Влияние экспериментальных белоксодержащих пневмококковых препаратов на созревание дендритных клеток у мышей

Ключевую роль в инициации иммунных реакций играют дендритные клетки — наиболее активные и высокоспециализированные антигенпрезентирующие клетки. В настоящее время актуальна разработка препаратов, активирующих дендритные клетки для создания противоинфекционных и противоопухолевых вакцин. Перспективными для усиления активности дендритных клеток являются препараты микробного происхождения, поскольку они несут лиганды для Toll-подобных рецепторов системы врожденного иммунитета. К таким препаратам относятся экспериментальные белоксодержащие пневмококковые препараты, В данном исследовании их получали из инактивированной ацетоном микробной массы депонированного вакцинного штамма S. pneumoniae 6В № 296 с последующей водной экстракцией и выделением фракции 30— 100 kDa. Дендритные клетки получали из клеток костного мозга мышей линии СВА (n = 15). Клетки культивировали в полной ростовой среде RPMI-1640 в присутствии рекомбинантных GM-CSF и IL-4 (Biosource, США). На шестые сутки в культуру незрелых дендритных клеток вносили экспериментальные белоксодержащие пневмококковые препараты (50 мкл/мл). В качестве классического индуктора созревания использовали коммерческий TNFα (20 нг/мл, Biosource, США). Иммунофенотип дендритных клеток определяли методом проточной цитометрии с использованием FITC- и PE-меченых моноклональных антител к клеточным рецепторам: CD34, CD38, CD83, CD86, CD80, CD11c, MHC II, CD14, CD282 (TLR2), CD-284 (TLR4) (eBioscience, США). При изучении влияния экспериментальных белоксодержащих пневмококковых препаратов на созревание дендритных клеток установлено, что морфологические характеристики дендритных клеток при использовании в качестве индуктора созревания экспериментальных белоксодержащих препаратов не имеют существенных различий между собой и с классическим индуктором созревания TNFa. Клетки характеризовались крупными размерами, имели овальную или неправильную форму с вуалевидной цитоплазмой, эксцентрично расположенным ядром и многочисленными длинными тонкими отростками. Данные препараты в культуре дендритных клеток вызывали снижение численности CD34+ незрелых клеток и TLR2/TLR4+ DC, повышали количество клеток с маркером адгезии CD38+, активационными MHC II+, костимулирующими CD80/CD86+ молекулами и маркером терминальной дифференцировки CD83+, что может свидетельствовать о процессах дифференцировки дендритных клеток при их созревании. Фракция 30—100 kDa в большей степени увеличивала численность клеток с молекулами адгезии по сравнению с водным экстрактом, который значительнее стимулировал нарастание количества дендритных клеток с экспрессией костимулирующих молекул по сравнению с фракцией 30—100 kDa (p < 0,05). Активность исследуемых препаратов в отношении влияния на CD83+ клетки была сопоставимой. Показано, что экспериментальные белоксодержащие антигены вакцинного штамма пневмококка индуцируют созревание дендритных клеток из костномозговых предшественников и снижение численности TLR2- и TLR4-экспрессирующих клеток, что свидетельствует об активирующем влиянии на эффекторы врожденного иммунитета.