Том 6, № 4 (2016)

Эндосимбионт иксодовых клещей Ixodes ricinus «Candidatus Midichloria mitochondrii» единственная из известных бактерий, которая может вторгаться и существовать внутри митохондрий животных. Ее хозяин — иксодовый клещ I. ricinus, является переносчиком возбудителей важных природно-очаговых заболеваний человека. «Candidatus M. mitochondrii» обнаружена в межмембранном пространстве митохондрий и в цитоплазме овариальных клеток у 100% самок I. ricinus. При локализации в слюнных железах клещей бактерия содержит жгутик. «Candidatus M. mitochondrii» имеет две группы генов (cbb3 цитохром оксидазу и флагеллин) уникальных для представителей порядка Rickettsiales, что позволяет ей играть важную роль в эмбриогенезе клещей I. ricinus и вызывать сероконверсию у 58% пациентов с присасыванием этого вида клещей в анамнезе. Недавно в порядке Rickettsiales было предложено выделить семейство «Candidatus Midichloriaceae» и внутри него род «Candidatus Midichloria», получившие названия в честь «Candidatus M. mitochondrii». Эта бактерия вместе с генетически близкородственными микроорганизмами образовала группу MALOs (midichloria and like organisms), представители которой продемонстрировали связь с широким кругом хозяев: от членистоногих до инфузорий, амеб, губок, рыб, различных животных и человека. В настоящее время отсутствуют данные о возможности репликации «Candidatus M. mitochondrii» в организме человека и патогенности этого микроорганизма. Несмотря на высокий процент серопозитивных проб, полученных от лиц с присасыванием I. ricinus в анамнезе, эту бактерию пока нельзя рассматривать как ответственную за патологию человека по примеру известных патогенных представителей порядка Rickettsiales (риккетсии, анаплазмы и эрлихии). Требуется пересмотреть отношение к иммунному ответу к слюне I. ricinus с учетом потенциального воздействия «Candidatus M. mitochondrii». Следует рассматривать высокую возможность роли этой бактерии в иммунном ответе и иммуномодуляции у человека с присасыванием I. ricinus в анамнезе. ДНК «Candidatus M. mitochondrii» была впервые генотипирована в клещах I. ricinus на территории Европейской части Российской Федерации.

Устойчивость к антибиотикам среди микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae обусловлена комбинацией нескольких механизмов, например, гиперпродукцией бета-лактамаз, снижением проницаемости внешней мембраны микробной клетки (обычно это связано с утратой пориновых белков), наличием системы эффлюкса. Особого внимания заслуживают металло-бета-лактамазы (МБЛ), наличие которых обуславливает устойчивость грамотрицательных микроорганизмов ко всем бета-лактамным антибиотикам (в некоторых случаях, кроме азтреонама). В настоящее время нет ингибиторов МБЛ карбапенемрезистентных микроорганизмов, разрешенных для применения в клинике. Поиск эффективных ингибиторов МБЛ карбапенемрезистентных микроорганизмов, разрешенных к применению в клинике и усиливающих действие карбапенемов, послужил основанием для выполнения данного исследования. Работу проводили в 3 этапа: 1) создание модельной системы с использованием стандартного реактива фермента металло-бета-лактамазы P. aeruginosa рекомбинантной, экспрессированной в E. coli, для оценки повышения минимальных подавляющих концентраций (МПК) карбапенемов в отношении ранее чувствительных к ним штаммов грамотрицательных микроорганизмов in vitro; 2) оценка эффективности перспективных ингибиторов МБЛ в присутствии того же стандартного реактива фермента; 3) оценка способности выявленных ингибиторов усиливать действие карбапенемов в отношении клинических изолятов грамотрицательных микроорганизмов, продуцирующих МБЛ, по показателям МПК и индекса фракционной ингибирующей концентрации (ФИК). Стандартный метод «шахматной доски» модифицировали для оценки сочетанного применения антибиотика из группы карбапенемов и потенциального ингибитора МБЛ — лекарственного препарата из группы бисфосфонатов — этидроновой кислоты. С использованием стандартного реактива фермента металло-бета-лактамазы P. aeruginosa рекомбинантной, экспрессированной в E. coli, создали модельную систему, которая позволяет оценить перспективность новых ингибиторов МБЛ грамотрицательных микроорганизмов. Выявлен дозозависимый эффект повышения уровня МПК меропенема от количества реактива МБЛ в модельной системе в отношении ранее чувствительных к антибиотику референс-штаммов микроорганизмов. Отмечена инактивация фермента МБЛ даже малыми дозами бисфосфоната, в исследованиях показана задержка появления логарифмической фазы роста тест-культуры P. aeruginosa ATCC 27853 до 12 часов по сравнению с контролем. При этом максимальные дозы этидроновой кислоты 50 000–100 000 мкг/мл полностью ингибировали МБЛ, наблюдали отсутствие логарифмической фазы роста микроба за счет действия меропенема на уровне референтного значения чувствительности (2 мкг/мл). Выявлено синергидное действие (индекс ФИК < 0,5) сочетанного применения меропенема с этидроновой кислотой в отношении клинических резистентных к карбапенемам изолятов грамотрицательных микроорганизмов, при этом показано усиление действия антибиотика в 8–512 раз по сравнению с исходным уровнем МПК.

Корь остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в разных странах. Эта проблема стала особенно актуальна после принятия ВОЗ стратегического плана по борьбе с корью. Согласно плану поставлена цель снижения кори в глобальном масштабе. В 2010–2011 гг. крупные вспышки кори регистрировались на Африканском континенте: в Демократической Республике Конго, на юге Африки, в Нигерии и в ряде других африканских стран. В Гвинейской Республике вакцинация против кори проводится однократно детям в возрасте 9 месяцев. В 2014–2015 гг. отмечен рост заболеваемости корью. Материалы и методы. В ИФА исследованы 22 сыворотки крови здоровых взрослых гвинейцев в возрасте от 24 до 71 года и 136 сывороток крови, полученных от детей и взрослых — пациентов госпиталя г. Кинди (Гвинейская Республика). Клинические образцы были получены в 2015–2016 гг. Использованы тест-системы производства Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG (Германия): «Anti-Measles Virus ELISA (IgМ)», «Anti-Measles Virus ELISA (IgG)»; «Аvidity: Anti-Measles Virus ELISA (IgG)», а также ИФА тест-система «Вектор-Бест IgM-корь» (Россия). Результаты и обсуждение. Только у одного из 22 обследованных не были выявлены IgG-антитела к вирусу кори. Количественное определение титров IgG-антител, а также их авидности у остальных обследованных (21 человек) свидетельствуют о перенесенном в недавнем или отдаленном прошлом заболевании корью. При исследовании 116 сывороток крови пациентов госпиталя г. Кинди на IgM-корь-антитела, ретроспективно выявлен случай кори у ребенка 2,5 лет. При исследовании 130 сывороток крови на наличие IgG-антител к вирусу кори, выявлены 12,3% серонегативных к кори лиц. Все обследованные в возрасте 23 года и старше были серопозитивны к вирусу кори, причем 60% из них имели высокие титры антител. Антитела к вирусу кори отсутствовали или определялись в низких титрах у 76,2% лиц в возрасте до 22 лет, что может свидетельствовать о нарушениях плановой вакцинации детей из-за вспышки лихорадки Эбола. Для снижения риска возникновения крупных вспышек кори в районах, свободных от передачи вируса Эбола, ВОЗ рекомендует проводить кампании массовой противокоревой вакцинации.

Проведено исследование микробиоценоза слизистой оболочки носа у больных полипозным риносинуситом. Обследованы больные полипозным риносинуситом (ПРС, n = 58) в возрасте от 18 до 64 лет и группа контроля (n = 156), сопоставимые по полу и возрасту. Для оценки микрофлоры слизистой оболочки носа во время обострения заболевания проводили посев микроорганизмов на питательные дифференциально-диагностические среды (КА, ЖСА, Эндо, энтерококкагар). При изучении микрофлоры, полученной со слизистой оболочки носа, было выявлено 407 культур микроорганизмов при ПРС. В группе контроля выявлено 174 культуры микроорганизмов. Среди изолятов установлено 9 видов 6 родов бактерий при ПРС против 8 видов 6 родов в группе контроля. При исследовании количественного состава микрофлоры слизистой оболочки носа при ПРС относительно контрольной группы было обнаружено значительное преобладание микроорганизмов, принадлежащих к родам Staphylococcus и Streptococcus, а также к семейству Enterobacteriaceae. Также обнаружено повышение КОЕ S. pneumoniae. При определении видовой принадлежности микроорганизмов, относящихся к роду Staphylococcus, в группе ПРС относительно контроля было установлено увеличение общей численности штаммов S. aureus, относящихся к коагулазопозитивным и S. haemolyticus, S. epidermidis относящихся к коагулазонегативным стафилококкам. Также выявлено большое разнообразие коагулазо-негативных стафилококков: S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. cohnii, S. capitis, S. hyicius и S. xylosus. В контрольной группе таких видов как S. capitis и S. hyicius не обнаружено. Таким образом при полипозном риносинусите на слизистой оболочке носа имеет место выраженный дисбактериоз. Анализ частоты встречаемости микроорганизмов, принадлежащих к разным родам, показал, что в группе ПРС чаще по сравнению с контрольной группой выделялись бактерии рода Streptococcus и семейства Nesseria, а также S. pneumoniae, S. pyogenes и M. сatarha lis, относительно контроля. Анализ частоты встречаемости бактерий, относящихся к роду Staphylococcus, выделенных со слизистой оболочки носа показал высокий процент обнаружения как коагулазоположительных стафилококков, к которым относится золотистый стафилококк, так и коагулазо-отрицательных, таких как S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. cohnii, S. capitis, S. hyicius и S. xylosus в груп-пе ПРС относительно контроля. Проведенный анализ вирулентных и персистентных свойств стафилококков выявил особенности ферментативного аппарата, определяющего клиническое течение заболевания: стафилококки, длительно вегетирующие на слизистой оболочке носа изменяют свои свойства в сторону повышения устойчивости к бактерицидному воздействию естественной резистентности, что, вероятно, сообщает им дополнительные селективные преимущества при развитии воспалительного процесса.

Современной проблемой клинической медицины и в большей степени хирургии являются инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи. За последнее время в хирургии достигнут значительный прогресс, связанный с новыми организационными подходами и медицинскими технологиями специализированной медицинской помощи раненым и пострадавшим. Однако эти достижения нивелируются высокой частотой инфекционных осложнений, требующих поиска эффективных мер диагностики и профилактики. У пациентов с тяжелыми травмами часто развиваются внутрибольничные инфекции, что во многом определяется влиянием клинико-патогенетических факторов риска. Такие инфекционные осложнения требуют всесторонней оценки, в том числе с проведением микробиологических исследований. Основными возбудителями инфекционных осложнений в хирургических стационарах являются S. aureus, K. pneumoniae, P. aeruginosa, Acinetobacter spp., которые способны вызывать инфекции кровотока, мягких тканей, дыхательных и мочевыводящих путей, особенно у ослабленных и иммунокомпрометированных пациентов, а также пациентов, находящихся в отделениях интенсивной терапии. Эти микроорганизмы представляют угрозу для пациентов и медицинского персонала, поскольку способны длительно сохраняться в больничной среде, а также распространяться от пациента к пациенту при нарушении изоляционно-ограничительных мероприятий и требований к гигиене рук медицинских работников. Клинические закономерности развития инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи при тяжелых травмах, заключаются в возможности последовательного и параллельного развития как в разные, так и в одинаковые сроки местных, висцеральных и генерализованных инфекционных осложнений с преобладанием сочетанных форм у пациентов хирургического стационара с высоким риском внутрибольничного инфицирования на фоне действия фак-торов лечебно-диагностического процесса и госпитальной среды, заноса возбудителей. Ранняя постановка этиологического диагноза позволяет своевременно назначить эмпирическую этиотропную терапию и провести мероприятия инфекционного контроля, направленные на предотвращение распространения микроорганизмов в стационаре. Использование хромогенных (флюорогенных) сред при исследовании проб клинического материала на этапе первичного посева делает возможным получение ускоренного ответа (через 18–24 ч). Микробиологический мониторинг в диагностике инфекционных осложнений у пациентов с тяжелыми травмами и эпидемиологическом надзоре за инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи позволяет выявлять возбудителей, способных становиться ведущими патогенами, образовывать устойчивые внутри- и межгрупповые ассоциации и изменять характер инфицирования по типу персистенции, суперинфекции и реинфекции, а также особенности многолетних и внутригодовых изменений частоты выделения патогенов.

Цель исследования состояла в определении уровня провоспалительных цитокинов: IL-12, IL-8 и IFNY, неоптерина и липополисахарид-связывающего белка в сыворотке крови больных острым бруцеллезом до и после проведения антибактериальной терапии. Объектом исследования послужил клинический материал от 32 пациентов с лабораторно подтвержденным диагнозом «Острый бруцеллез», поступивших в отделение по диагностике, лечению и экспертизе профпатологии бруцеллеза ГБУЗ СК «Городская клиническая больница № 2» г. Ставрополя. Концентрации цитокинов IL-12, IL-8, IFNY и острофазных белков определяли в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. В острую фазу бруцеллезной ин-фекции (до лечения) отмечался высокий уровень провоспалительных цитокинов IL-8 и IFNY, но несмотря на проведенный курс антибиотикотерапии в сыворотке крови больных сохранился высокий уровень IL-8, свидетельствующий о активном воспалении при отсутствии клинических проявлений. Уровень IL-12, ключевого цитокина в инициации лимфоцит-зависимого иммунного ответа, был ниже, чем в контрольной группе. Оценка цитокинового статуса (IL-8, IL-12, IL-18) и белков острой фазы воспаления (неоптерина и липо-полисахарид-связывающего белка) позволила получить ценную информацию для мониторинга эффекта фармакотерапии острого бруцеллеза. Показатели уровня липополисахарид-связывающего белка и неоптерина в сыворотке больных бруцеллезом следует рассматривать как маркер активности воспалительного процесса и как предиктор исходов острого бруцеллеза.

В Государственном научном центре прикладной микробиологии и биотехнологии разработаны две питательные среды для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов: Шоколадный агар и ГБМ-агар. Ранее в ходе лабораторных исследований с использованием музейных штаммов микроорганизмов было показано, что эти питательные среды обладают высокой чувствительностью и обеспечивают рост штаммов Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae при посеве микробных суспензий, содержащих единичные клетки. Использование в обеих средах селективных добавок для выделения гемофильной палочки, менингококка или пневмококка позволяет избирательно выделять искомые микроорганизмы, подавляя рост сопутствующей микрофлоры. В настоящем исследовании проводилась оценка эффективности разработанных питательных сред при бактериологическом исследовании клинических образцов из верхних и нижних дыхательных путей. При бактериологическом посеве 90 образцов мазков из зева, взятых от детей и взрослых в возрасте от 0 до 66 лет с заболеваниями верхних дыхательных путей, на Шоколадный агар, ГБМ-агар и контрольную питательную среду без использования селективных добавок выделено одинаковое число культур микроорганизмов. Из 154 выделенных культур микроорганизмов две принадлежали к виду Neisseria meningitidis, 23 — к виду Streptococcus pneumoniae и 9 культур идентифицировано как Haemophilus influenzae. Бактериологический посев 10 образцов мазков из зева, взятых от здоровых людей в возрасте от 30 до 55 лет, на испытуемые и контрольные среды с селективными добавками позволил без количественных потерь избирательно выделить культуры Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae и подавить рост сопутствующей микрофлоры. В ходе исследования Шоколадный агар и ГБМ-агар не уступали по ростовым свойствам контрольным средам, используемым в клинической практике для выделения основных возбудителей гнойных бактериальных менингитов.

.