).

В статье представлены данные по использованию метода когерентной флуктуационной нефелометрии (КФН) в клинический микробиологической практике. КФН-анализатор позволяет решать две важных задачи – проводить быстрый скрининг мочи на бактериурию за 2-4 часа и определять чувствительность бактериальных культур к антибиотикам за 3-6 часов. В общей сложности исследовано более 650 образцов мочи и показана эффективность КФН-анализатора для предварительного отбора проб на анализ. Метод позволяет выявлять отрицательные образцы, снижая общее количество исследований на 70-80%. Одновременный анализ кривых роста микроорганизмов и их концентрации в моче даёт возможность достигнуть высоких показателей чувствительности и специфичности (95,2% и 96,9%). Также проведено более 250 исследований чувствительности к антибиотикам на КФН-анализаторе, продемонстрирована его высокая эффективность для быстрого определения резистентных свойств как чистых культур, так и микрофлоры мочи без выделения изолятов. Согласие результатов с традиционными методами составило от 84% до 88%. Использование КФН-анализатора совестно с экспресс методами видовой идентификации микроорганизмов (хромогенными питательными средами или масс-спектрометрическим методом) позволит проводить полный анализ мочи за один-два дня. В перспективе КФН-анализатор даст возможность проводить скрининг различных биологических жидкостей человека, а также найдёт применение в широком круге микробиологических задач, в том числе, для ускорения и стандартизации санитарно-биологических исследований.

В статье представлены результаты исследования, связанные с подбором эффективного метода выделения бактериофагов активных в отношении бактерий рода Flavobacterium. Число бактериальных штаммов, используемых в работе - 3. Все штаммы культур получены из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина» и имеют характерные для данного рода (и видов) тинкториальные и биохимические свойства. Исследования состояли из 4 серий опытов. Первая серия опытов была связана с апробацией методики по выделению бактериофага без использования воздействующего фактора. В результате искомых бактериофагов выделено не было. Вторая серия опытов заключалась в апробации метода выделения с использованием индуцирующего фактора – ультрафиолетового облучения. Расстояние до объектов облучения – 0,3 м. Время экспозиции: 1 мин, 3 мин, 5 мин, 10 мин, 15 мин. Третья серия опытов также была связана с использованием индуцирующего фактора- рентгеновского облучения. В ходе работы были определены три рабочих режима, каждый из которых отличался длительностью экспозиции, периодичностью воздействия и полученной дозой облучения. В результате исследований, связанных с использованием индуцирующих факторов, искомых бактериофагов выделено не было. Последняя серия опытов заключалась в выделении бактериофагов из объектов внешней среды - мест естественного (возможного) существования «хозяина» (изучаемого микроорганизма) и вируса (искомого бактериофага). Из объектов внешней среды было выделено 3 изолята фага: FL-j-1, FL-pec-2, FL-aq-3. Бактериофаг FL-j-1 активен в отношении штамма F. johnsoniae VKM B-1426, бактериофаг FL-pec-2 активен в отношении штамма F. pectinovorum VKM B-1171, бактериофаг FL-aq-3 активен в отношении штамма F. aquatile VKPM В-8534.

Дальнейшие исследования могут быть связаны с изучением свойств выделенных бактериофагов: изучением специфичности в отношении данного рода, изучением чувствительности, изучением и повышением литической активности, отбором наиболее перспективных штаммов фагов, дальнейшей селекцией отобранных бактериофагов, а также изучением возможности использования данных бактериофагов в методе реакции нарастания титра фага с целью индикации изучаемого микроорганизма. 

 

 

Растущая устойчивость возбудителей инфекционных болезней к антимикробным препаратам (АМП) в настоящее время требует точных результатов тестирования чувствительности возбудителей инфекций к антимикробным препаратам, поскольку ошибки тестирования могут привести к неправильному выбору препаратов для лечения и способствуют распространению резистентности. Наиболее распространенным методом для определения чувствительности патогенов к АМП является диско-диффузионный метод. Критическим фактором, влияющим на результаты тестирования, является качество используемой питательной среды. Ситуация, сложившаяся в нашей стране с наличием двух документов – методических указаний и клинических рекомендаций, регламентирующих методологию определения чувствительности микроорганизмов к АМП, позволила обращаться на отечественном рынке нескольким питательным средам данного назначения – агару Мюллера-Хинтон, среде АГВ и др., не всегда надлежащего качества. С целью гармонизации методологии определения чувствительности к АМП с международными требованиями в ФБУН ГНЦПМБ разработана технология и организовано производство отечественного агара Мюллера-Хинтон, удовлетворяющего современным требованиям документов EUCAST, клинических рекомендаций и ISO/TS 16782:2016. Основной задачей данной работы явилась сравнительная оценка его качества и пяти аналогичных сред иностранных фирм-производителей при исследовании 11 тест-штаммов диско-диффузионным методом. В результате проведенных исследований отмечена нестандартность некоторых их анализированных питательных сред, представленных на рынке РФ: не все исследуемые питательные среды удовлетворяют требованиям нормативных документов EUCAST и клинических рекомендаций, поскольку значения диаметров подавления роста, рекомендуемые EUCAST для контроля качества, не укладываются в допустимые диапазоны. Ошибки обнаружены при определении чувствительности P. aeruginosa ATCC 27853 к аминогликозидам, фторхинолонам, меропенему, а также при тестировании S. aureus АТСС 25923 и E. faecalis ATCC 29212 и тигециклина. Результаты испытаний проанализированы с позиций нового документа ISO/TS 16782:2016 «Clinical laboratory testing — Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing», пока еще не принятого в нашей стране. Для выяснения возможных причин отклонений результатов от нормативных значений определены концентрации двухвалентных металлов во всех исследуемых питательных сред методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. В статье показаны новые закономерности, влияющие на достоверность получаемых результатов тестирования антибиотикочувствительности микроорганизмов. Показана необходимость проведения внутрилабораторного контроля качества питательных сред.