Russian Journal of Infection and ImmunityRussian Journal of Infection and ImmunityИнфекция и иммунитет2220-76192313-7398SPb RAACI155110.15789/2220-7619-CIT-1551ORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИAltered microbiota in the female reproductive tract as a risk factor for failure of assisted reproductive technologiesИзменения микробиоты женской репродуктивной системы как фактор риска неудачных исходов при применении вспомогательных репродуктивных технологийLebedevaE A.ЛебедеваЕ. А.
Russian Federation

PhD Student, Assistant Professor, Department of Epidemiology, Parasitology and Desinfectology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov; Junior Researcher, Laboratory of Medical Bacteriology, St. Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg.

Аспирант, ассистент кафедры эпидемиологии, паразитологии и дезинфектологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова; младший научный сотрудник лаборатории медицинской бактериологии НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера.

Санкт-Петербург.

doctorlebedeva@mail.ruRishchukS. V.РищукС. В.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor, Department of Obstetrics and Gynecology named after S.N. Davydov, NorthWestern State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства  и гинекологии им. С.Н. Давыдова.

Санкт-Петербург.

s.rishchuk@mail.ruDushenkovaT. A.ДушенковаТ. А.
Russian Federation

PhD (Medicine), Senior Lecturer, Department of Public Health and Health Management, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры общественного здоровья и управления здравоохранением.

Санкт-Петербург.

uzueva@mail.ruMokhovA. S.МоховА. С.
Russian Federation

PhD Student, Department of Epidemiology, Parasitology and Desinfectology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Аспирант кафедры эпидемиологии, паразитологии и дезинфектологии.

Санкт-Петербург.

docalexserg@gmail.comDesyatovaM. V.ДесятоваМ. В.
Russian Federation

Student, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Студент.

Санкт-Петербург.

milena-m-93@mail.ruErmolenkoE. I.ЕрмоленкоЕ. И.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Head of the Laboratory of Biomedical Microecology, Department of Molecular Microbiology, Institute of Experimental Medicine; Professor, Department of Physiology, St. Petersburg State University.

St. Petersburg.

Доктор медицинских наук, заведующий лабораторией биомедицинской микроэкологии отдела молекулярной микробиологии, ИЭМ; профессор кафедры физиологии СПбГУ.

Санкт-Петербург.

lermolenko1@yandex.ruLeontyevaG. F.ЛеонтьеваГ. Ф.
Russian Federation

PhD (Biology), Senior Researche, Department of Molecular Microbiology, Institute of Experimental Medicine.

St. Petersburg.

Кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отдела молекулярной микробиологии.

Санкт-Петербург.

galeonte@yandex.ruSvarvalA. V.СварвальА. В.
Russian Federation

PhD (Medicine), Senior Researcher, Laboratory of Pathogenes Identification, St. Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории идентификации патогенов.

Санкт-Петербург.

laborimmun@mail.ruShchederkinaE. E.ЩедеркинаЕ. Е.
Russian Federation

PhD (Medicine), Doctor of the Clinical and Laboratory Diagnostics, Department of Herpes-virus Infections Prevention and Diagnostics, St. Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, врач клинико-лабораторной диагностики отделения профилактики и диагностики герпесвирусных инфекций.

Санкт-Петербург.

laborimmun@mail.ruKolodzhievaV. V.КолоджиеваВ. В.
Russian Federation

PhD (Medicine), Associate Professor, Department of Epidemiology, Parasitology and Desinfectology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, доцент кафедры эпидемиологии, паразитологии и дезинфектологии.

Санкт-Петербург.

vika-el@yandex.ruNilovaL. Yu.НиловаЛ. Ю.
Russian Federation

PhD (Medicine), Associate Professor, Department of Medical Microbiology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, доцент кафедры медицинской микробиологии.

Санкт-Петербург.

Lyudmila.Nilova@szgmu.ruOrishakE. A.ОришакЕ. А.
Russian Federation

PhD (Medicine), Associate Professor, Department of Medical Microbiology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov.

St. Petersburg.

Кандидат медицинских наук, доцент кафедры медицинской микробиологии.

Санкт-Петербург.

Elena.Orishak@szgmu.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5206-6656GoncharovA. E.ГончаровА. Е.
Russian Federation

Artemiy E. Goncharov - PhD, MD (Medicine), Associate Professor, Head of the Laboratory of Microorganisms Functional Genomics and Proteomics, Institute of Experimental Medicine; Professor Department of Epidemiology, Parasitology and Desinfectology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov; Associate Professor, Department of Fundamental Problems of Medicine and Medical Technologies, St. Petersburg State University.

197376, St. Petersburg, Kirochnaya str., 41.

Phone: +7 (812) 303-50-00

Гончаров Артемий Евгеньевич - доктор медицинских наук, доцент, зав. лабораторией функциональной геномики и протеомики микроорганизмов ИЭМ; профессор кафедры эпидемиологии, паразитологии и дезинфектологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова; доцент кафедры фундаментальных проблем медицины и медицинских технологий СПбГУ.

197376, Санкт-Петербург, Кирочная ул., 41.

Тел.: 8 (812) 303-50-00

phage1@yandex.ruNorth-Western State Medical University named after I.I. MechnikovСеверо-Западный государственный университет имени И.И. Мечникова Министерства здравоохранения Российской ФедерацииSt. Petersburg Pasteur InstituteНИИ эпидемиологии и микробиологии имени ПастераInstitute of Experimental MedicineИнститут экспериментальной медициныSt. Petersburg State UniversityСанкт-Петербургский государственный университет240320211123653702807202019012021Copyright ©; 2021, Lebedeva E.A., Rishchuk S.V., Dushenkova T.A., Mokhov A.S., Desyatova M.V., Ermolenko E.I., Leontyeva G.F., Svarval A.V., Shchederkina E.E., Kolodzhieva V.V., Nilova L.Y., Orishak E.A., Goncharov A.E.Copyright ©; 2021, Лебедева Е.А., Рищук С.В., Душенкова Т.А., Мохов А.С., Десятова М.В., Ермоленко Е.И., Леонтьева Г.Ф., Сварваль А.В., Щедеркина Е.Е., Колоджиева В.В., Нилова Л.Ю., Оришак Е.А., Гончаров А.Е.2021Lebedeva E.A., Rishchuk S.V., Dushenkova T.A., Mokhov A.S., Desyatova M.V., Ermolenko E.I., Leontyeva G.F., Svarval A.V., Shchederkina E.E., Kolodzhieva V.V., Nilova L.Y., Orishak E.A., Goncharov A.E.Лебедева Е.А., Рищук С.В., Душенкова Т.А., Мохов А.С., Десятова М.В., Ермоленко Е.И., Леонтьева Г.Ф., Сварваль А.В., Щедеркина Е.Е., Колоджиева В.В., Нилова Л.Ю., Оришак Е.А., Гончаров А.Е.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://iimmun.ru/iimm/article/view/1551

Assisted reproductive technologies (ART) are one of the most effective ways in fighting infertility, but their effectiveness is influenced by various factors. Our study focuses on examining importance of risk factors underlying ART failure related to altered microbiome pattern in the female reproductive system. The case-control study was based on conducting a laboratory examination of 129 infertile couples applied to the Department of Assisted Reproductive Technologies due to failure of in vitro fertilization (IVF), whereas control group consisted of females with successful progressive pregnancy after ART. Chlamydia, herpes virus and cytomegalovirus were assessed by using PCR and ELISA, whereas culture method was used to detect Trichomonas vaginalis in vaginal swabs and ejaculate applying Trichomonas Modified CPLM Medium (HiMedia, India) followed by microscopy. In addition, the qualitative and quantitative composition of the vaginal biocenosis was studied with multiplex RT-PCR by using Femoflor-16 kit (DNA-technologies, Russia). Serological tests were based on measuring IgG and IgA antibodies against Chlamydia trachomatis in ELISA (diagnostic kits purchased from Vektor Best, Russia; NovaTec, Germany; ImmunoComb, Israel) as well as antibodies against immediate early HSV-1/2 proteins (BioService, Russia) and immediate early HHV-5 proteins (Vector Best, Russia). C. trachomatis and herpesvirus DNA was measured by using PCR diagnostic kits Amplisens (Interlabservice, Russia). It was found that sexually transmitted infection agents were highly prevalent in infertile couples applying to the hospital for IVF. Significant factors for non-pregnancy were vaginal dysmicrobiocenosis (OR = 7.5 (95% CI 1.04—54.1), p = 0.02) and detected T. vaginalis (OR = 2.6 (95% CI 1.12—6.4), p = 0.01). Dysbiosis of the reproductive system, including those occurring due to trichomonas infection is associated with lowered ART effectiveness. It is evident to timely detect urogenital infections and dysbiosis while preparing infertile couples for IVF cycles.

Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) являются одним из наиболее эффективных способов борьбы с бесплодием, однако на результативность их применения оказывают влияние различные факторы. Настоящее исследование посвящено изучению значимости факторов риска неудачных исходов применения ВРТ, связанных с изменениями структуры микробиома женской репродуктивной системы. Проведенное по дизайну «случай—контроль» исследование включало в себя лабораторное обследование 129 бесплодных пар, обратившихся в отделение вспомогательных репродуктивных технологий для проведения процедуры экстракорпорального оплодотворения. Группу «случаев» составили женщины, у которых не наступила клиническая беременность в результате применения ВРТ. В контрольную группу были включены женщины, у которых беременность наступила и прогрессировала в результате проведения цикла ВРТ. Для определения качественного и количественного состава микроорганизмов биоценоза влагалища использовался метод мультипраймерной количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с применением набора реагентов «Фемофлор-16» (НПО «ДНК-технология», Россия). Наличие Trichomonas vaginalis в вагинальных мазках, эякуляте устанавливали культуральным методом c использованием жидкой питательной среды Trichomonas Modified CPLM Medium (HiMedia, Индия) c дальнейшим микроскопированием. Серологические исследования включали определение иммуноглобулинов классов IgG и IgA к Chlamydia trachomatis с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и тест-систем производства «Вектор-Бест» (Россия), NovaTec (Германия), ImmunoComb (Израиль), а также обнаружение антител к предранним белкам вирусов герпеса 1, 2 типа («БиоСервис», Россия) и к предранним белкам вирусам герпеса 5 типа («Вектор-Бест», Россия). Выявление ДНК C. trachomatis и ДНК вирусов герпеса проводили методом ПЦР с помощью тест-систем «Амплисенс» («Интерлабсервис», Россия). В результате проведенного исследования выявлена высокая пораженность бесплодных пар, обращающихся в стационар для проведения ЭКО, инфекциями, передающимися преимущественно половым путем. Значимыми факторами ненаступления беременности являлись наличие нарушений нормального микробиоценоза влагалища (ОШ = 7,5 (95% ДИ 1,04—54,1), р = 0,02) и выделение T. vaginalis (ОШ = 2,6 (95% ДИ 1,12—6,4), р = 0,01). Дисбиотические состояния репродуктивной системы, в том числе возникающие на фоне трихомонадной инфекции, ассоциированы со снижением результативности ВРТ. Очевидна необходимость своевременного выявления урогенитальных инфекций и дисбиотических состояний в процессе подготовки бесплодных пар к проведению циклов ЭКО.

urogenital infectionsmicrobiomeassisted reproductive technologieschlamydial infectiontrichomonas infectionrisk factorsурогенитальные инфекциимикробиомвспомогательные репродуктивные технологиихламидийная инфекциятрихомонадная инфекцияфакторы рискаИсследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-315-90127.1. Гинекология: национальное руководство / Под ред. В.И. Кулакова, И.Б. Манухина, Г.М. Савельевой. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. 1072 с.2. Дмитриев Г.А., Глазко И.И. Бактериальный вагиноз. М.: БИНОМ, 2008. 192 с.3. Лебедева Е.А., Гончаров А.Е., Рищук С.В., Душенкова Т.А., Мохов А.С., Проскурякова Т.С., Киселев А.В. Факторы, влияющие на результативность вспомогательных репродуктивных технологий в медицинских организациях Санкт-Петербурга // Фундаментальная и клиническая медицина. 2020. Т. 5, № 1. С. 46-51. doi: 10.23946/2500-0764-2020-5-1-46-514. Рищук С.В., Душенкова Т.А. Оптимизация диагностики репродуктивно значимых инфекций у половых пар // TERRA MEDICA. 2013. № 4. С. 20-33.5. Donders G.G., Van Calsteren K., Bellen G., Reybrouck R., Van den Bosch T., Riphagen I., Van Lierde S. Predictive value for preterm birth of abnormal vaginal flora, bacterial vaginosis and aerobic vaginitis during the first trimester of pregnancy. BJOG, 2009, vol. 116, no. 10,pp. 1315-1324. doi: 10.1111/j.1471-0528.2009.02237.x6. Datcu R., Gesink D., Mulvad G., Montgomery-Andersen R., Rink E., Koch A., Ahrens P., Jensen J.S. Vaginal microbiome in women from Greenland assessed by microscopy and quantitative PCR. BMC Infect Dis., 2013, vol. 13: 480. doi: 10.1186/1471-2334-13-4807. Joyner J.L., Douglas J.M. Jr., Foster M., Judson F.N. Persistence of Chlamydia trachomatis infection detected by polymerase chain reaction in untreated patients. Sex Transm. Dis., 2002, vol. 29, no. 4, pp. 196—200. doi:10.1097/00007435-200204000-000028. Kitaya K., Nagai Y., Arai W., Sakuraba Y., Ishikawa T. Characterization of microbiota in endometrial fluid and vaginal secretions in infertile women with repeated implantation failure. Mediators Inflamm., 2019, vol. 2019: 4893437. doi: 10.1155/2019/4893439. Ling Z., Kong J., Liu F., Zhu H., Chen X., Wang Y., Li L., E Nelson K., Xia Y., Xiang C. Molecular analysis of the diversity of vaginal microbiota associated with bacterial vaginosis. BMC Genomics, 2010, vol. 11: 488. doi: 10.1186/1471-2164-11-48810. Van de Wijgert J.H., Borgdorff H., Verhelst R., Crucitti T., Francis S., Verstraelen H., Jespers V. The vaginal microbiota: what have we learned after a decade of molecular characterization? PLoS One, 2014, vol. 9, no. 8: e105998. doi:10.1371/journal.pone.010599811. WHO. The European health report 2015. Targets and beyond — reaching new frontiers in evidence. Copenhagen: WHO, 2015. 18 p.