Том 11, № 2 (2021)

Повышенный исследовательский интерес к проблеме развития туберкулеза обусловлен ростом случаев лекарственной устойчивости его возбудителя, коинфекции с ВИЧ и гепатитами, отсутствием эффективной вакцины. Однако в настоящее время патогенез туберкулеза по прежнему остается недостаточно изученным. Существенная роль отводится наследственным факторам, так как большинство инфицированных Mycobacterium tuberculosis остается устойчивым к туберкулезу, и только в 5—15% случаев инфицирование приводит к развитию заболевания. Несмотря на длительную историю изучения генетических факторов подверженности туберкулезной инфекции — от поиска моногенных форм нарушения иммунитета, ассоциаций отдельных генов подверженности туберкулезу, до анализа полногеномных ассоциативных исследований и оценки особенностей транксрипционных профилей больных индивидов — особенно острой остается проблема получения клинически значимых результатов для выявления и мониторинга групп риска. Поиск дифференциально экспрессирующихся генов в группах, различающихся по статусу заболевания (неинфицированные, латентная туберкулезная инфекция, начальная досимптоматическая стадия, активный туберкулез, выздоровевшие после туберкулеза, нетуберкулезная инфекция), привел к получению большого количества данных, не перекрывающихся при изучении разных групп сравнения, в различных этнических группах, при изучении цельной крови и клеточных моделей. Объединение массивов данных и последующий их реанализ помогают верифицировать и дополнять результаты, однако остается большое количество вопросов, касающихся понимания функционирования организма человека в условиях воздействия M. tuberculosis. В последние годы применяются новые подходы в разработке тест-систем для диагностики различных форм заболевания. В обзоре рассматриваются накопленные к настоящему времени результаты экспрессионных исследований, направленных на изучение подверженности туберкулезу, а именно меняющиеся с течением времени объекты и подходы исследований, изучаемые формы ответа организма на инфицирование микобактерией, влияние различных факторов на получаемые результаты.

Псориаз — системное иммуноассоциированное заболевание полифакториальной природы. Предполагается, что одним из факторов, способствующих его развитию, является дисбиоз толстого кишечника. В обзоре приведены сведения о роли дисбиоза толстого кишечника в индукции и прогрессировании псориатического воспаления на примере трех бактериальных видов-акторов: Akkermansia muciniphila, Faecalibacterium prausnitzii и Escherichia coli. Указанные бактериальные виды, с одной стороны, являются индикаторами состояния бактериального сообщества при дисбиозе толстого кишечника. С другой стороны, они функционально связаны с запуском цепочки событий, заключающейся в индукции дефекта кишечного барьера, переходящего в хроническое воспаление слизистой оболочки кишечника и системное воспаление. Этот сценарий приводит к изменению реактивности клеток врожденного и адаптивного иммунитета на системном уровне, дефекту функции клеток регуляторного звена иммунитета, что на фоне феномена молекулярной мимикрии бактерий — персистенции Streptococcus pyogenes с антигенами, гомологичными кожным, — ведет к расширению популяции аутореактивных к коже Т-клеток, индукции и прогрессированию псориатического воспаления. Псориатический процесс рассматривается с точки зрения коморбидности с воспалительными заболеваниями кишечника. Поскольку дисбиотические изменения при псориазе и воспалительных заболеваниях кишечника, таких как болезнь Крона, имеют схожие признаки, есть вероятность, что при этих заболеваниях реализуется аналогичная патогенетическая цепь, ведущая от дисбиотических изменений микробиоты толстого кишечника к дефекту кишечного барьера, хроническому системному воспалению и дефекту противовоспалительного звена иммунитета. Поэтому данные о патогенетических путях заболеваний, коморбидных с псориазом, способны раскрыть неизвестные элементы патогенетической цепи последнего. Псориаз как генетически опосредованное заболевание на данный момент ассоциирован с однонуклеотидными полиморфизмами более чем четырехсот генов. В обзоре рассмотрено участие однонуклеотидных полиморфизмов кандидатных генов, включенных в патогенетическую цепь псориаза на уровне процессинга и презентации антигена, миграции иммунных клеток, рецепции и производства провоспалительных цитокинов. C болезнью Крона ассоциированы однонуклеотидные полиморфизмы генов, кодирующих белки кишечного барьера и формирующих его функциональную неполноценность. В контексте коморбидности и сходства микробио-та-ассоциированной патогенетической цепи псориаза и воспалительных заболеваний кишечника допустимо предположить, что данные полиморфизмы, определяющие генетический дефект кишечного барьера, реализуются дисбиотическими изменениями бактериального сообщества толстого кишечника и способствуют прогрессированию не только воспалительных заболеваний кишечника, но и псориаза.

Возбудитель чумы, Yersinia pestis, — особо опасный бактериальный патоген и потенциальный агент биотерроризма. Преобладающими клиническими формами инфекции являются бубонная и легочная чума, отличающиеся путем инфицирования. При отсутствии лечения смертность при бубонной форме чумы составляет 40—60%, в то время как легочная чума без лечения летальна всегда. Развитие инфекционного процесса в организме восприимчивого хозяина обеспечивается наличием у чумного микроба комплекса факторов патогенности различной функциональной направленности, экспрессирующихся в зависимости от стадии инфекционного процесса. Нокаутные мутации генов, кодирующих эти факторы, могут не влиять на вирулентность микроба или приводить к его аттенуации. Поиск новых факторов патогенности Y. pestis и разработка на их основе высокоэффективных субъединичных и живых чумных вакцин, индуцирующих развитие выраженных клеточных и гуморальных иммунных реакций, и/или оценка потенциального использования этих факторов в качестве молекулярных мишеней для химиотерапии чумы остаются по-прежнему актуальными, так как обе лицензированные на настоящий день чумные вакцины не соответствуют требованиям ВОЗ, а на Мадагаскаре выделены штаммы чумного микроба, устойчивые ко всем лекарственным препаратам, рекомендованным для антибактериальной терапии чумы. В настоящей статье обобщены сведения относительно вклада известных и вновь открытых факторов патогенности в вирулентность штаммов Y. pestis и протективную активность в отношении чумы. Описано также влияние утраты генов регуляторных белков и мутаций в генах различных транспортных систем Y. pestis на аттенуацию вирулентных штаммов. Проведена оценка перспективности включения охарактеризованных антигенов в состав прототипов субъединичных вакцин и тех или иных полученных мутантов в состав прототипов живых аттенуированных вакцин. Использование антибиотиков постулируется комитетом экспертов Всемирной организации здравоохранения по чуме как «золотой стандарт» лечения чумы. Однако появление устойчивых к антибиотикам штаммов Y. pestis привело к необходимости поиска альтернативных способов терапии. В обзоре обобщены предварительные результаты попыток лечения чумы ингибиторами фактора патогенности. Препараты, нацеленные на ключевые факторы патогенности, предоставляют новые перспективные возможности в борьбе с устойчивыми к антибиотикам бактериями.

Вакцинация населения — одна из наиболее эффективных мер противодействия пандемии, вызванной новой коронавирусной инфекцией. Поэтому ученые всего мира работают над созданием эффективных и безопасных вакцин. Мы разработали синтетическую пептидную вакцину «ЭпиВакКорона» против нового коронавируса SARS-CoV-2, которая представляет собой суспензию для внутримышечного введения, содержащую композицию химически синтезированных пептидных иммуногенов S-белка коронавируса SARS-CoV-2, конъюгированных с белком-носителем, и адсорбируется на гидроксиде алюминия. В настоящее время проводятся I–II фазы клинических испытаний вакцины, которые состоят из двух этапов: этап 1 — открытое исследование безопасности, реактогенности и иммунологической активности вакцины с участием 14 добровольцев в возрасте 18–30 лет, этап 2 — простое слепое сравнительное рандомизированное плацебоконтролируемое исследование с участием 86 добровольцев. В исследовании приняли участие добровольцы в возрасте 18–60 лет, вакцину вводили внутримышечно дважды с интервалом 21 день между инъекциями. Все местные реакции на введение вакцины были умеренными, например кратковременная боль в месте инъекции. Признаков развития местных или системных побочных реакций не было. Схема двухдозовой вакцинации вызвала выработку антител, специфичных к антигенам, из которых состоит вакцина, у 100% добровольцев. Сероконверсия с титром нейтрализующих антител ≥ 1:20 была зарегистрирована у 100% добровольцев через 21 день после второй дозы иммунизации. В группах добровольцев, вакцинированных плацебо, о сероконверсии не сообщалось. Вакцина «ЭпиВакКорона» на основе пептидов имеет низкую реактогенность, является иммуногенным и безопасным продуктом. Clinical Trials Identifier: NCT04527575.

Цель работы — изучение механизмов антибиотикорезистентности основных возбудителей гнойно-воспалительных осложнений у онкологических больных. Материалы и методы. В 2012—2015 гг. проспективно обследовано 184 онкологических больных: 67 больных хирургического отделения № 1 и 117 больных отделения анестезиологии-реанимации Красноярского краевого клинического онкологического диспансера им. А.И. Крыжановского. Материал от больных — бронхоальвеолярная лаважная жидкость, раневое отделяемое — исследовали бактериологическим методом, а также MALDI-TOF. Для изучения антибиотикочувствительности применяли такие методы, как диско-диффузионный, метод «двойных дисков», инактивации карбапенемов, скрининга, ПЦР, Е-тест, метод серийных разведений в бульоне Мюллера-Хинтон. Генотипирование и определение механизмов резистентности осуществлялось с помощью ПЦР, М-ПЦР, секвенирования. Была использована программа WHONET, уровень значимости p < 0,05. Результаты. Установлено превалирование ассоциаций мультирезистентных и экстремально резистентных возбудителей. В микрофлоре нижних отделов дыхательных путей, раневом отделяемом у онкологических больных превалировали неферментирующие грамотрицательные бактерии — 44,5 и 48% соответственно, а также представители порядка Enterobacterales — 24 и 34,9% соответственно; грамположительные бактерии — 24 и 17,1% соответственно. У штаммов P. aeruginosa и A. baumannii, K. pneumoniae, устойчивых к имипенему и/или меропенему, проверяли продукцию МБЛ фенотипически, а также наличие генов наиболее распространенных VIM-, IMP-типов, а у A. baumanni iтакже генов OXA-23, OXA-40, OXA-58; у K. pneumoniae — OXA-48. Штаммы A. baumannii не образуют МБЛ, но 56,3% изолятов (9 штаммов из 16) являлись продуцентами карбапенемаз OXA-23 и OXA-40. Штаммы P. aeruginosa 15,0% (3 из 20) обладали VIM. 16,7% (1 из 6) изолятов K. pneumoniae являлся продуцентом OXA-48. Удельный вес метициллин-резистентных штаммов рода Staphylococcus составил 48,9%, 4 штамма относились к MRSA. Штаммы MRSA PVL- относились к клонам ST239/spa3(t037)/SCCmecIIIA/tst,sek,seq+ (75%) и ST8/spa1(t008)/SCCmecIVc/sea+ (25%). MRSA ST239 резистентны к аминогликозидам (aacA-aphD, aadD), линкозамидам/макролидам (ermA), фторхинолонам (мутации GyrA — Ser84Leu; в GrlA — Ser80Phe), рифампицину (мутации rpoB — His481Asn, Ile527Met), сульфаметоксазолу, тетрациклину (tetM), а также к хлорамфениколу (у 66,7% изолятов cat); чувствительны к ванкомицину (МПК 1,0 мкг/мл), линезолиду в 100% случаев. MRSA ST8 устойчивы к аминогликозидам (aacA-aphD, aadD), линкозамидам/макролидам (ermC), тетрациклинам (tetK), хлорамфениколу (cat); 100% чувствительны к фторхинолонам, рифампицину, сульфаметаксазолу, ванкомицину (МПК 1,0 мкг/мл), даптомицину, линезолиду. Выводы. Установлено, что представители порядка Enterobacterales, А. baumannii, P. aeruginosa, MRSA сохраняют высокую антибиотикорезистентность, механизмы которой связаны с мутациями, в том числе с изменением мишени действия, наличием генов, обеспечивающих продукцию модифицирующих ферментов, инактивацию антибактериального препарата, защиту рибосом.

Аргининдеиминаза является одним из трех ферментов, образующих систему аргининдеиминазы у бактерий. Ранее было установлено, что аргининдеиминаза, обладает антипролиферативным действием в отношении ряда первичных и иммортализованных клеток мыши и человека. Предполагается, что ингибирующее действие фермента может быть связано с его способностью приводить к истощению аргинина в микроокружении клеток. Биодоступность аргинина играет важную роль для пролиферации Т-лимфоцитов, экспрессии белков Т-клеточного рецептора и дифференцировки клеток памяти. Целью настоящего исследования стало изучение влияния аргининдеиминазы пиогенного стрептококка на функциональную активность лимфоцитов периферической крови человека. Для достижения поставленной цели было проведено сравнительное исследование влияния супернатанта разрушенных стрептококковых клеток (СРС) исходного штамма S. pyogenes M49-16 и его изогенного мутанта S. pyogenes M49-16delArcA с инактивированным геном аргининдеиминазы (ArcA) на функции иммунных клеток. Влияние супернатантов на жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитометрии, с использованием ДНК-связывающего красителя DAPI. Пролиферацию клеток оценивали с помощью МТТ-теста и цитофлуориметрически с использованием метода, основанного на окрашивании внутриклеточного белка витальным флуоресцентным красителем CFSE (карбоксифлуоресцеинсукцинимидилэфирным красителем). Кроме того, в работе оценивали уровень экспрессии на лимфоцитах тирозинфосфатазы CD45 в различных условиях культивирования. Было показано, что СРС S. pyogenes M49-16 не оказывал влияния на жизнеспособность клеток. СРС исходного штамма практически не влиял на пролиферацию интактных клеток, но значительно подавлял пролиферацию клеток, индуцированную ConA. В то же время СРС мутантного штамма достоверно повышал спонтанную пролиферацию клеток и не оказывал влияния на пролиферацию, индуцированную митогеном. Было показано, что увеличение пролиферации сопровождалось увеличением уровня экспрессии CD45, однако эти изменения не во всех случаях были достоверны. Полученные данные позволяют заключить, что бактериальная аргининдеиминаза может являться одним из факторов патогенности, способных ограничивать пролиферацию лимфоцитов и развитие иммунного ответа с целью улучшения роста и диссеминации бактерий.

Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) являются одним из наиболее эффективных способов борьбы с бесплодием, однако на результативность их применения оказывают влияние различные факторы. Настоящее исследование посвящено изучению значимости факторов риска неудачных исходов применения ВРТ, связанных с изменениями структуры микробиома женской репродуктивной системы. Проведенное по дизайну «случай—контроль» исследование включало в себя лабораторное обследование 129 бесплодных пар, обратившихся в отделение вспомогательных репродуктивных технологий для проведения процедуры экстракорпорального оплодотворения. Группу «случаев» составили женщины, у которых не наступила клиническая беременность в результате применения ВРТ. В контрольную группу были включены женщины, у которых беременность наступила и прогрессировала в результате проведения цикла ВРТ. Для определения качественного и количественного состава микроорганизмов биоценоза влагалища использовался метод мультипраймерной количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с применением набора реагентов «Фемофлор-16» (НПО «ДНК-технология», Россия). Наличие Trichomonas vaginalis в вагинальных мазках, эякуляте устанавливали культуральным методом c использованием жидкой питательной среды Trichomonas Modified CPLM Medium (HiMedia, Индия) c дальнейшим микроскопированием. Серологические исследования включали определение иммуноглобулинов классов IgG и IgA к Chlamydia trachomatis с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и тест-систем производства «Вектор-Бест» (Россия), NovaTec (Германия), ImmunoComb (Израиль), а также обнаружение антител к предранним белкам вирусов герпеса 1, 2 типа («БиоСервис», Россия) и к предранним белкам вирусам герпеса 5 типа («Вектор-Бест», Россия). Выявление ДНК C. trachomatis и ДНК вирусов герпеса проводили методом ПЦР с помощью тест-систем «Амплисенс» («Интерлабсервис», Россия). В результате проведенного исследования выявлена высокая пораженность бесплодных пар, обращающихся в стационар для проведения ЭКО, инфекциями, передающимися преимущественно половым путем. Значимыми факторами ненаступления беременности являлись наличие нарушений нормального микробиоценоза влагалища (ОШ = 7,5 (95% ДИ 1,04—54,1), р = 0,02) и выделение T. vaginalis (ОШ = 2,6 (95% ДИ 1,12—6,4), р = 0,01). Дисбиотические состояния репродуктивной системы, в том числе возникающие на фоне трихомонадной инфекции, ассоциированы со снижением результативности ВРТ. Очевидна необходимость своевременного выявления урогенитальных инфекций и дисбиотических состояний в процессе подготовки бесплодных пар к проведению циклов ЭКО.

Группа стрептококка включает в себя многочисленные виды шаровидных грамположительных факультативно-анаэробных бактерий, в основе классификации которых лежит их способность к гемолизу эритроцитов. Стрептококки группы viridans являются естественными представителями нормальной микрофлоры полости рта. Однако на фоне иммунодефицита, онкологической патологии, нейтропении этот возбудитель может стать причиной таких состояний, как бактериемия, сепсис, эндокардит, а в некоторых случаях и пневмония. Заболевания органов дыхания являются частой причиной обращения за медицинской помощью у ВИЧ-инфицированного контингента. Роль комменсала S. viridans в развитии бактериальных заболеваний у ВИЧ-инфицированных пациентов остается до конца не изученной. Непонятна связь S. viridans с другими бактериальными сообществами, включая патогенные микроорганизмы. Также представляет интерес оценка чувствительности S. viridans к антибактериальным препаратам в регионе с высокой заболеваемостью ВИЧ-инфекцией. Целью исследования было определение чувствительности к антибактериальным препаратам стрептококков группы viridans в мокроте у ВИЧ-инфицированных пациентов с клинической картиной пневмонии. Материалы и методы. В период с 01.01.2012 по 01.01.2019 на базе Инфекционной клинической больницы № 1 им. Далматова Д.М. были проанализированы результаты микробиологического исследования мокроты ВИЧ-инфицированных пациентов с подозрением на пневмонию (n = 684), у 193 из которых выявлялся S. viridans (28,2%). Бактериологическое исследование материала проводилось для выделения чистой культуры возбудителей классическими методами. Далее проводилась оценка чувствительности S. viridans к антибактериальным средствам (n = 78) согласно клиническим рекомендациям 2018 г. Первоначально резистентность к антибиотикам определялась диско-диффузным методом, который, хотя и является рутинным, наиболее распространен в клинических лабораториях. Затем проводилась оценка минимальной подавляющей концентрации с помощью прибора Microscan AutoScan 4 (Beckman Coulter, США) для идентификации и определения антибактериальной чувствительности. Результаты. При исследовании диско-диффузным методом было установлено наличие резистентности к пенициллину у 28,2% изучаемых образцов, к ампициллину — у 42,3% и еще больше к цефазолину — у 43,6%. При оценке минимальной подавляющей концентрации антибактериального средства были получены аналогичные данные. Хорошая чувствительность выявлена к цефотаксиму, цефтриаксону, цефепиму, фторхинолонам и ванкомицину.

Одним из актуальных направлений современной иммунологии является изучение роли про- и противовоспалительных цитокинов в иммунном и воспалительном ответе. К настоящему времени получено большое количество данных, касающихся цитокинового статуса при воспалительных процессах в желудочно-кишечном тракте. Однако многие проблемы до сих пор освещены недостаточно. Кроме того, большинство исследований направлено в основном на определение уровня цитокинов в биоптатах из различных отделов желудочно-кишечного тракта или в желудочном соке. В статье представлены результаты изучения особенностей продукции провоспалительных цитокинов у пациентов с сочетанием аллергического ринита и H. pylori-ассоциированных заболеваний верхнего отдела желудочно-кишечного тракта. Обследовано 225 пациентов в возрасте от 18 до 40 лет (средний возраст составил 29,5±6,71 лет). Среди пациентов, включенных в исследование, 43 человека имели аллергический ринит, 66 человек — воспалительные заболевания верхнего отдела желудочно-кишечного тракта (хронический гастрит/гастродуоденит), 69 человек — аллергический ринит с сопутствующими воспалительными заболеваниями верхнего отдела желудочно-кишечного тракта. Деление пациентов на группы осуществлялось в зависимости от наличия аллергического ринита и H. pylori-инфекции. У всех пациентов было определено содержание IL-6 и IL-8 в сыворотке крови, а также показатели общего анализа крови. Статистическую значимость различий частот в независимых группах определяли с помощью точного критерия Фишера или критерия х2. Показано, что у H. pylori-негативных пациентов значения IL-6 в сыворотке крови укладывались в пределы референтного интервала с единичными выпадами, в то время как при наличии H. pylori-инфекции синтез данного цитокина был значительно усилен и не зависел от наличия аллергопатологии. По частоте повышенных значений IL-8 группы пациентов с заболеваниями желудочно-кишечного тракта вне зависимости от наличия H. pylori-инфекции и аллергического ринита были сопоставимы между собой и отличались от группы здоровых лиц достоверно более высокими показателями. Также была выявлена взаимосвязь между сывороточным уровнем IL-8 и количеством лейкоцитов периферической крови, что представляет интерес для прогнозирования течения воспалительного процесса. Таким образом, сывороточный уровень IL-8 при воспалительных заболеваниях верхнего отдела желудочно-кишечного тракта увеличивался вне зависимости от наличия H. pylori-инфекции и аллергического ринита, а повышение уровня IL-6 в сыворотке крови отмечалось только у H. pylori-позитивных пациентов.

22 февраля 2021 года на 73 году после тяжелой болезни ушел жизни один из ведущих сотрудников нашего института — заведующий лабораторией диагностики вирусных инфекций отдела вирусологии ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова, доктор медицинских наук, профессор Вячеслав Федорович Лавров.