Nelli K. Akhmatova - PhD, MD (Medicine), Head of the Laboratory of Immunity Regulation.
105064, Moscow, Malyi Kazennyi lane, 5a, Phone: +7 919 776-55-70
Ахматова Нэлли Кимовна - доктор медицинских наук, заведующий лабораторией механизмов регуляции иммунитета.
105064, Москва, Малый Казенный пер., 5а, Тел.: 8 919 776-55-70
Nelli K. Akhmatova - PhD, MD (Medicine), Head of the Laboratory of Immunity Regulation.
105064, Moscow, Malyi Kazennyi lane, 5a, Phone: +7 919 776-55-70
Доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией экспериментальной микробиологии.
Москва
Junior Researcher, Laboratory of Experimental Microbiology.
Moscow
Младший научный сотрудник лаборатории экспериментальной микробиологии.
Москва
Laboratory Assistant, Laboratory of Immunity Regulation Mechanisms.
Moscow
Лаборант лаборатории механизмов регуляции иммунитета.
Москва
PhD, MD (Medicine), Leading Researcher, Laboratory of Immunology.
Vladivostok
Доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории иммунологии, .
Владивосток
PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory of Mechanisms of Immunity Regulation.
Moscow
Кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории механизмов регуляции иммунитета ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Москва
Junior Researcher, Laboratory of Mechanisms of Immunity Regulation.
Moscow
Младший научный сотрудник лаборатории механизмов регуляции иммунитета.
Москва
Junior Researcher, Laboratory of Mechanisms of Immunity Regulation.
Moscow
Младший научный сотрудник лаборатории механизмов регуляции иммунитета.
Москва
PhD (Medicine), Senior Researcher, Laboratory of Mechanisms of Immunity Regulation.
Moscow
Кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории механизмов регуляции иммунитета.
Москва
Dendritic cells as the most active and highly specialized antigen presenting cells, play a key role in initiating immune responses. Currently, generation of medications activating dendritic cells for development of anti-infective and anticancer vaccines is of highly relevance. Preparations of microbial origin are promising to augment activity of dendritic cells, because they carry innate immune ligands for Toll-like receptors. Such preparations include experimental protein-containing pneumococcal preparations, obtained from acetone-inactivated microbial mass of the deposited S. pneumoniae 6B vaccine strain No. 296, followed by aqueous extraction and separation of 30—100 kDa fraction. Dendritic cells were obtained from bone marrow cells of CBA mice (n = 15), and cultured in complete growth medium RPMI-1640 added with recombinant GM-CSF and IL-4 (Biosource, USA). On day 6, experimental protein-containing pneumococcal preparations (50 pl/ml) were administered to the cultured immature dendritic cells. Commercial TNFa (20 ng/ml, Biosource, USA) was used as a standard maturation inducer (positive control). Immunophenotyping of dendritic cells was conducted by using flow cytometry with FITC- and PE-labeled monoclonal antibodies against cell surface receptors: CD34, CD38, CD83, CD86, CD80, CD11c, MHC II, CD14, CD282 (TLR2), CD284 (TLR4), (eBioscience, USA). Studying an effect of preparations on maturation of dendritic cells revealed that morphological characteristics of dendritic cells generated by using experimental protein-containing preparations did not differ significantly between each other as well as those induced by TNFα. The cells were characterized by large sizes, oval or irregular shape, veiled cytoplasm, eccentrically located nucleus and numerous long thin protrusions. Experimental proteincontaining preparations induced in cultured dendritic cells decrease in count of CD34+ immature and TLR2/TLR4+ cells, increased count of cells expressing markers of adhesion (CD38+), activation (MHC II+), costimulation (CD80/ CD86+) and terminal differentiation (CD83+), which may evidence about events of differentiation upon dendritic cell maturation. The 30—100 kDa fraction increased count of cells expressing adhesion molecules to a greater extent than aqueous extract that more pronouncedly stimulated rise in count of dendritic cells bearing costimulatory molecules (p < 0.05). The activity of the examined proteins regarding their effect on CD83+ cells was comparable. Experimental protein-containing antigens derived from pneumococcal vaccine strain were shown to induce maturation of dendritic cells from bone marrow precursors, induce a decrease in the count of TLR2 and TLR4-expressing cells accounting for activating effect on innate immune effectors.
Ключевую роль в инициации иммунных реакций играют дендритные клетки — наиболее активные и высокоспециализированные антигенпрезентирующие клетки. В настоящее время актуальна разработка препаратов, активирующих дендритные клетки для создания противоинфекционных и противоопухолевых вакцин. Перспективными для усиления активности дендритных клеток являются препараты микробного происхождения, поскольку они несут лиганды для Toll-подобных рецепторов системы врожденного иммунитета. К таким препаратам относятся экспериментальные белоксодержащие пневмококковые препараты, В данном исследовании их получали из инактивированной ацетоном микробной массы депонированного вакцинного штамма S. pneumoniae 6В № 296 с последующей водной экстракцией и выделением фракции 30— 100 kDa. Дендритные клетки получали из клеток костного мозга мышей линии СВА (n = 15). Клетки культивировали в полной ростовой среде RPMI-1640 в присутствии рекомбинантных GM-CSF и IL-4 (Biosource, США). На шестые сутки в культуру незрелых дендритных клеток вносили экспериментальные белоксодержащие пневмококковые препараты (50 мкл/мл). В качестве классического индуктора созревания использовали коммерческий TNFα (20 нг/мл, Biosource, США). Иммунофенотип дендритных клеток определяли методом проточной цитометрии с использованием FITC- и PE-меченых моноклональных антител к клеточным рецепторам: CD34, CD38, CD83, CD86, CD80, CD11c, MHC II, CD14, CD282 (TLR2), CD-284 (TLR4) (eBioscience, США). При изучении влияния экспериментальных белоксодержащих пневмококковых препаратов на созревание дендритных клеток установлено, что морфологические характеристики дендритных клеток при использовании в качестве индуктора созревания экспериментальных белоксодержащих препаратов не имеют существенных различий между собой и с классическим индуктором созревания TNFa. Клетки характеризовались крупными размерами, имели овальную или неправильную форму с вуалевидной цитоплазмой, эксцентрично расположенным ядром и многочисленными длинными тонкими отростками. Данные препараты в культуре дендритных клеток вызывали снижение численности CD34+ незрелых клеток и TLR2/TLR4+ DC, повышали количество клеток с маркером адгезии CD38+, активационными MHC II+, костимулирующими CD80/CD86+ молекулами и маркером терминальной дифференцировки CD83+, что может свидетельствовать о процессах дифференцировки дендритных клеток при их созревании. Фракция 30—100 kDa в большей степени увеличивала численность клеток с молекулами адгезии по сравнению с водным экстрактом, который значительнее стимулировал нарастание количества дендритных клеток с экспрессией костимулирующих молекул по сравнению с фракцией 30—100 kDa (p < 0,05). Активность исследуемых препаратов в отношении влияния на CD83+ клетки была сопоставимой. Показано, что экспериментальные белоксодержащие антигены вакцинного штамма пневмококка индуцируют созревание дендритных клеток из костномозговых предшественников и снижение численности TLR2- и TLR4-экспрессирующих клеток, что свидетельствует об активирующем влиянии на эффекторы врожденного иммунитета.