Роль рекомбинантного интерлейкина-2 в лечении больных хроническим гепатитом В.

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Дисрегуляция иммунного ответа, возникающая при хроническом гепатите В (ХГВ), препятствует элиминации вируса и способствует прогрессированию инфекционного процесса. Цель — оценить эффективность (биохимическую, иммунологическую, вирусологическую) комплексной терапии препаратами тенофовир и рекомбинантный интерлейкин-2 (rIL-2) в лечении больных ХГВ.

Материалы и методы. Проведен сравнительный анализ результатов лабораторного обследования больных ХГВ в двух группах сравнения, сопоставимых по полу, возрасту, стадии фиброза, вирусной нагрузке: I группа (n = 27) получала тенофовир, согласно принятым рекомендациям, и rIL-2, II группа (n = 25) — препарат тенофовир.

Результаты. Перед стартом противовирусной терапии у всех больных ХГВ наблюдалось повышение уровня печеночных трансаминаз, щелочной фосфатазы и гаммаглутамилтранспептидазы от 1,2 до 5 норм, а также дисрегуляция клеточных факторов иммунитета со значимым снижением абсолютного числа CD4+-, CD8+-, CD16+- и повышением CD20+-лимфоцитов. Через 12 месяцев лечения у больных в наблюдаемых группах отмечена нормализация показателей цитолиза и холестаза с незначимыми межгрупповыми различиями. Содержание абсолютного числа CD4+, CD8+ Т-клеток и CD16+-лимфоцитов в I группе повысилось (на 24,7, 24,1, 34,5% соответственно, все p < 0,001 относительно исходных величин), чего не произошло в группе сравнения. Уровень CD20+-лимфоцитов в I группе пациентов ХГВ снизился на 35,9%, а во II — на 7,9% (pI–II < 0,001). В I группе больных ХГВ уровень HВsAg через 12 месяцев лечения стал ниже на 52% (p < 0,001).

Выводы. Проведенное пилотное исследование показало, что комплексная этиопатогенетическая терапия больных ХГВ тенофовиром и rIL-2 улучшает функциональное состояние печени, восстанавливает нарушенный баланс иммунокомпетентных клеток: повышая уровень СD4+, CD8+ Т-лимфоцитов, СD16+-лимфоцитов и снижая число СD20+-клеток, а также позволяет устойчиво снизить уровень HВsAg в сыворотке крови.

Полный текст

Введение

Актуальность хронического гепатита В (ХГВ) обусловлена его значительной распространенностью в мире и в России (около 260 млн случаев во всем мире), тяжестью исходов и весомым вкладом в общую летальность (в мире до миллиона случаев в год) [2]. В России 90% больных ХГВ составляют пациенты с HBeAg-негативной фазой заболевания, поэтому подходы к их лечению имеют особую значимость [1]. Молекулярные и клеточные механизмы патогенеза ХГВ обеспечивают длительную персистенцию вируса гепатита В (ВГB) в клетках хозяина, способствуя прогрессированию инфекционного процесса [14, 16, 24, 27]. Современная противовирусная терапия (ПВТ) синтетическими аналогами нуклеоз(т)идов (АН) не приводит к эрадикации вируса, а лишь ингибирует его репликацию [9, 10, 13]. У некоторых исследователей данные о развитии иммунной дисрегуляции на фоне ПВТ противоречивы [9, 12, 17, 22, 26]. Еще в 2012 г. Boni C. с соавт. отметила, что больные ХГВ, получавшие лечение АН и достигшие авиремии, при сохранении в крови поверхностного антигена (HBsAg), имели низкий уровень реактивности ВГB-специфичных Т-клеток, в связи с чем авторы рассматривают целесообразность применения иммунотропных препаратов для улучшения противовирусного Т-клеточного ответа [10]. Arasli M. в своем исследовании делает вывод о том, что у пациентов с ХГВ в течение однолетнего курса лечения тенофовиром значительно снижается не только вирусная нагрузка, но и процент CD4+ CD25+ FOXP3+ nTreg [9]. Duan S.P. и соавт. отмечает, что через 48 недель терапии больных ХГВ тенофовиром статистически достоверной разницы по содержанию Т-лимфоцитов в сравнении с исходными данными и группой контроля не получено [12]. Tülek N. и соавт. в своей работе указывают на то, что у больных ХГВ и носителей HBsAg уровень растворимого рецептора интерлейкина-2 (IL-2) и интерлейкин-10 (IL-10) в крови значительно выше значений группы здоровых лиц [22]. Wu J. и соавт. отмечают обратную корреляционную связь между уровнем CD4+ Т-лимфоцитов и длительностью персистенции вируса при ХГВ [26]. При изучении особенностей миелоидных супрессорных клеток (MDSC) как ключевого регулятора Т-лимфоцитов было показано, что при ХГВ ВГВ-специфичные CD4+/CD8+ Т-лимфоциты значительно ослабляли продукцию IL-2/IFNγ, при этом на фоне успешной терапии тенофовиром (12 месяцев) восстановления функции Т-лимфоцитов не произошло [17]. Описанные нарушения в различных звеньях иммунной системы обосновывают необходимость поиска иммуноориентированного лечения.

Рекомбинантный интерлейкин-2 (rIL-2) является структурным и функциональным аналогом эндогенного человеческого IL-2. Взаимодействуя с рецепторами клеток иммунной системы, он индуцирует рост, дифференцировку и пролиферацию Т- и В-лимфоцитов, моноцитов, макрофагов, олигодендроглиальных клеток, эпидермальных клеток Лангерганса, а также стимулирует цитолитическую активность натуральных киллеров и цитотоксических Т-лимфоцитов, повышает устойчивость клеток к апоптозу [15]. В ряде клинических исследований при лечении заболеваний, ведущим патогенетическим звеном которых является нарушение иммунной регуляции (аутоиммунные, онкологические, инфекционные), описаны положительные результаты применения rIL-2 [8, 11, 13, 15, 18, 19, 21, 23, 25, 28]. Включение rIL-2 в схему ПВТ при лечении больных ХГВ обусловлено соответствием его иммуномодулирующих свойств cтруктуре иммунных нарушений при ХГВ.

Кафедра инфекционных болезней с эпидемиологией ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России с 2006 г. изучает влияние иммуноориентированной терапии на состояние клеточного и гуморального иммунитета у больных хроническими вирусными гепатитами В, С. При проведении ПВТ у больных хроническим гепатитом С сочетанием пегилированного интерферона альфа (PegIFNα) и rIL-2 было показано положительное влияние rIL-2 на переносимость PegIFNα (купирование цитопенического синдрома) и параметры клеточного звена иммунитета (восстановление содержания NK-клеток и Т-лимфоцитов) [7]. С целью оптимизации этиотропного лечения у больных ХГВ было исследовано состояние клеточного иммунитета при назначении ламивудина в сочетании с rIL-2. Исследование показало, что наряду со снижением содержания ДНК ВГВ и HBsAg, происходит восстановление уровня CD4+ и CD16+ Т-лимфоцитов [5, 6]. Функциональные особенности циркуляции IFNα, IFNγ и IL-2 на фоне лечения больных ХГВ энтекавиром в режиме монотерапии были отражены в работах Поповой Л.Л., Зайцевой Е.А. Было показано, что у больных HBеAg-негативным ХГВ до начала ПВТ выявлено значимое снижение уровня IL-2, сывороточной и индуцированной продукции IIFNα, спонтанной и индуцированной продукции IFNγ по сравнению с группой контроля, при этом, через 12 месяцев лечения сохранялся сниженный уровень IL-2 и индуцированной продукции IFNα [3, 4].

С учетом известных иммунных нарушений, возникающих при ВГВ-инфекции, мы провели пилотное исследование по изучению результата включения rIL-2 в качестве адъювантного препарата в стандартную терапию ХГВ синтетическим нуклеоз(т)идным аналогом тенофовиром.

Цель исследования — оценить эффективность (биохимическую, иммунологическую, вирусологическую) комплексной терапии препаратами тенофовир и rIL-2 в лечении больных ХГВ.

Материалы и методы

В клинике инфекционных болезней ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России были проанализированы результаты динамического клинико-лабораторного и инструментального обследования больных ХГВ, получающих ПВТ. Диагноз ХГВ был сформулирован в соответствии с клиническими рекомендациями по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом В Европейской ассоциации по изучению заболеваний печени (EASL, 2017). Критерии включения в исследование: мужчины и женщины в возрасте от 18 до 50 лет с подтвержденным диагнозом ХГВ (HBeAg негативный, без дельта-агента), не получавшие ранее ПВТ, с повышенными значениями АлАТ, фиброзом печени F2–F3 стадии по METAVIR, вирусной нагрузкой ДНК ВГB более 2000 МЕ/мл. В исследование не были включены больные острыми вирусными гепатитами, циррозом печени, а также пациенты с микст-инфекцией (НСV, ВИЧ), аутоиммунным, токсико-аллергическим поражением печени, пациенты с болезнями накопления (гемохроматоз, болезнь Вильсона–Коновалова), онкологическими заболеваниями, системными заболеваниями соединительной ткани, сахарным диабетом, беременностью и лактацией.

Для иммуноферментного определения HВs- антигена вируса гепатита В (качественно и количественно) и ДНК ВГВ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) использовался набор реагентов «ВекторHBsAg-антитела» и «Реал-Бест ДНК ВГВ» соответственно, чувствительностью 15 МЕ/мл (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Определение биохимических показателей выполнялось при помощи анализатора «Hitachi-902» (Roche Diagnostics, Япония). Для идентификации популяций и субпопуляций лимфоцитов использовали стандартную панель моноклональных антител производства Becton Dickinson, включающую антитела к CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+ дифференцировочным антигенам лейкоцитов и соответствующие изотипические контроли. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости проводилось на сканере «Toshiba 370 A Powervision 6000». Стадию фиброза печени определяли методом эластографии на аппарате «FibroScan FS 502». Математико-статистическая обработка данных производилась с использованием приложений Microsoft Excel пакета Office 2016 и Statistica (StatSoft) версии 10.0.

Все пациенты в качестве противовирусного лечения получали препарат тенофовир 300 мг по 1 таблетке 1 раз в день не менее 12 месяцев. В качестве иммуноориентированной терапии был назначен rIL-2 российского производства. Схема была разработана и запатентована на кафедре инфекционных болезней с эпидемиологией ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России (патент на изобретение РФ № 2365381 от 27.06.2008). Курс иммуноориентированной терапии включал в себя внутривенное капельное введение rIL-2 в дозе 500 000 МЕ, со скоростью 1–2 мл/мин в течение 4–6 ч 2 раза в неделю — 1 месяц, затем указанный препарат вводили подкожно по 500 000 МЕ 2 раза в неделю в течение 2 месяцев. Повторный курс введения rIL-2 (подкожно по 500 000 МЕ 2 раза в неделю в течение 1 месяца) проводился на двенадцатом месяце лечения тенофовиром. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России с соблюдением закона о персональных данных РФ и проведено на основе письменного информированного согласия пациентов.

Среди пациентов (n = 52), планирующих лечение тенофовиром, были сформированы две группы сравнения, сопоставимые по полу, возрасту, стадии фиброза, вирусной нагрузке (табл. 1). I группу (n = 27) составили пациенты, которые получали тенофовир, согласно принятым рекомендациям, и rIL-2 в качестве терапии сопровождения; пациенты II группы (n = 25) лечились тенофовиром в режиме монотерапии.

 

Таблица 1. Сравнительная характеристика больных ХГВ разных групп наблюдения

Table 1. Comparative characteristics of chronic hepatitis B patients in different observation groups

Показатели

Parameters

Группы пациентов с ХГВ

Chronic hepatitis B patients groups

pI–II

I группа

1st group

n = 27

II группа

2nd group

n = 25

Возраст, лет

Age, years

39,6±8,7 (ДИ 33,1845–48,1419)

38,8±7,4 (ДИ 32,1788–46,1491)

0,945

Мужской пол, %

Male, %

42%

44%

0,662

Женский пол, %

Female, %

58%

56%

0,778

ДНК ВГB, 2000–20 000 МЕ/мл

HBV DNA, 2000–20 000 IU/ml

15%

18%

0,572

ДНК ВГB, > 20 000 Ме/мл

HBV DNA, > 20 000 IU/ml

85%

82%

0,765

HBsAg, 2000–30 000 МЕ/мл

HBsAg, 2000–30 000 IU/ml

87%

86%

0,547

HBsAg, > 30 000 МЕ/мл

HBsAg, > 30 000 IU/ml

13%

14%

0,879

F2 по METAVIR

F2 by METAVIR

78%

76%

0,678

F3 по METAVIR

F3 by METAVIR

22%

24%

0,887

 

Для сравнительной оценки показателей клеточных факторов иммунитета использовали результаты обследования здоровых доноров — группа К (n = 25).

Результаты

Результаты исследования биохимических показателей крови у пациентов в группах сравнения представлены в табл. 2.

 

Таблица 2. Биохимические показатели крови у больных ХГВ разных групп наблюдения перед ПВТ и через 12 месяцев от начала ее проведения в зависимости от способа лечения (Х±s)

Table 2. Blood biochemical parameters in chronic hepatitis B patients from various observation groups before AVT and 12 months after the onset based on treatment approach (Х±s)

Показатели (норма)

Parameters (norm)

Период наблюдения больных ХГВ

Chronic hepatitis B patients observation period

Группы пациентов с ХГВ

Chronic hepatitis B patients groups

p

I группа

1st group

n = 27

II группа

2nd group

n = 25

Общий билирубин, мкмоль/л (3,2–20,0)

Total bilirubin, mmol/l

до лечения

before treatment

18,1±1,5

(ДИ 17,5147–18,7812)

18,5±0,3

(ДИ 17,9111–19,1265)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

12,1±1,3

(ДИ 11,5412–12,7811)

17,1±0,7

(ДИ 16,5112–17,7835)

pI–II < 0,05

p1I < 0,001

p1II < 0,05

Общий белок, г/л (65–84)

Total protein, g/l

до лечения

before treatment

69,3±0,4

(ДИ 68,7412–71,0102)

68,1±0,3

(ДИ 67,5412–68,7813)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

70,3±0,1

(ДИ 69,7414–70,9125)

68,4±0,9

(ДИ 67,8145–69,0201)

pI–II < 0,05

p1I < 0,05

p1II > 0,05

Альбумин, г/л (34–53)

Albumin, g/l

до лечения

before treatment

50,1±0,2

(ДИ 49,5247–50,7814)

49,9±0,7

(ДИ 49,1245–51,5718)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

52,4±0,1

(ДИ 51,8745–53,0214)

51,8±0,8

(ДИ 51,2147–52,4517)

pI–II > 0,05

p1I < 0,05

p1II < 0,05

Гамма-глобулин, г/л (7–15)

Gamma-globulin, g/l

до лечения

before treatment

27,5±0,7

(ДИ 26,9117–28,1215)

26,5±1,1

(ДИ 25,9147–31,1265)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

21,1±0,6

(ДИ 20,5412–21,7965)

23,8±0,8

(ДИ 23,2175–24,4514)

pI–II < 0,01

p1I < 0,001

p1II < 0,05

АлАТ, Ед/л (до 38)

ALT, U/l

до лечения

before treatment

117,6±11,3

(ДИ 117,0103–118,2154)

126,5±19,5

(ДИ 125,9115–127,1423)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

47,6±6,7

(ДИ 46,5412–48,2574)

67,4±5,3

(ДИ 66,8415–68,0203)

pI–II < 0,01

p1I < 0,001

p1II < 0,001

АсАТ, Ед/л (до 40)

AST, U/l

до лечения

before treatment

79,5±8,3

(ДИ 78,9124–80,1547)

78,3±9,5

(ДИ 77,6452–78,9116)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

29,5±2,3

(ДИ 28,9147–30,1427)

38,4±2,5

(ДИ 37,8456–39,0104)

pI–II < 0,01

p1I < 0,001

p1II < 0,001

ЩФ, Ед/л (30–120)

AP, U/l

до лечения

before treatment

253,5±6,8

(ДИ 252,9115–254,1817)

252,4±8,7

(ДИ 251,8415–253,0013)

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

53,5±7,8

(ДИ 52,9418–54,1578)

87,4±9,5

(ДИ 86,8712–88,0021)

pI–II < 0,001

p1I < 0,001

p1II < 0,001

ГГТП, Ед/л (до 50)

GGT, U/l

до лечения

before treatment

89,3±7,6

(ДИ 88,7541–89,9112)

88,2±1,1

ДИ 87,6124–88,8114

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

57,8±4,1

(ДИ 57,2113–58,4517)

78,3±4,3

(ДИ 77,7145–78,9112)

pI–II < 0,001

p1I < 0,001

p1II < 0,05

Примечание. Здесь и далее: Х±s — cреднее±стандартное отклонение; p — вероятность ошибочного принятия альтернативной гипотезы о наличии межгрупповых различий; p1 — вероятность ошибочного принятия альтернативной гипотезы о наличии внутригрупповых различий: p1I — I группа, p1II — II группа.

Note. Hereinafter: Х±s — mean±standard deviation; p — probability of erroneous acceptance of an alternative hypothesis about present intergroup differences; p1 — probability of erroneous acceptance of an alternative hypothesis about present intragroup differences: p1I — group I, p1II — group II.

 

Перед стартом противовирусной терапии у всех больных ХГВ зарегистрировано повышение трансаминаз до 5 норм. Увеличение уровня щелочной фосфатазы (ЩФ) и гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТП) регистрировалось от 1,2 до 3 норм в I группе у 68 и 72% больных, а во II группе — в 66 и 73% случаях соответственно. Показатели общего билирубина у больных I группы в 33%, а во II — в 37% случаев превышали верхнюю границу референсных значений максимально до 2,5 норм. Статистически значимых отличий между биохимическими показателями исследуемых групп перед началом ПВТ не выявлено (pI–II > 0,05).

Через 12 месяцев лечения у всех больных I группы нормализовался уровень АЛТ и АСТ, общего билирубина (p1I < 0,001). Значения ГГТП и ЩФ в 93% случаев также снизились до референсных значений (все p1I < 0,001), по сравнению с показателями на старте терапии. Во II группе у 88% больных ХГВ также зарегистрирована нормализация функциональных проб печени: АЛТ, АСТ, ГГТП (все p1II < 0,001) и ЩФ, p1II < 0,05, относительно их значений до лечения. При сравнении биохимических показателей через 12 месяцев лечения I и II групп получены статистически значимые различия по показателям цитолиза и холестаза (pI–II < 0,01 и pI–II < 0,001 соответственно).

Было исследовано абсолютное содержание CD3+-, CD4+-, CD8+-, CD16+-, CD20+-лимфоцитов в сыворотке крови больных ХГВ до лечения и через 12 месяцев наблюдения на фоне ПВТ в описанных группах сравнения.

Результаты исследования уровня наиболее значимых субпопуляций лимфоцитов представлены в табл. 3.

 

Таблица 3. Характеристика основных показателей клеточных факторов иммунитета у больных ХГВ разных групп наблюдения перед ПВТ и через 12 месяцев от начала ее проведения в зависимости от способа лечения (Х±s)

Table 3. Characteristics of major cellular immune parameters in chronic hepatitis B patients from various observation groups before AVT and after 12 months after the onset based on treatment approach (Х±s)

Показатели (норма)

Parameters (norm)

Период наблюдения больных ХГВ

Chronic hepatitis B patients observation period

Группы обследуемых/Study groups

p

Kонтрольная группа, К

Сontrol group, K

n = 25

I группа (ХГВ)

1st group (chronic hepatitis B)

n = 27

II группа (ХГВ)

2nd group (chronic hepatitis B)

n = 25

Лейкоциты, × 109/л (4,0–9,0)

Leukocytes, × 109/l

до лечения

before treatment

5,11±0,02

4,80±0,08

(ДИ 4,7431–4,8643)

4,59±0,02

(ДИ 4,5314–4,6532)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

5,06±0,07

(ДИ 5,0090–5,1169)

4,51±0,18

(ДИ 4,4435–4,5714)

pI–II < 0,001

pI–К > 0,05

pII–К < 0,05

p1I < 0,01

p1II > 0,05

Лимфоциты, × 109/л (1,2–2,5)

Lymphocytes, × 109/l

до лечения

before treatment

1,97±0,05

1,69±0,01

(ДИ 1,6405–1,7536)

1,67±0,08

(ДИ 1,6201–1,7213)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

1,92±0,05

(ДИ 1,8615–1,9814)

1,73±0,03

(ДИ 1,6714–1,7956)

pI–II < 0,001

pI–К < 0,01

pII–К < 0,001

p1I < 0,001

p1II > 0,05

CD3+, × 109/л (0,95–1,8)

CD3+, × 109/l

до лечения

before treatment

1,33±0,01

1,23±0,01

(ДИ 1,1712–1,2945)

1,25±0,04

(ДИ 1,1912–1,3115)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

1,29±0,02

(ДИ 1,1457–1,4373)

1,25±0,01

(ДИ 1,1948–1,3145)

pI–II < 0,01

pI–К < 0,01

pII–К < 0,001

p1I < 0,01

p1II > 0,05

CD4+, × 109/л (0,57–1,1)

CD4+, × 109/l

до лечения

before treatment

0,85±0,07

0,65±0,05

(ДИ 0,5912–0,7125)

0,63±0,07

(ДИ 0,5713–0,6918)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

0,81±0,01

(ДИ 0,7547–0,8712)

0,72±0,03

(ДИ 0,6617–0,7825)

pI–II < 0,01

pI–К < 0,01

pII–К < 0,001

p1I < 0,001

p1II > 0,05

CD8+, × 109/л (0,45–0,85)

CD8+, × 109/l

до лечения

before treatment

0,56±0,03

0,41±0,03

(ДИ 0,3516–0,4719)

0,42±0,01

(ДИ 0,3618–0,4835)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

0,54±0,02

(ДИ 0,4811–0,6002)

0,43±0,03

(ДИ 0,3614–0,4917)

pI–II < 0,001

pI–К > 0,05

pII–К < 0,001

p1I < 0,001

p1II > 0,05

CD16+, × 109/л (0,18–0,42)

CD16+, × 109/l

до лечения

before treatment

0,35±0,03

0,18±0,03

(ДИ 0,1254–0,2413)

0,19±0,01

(ДИ 0,1356–0,2517)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

0,29±0,02

(ДИ 0,2345–0,3514)

0,21±0,01

(ДИ 0,1565–0,2748)

pI–II < 0,001

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

p1I < 0,001

p1II > 0,05

CD20+, × 109/л (0,15–0,40)

CD20+, × 109/l

до лечения

before treatment

0,29±0,02

0,39±0,01

(ДИ 0,3378–0,4569)

0,38±0,02

(ДИ 0,3214–0,4418)

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

0,25±0,03

(ДИ 0,1925–0,3156)

0,35±0,02

(ДИ 0,2917–0,4165)

pI–II < 0,001

pI–К > 0,05

pII–К < 0,001

p1I < 0,001

p1II > 0,05

CD4+/CD8+ (1,5–2,5)

до лечения

before treatment

1,91±0,05

1,44±0,08

(ДИ 1,3814–1,5006)

1,48±0,11

(ДИ 1,4257–1,5463)

pI–К < 0,001 pII–К < 0,001 pI–II > 0,05

через 12 месяцев лечения

after 12 month of treatment

1,64±0,01

(ДИ 1,5812–1,7005)

1,58±0,02

(ДИ 1,5214–1,6474)

pI–II < 0,01

pI–К < 0,001

pII–К < 0,001

p1I < 0,01

p1II > 0,05

Примечание. То же, что и для табл. 2.

Note. The same as for Table 2.

 

На старте ПВТ у пациентов I и II групп значения основных субпопуляций лимфоцитов: CD4+ (в 93 и 95% случаях соответственно), CD8+ (в 87 и 84%) и CD16+ (в 82 и 77%) — были у нижней границы нормы, а CD20+ (в 87 и 90%) регистрировались выше нормы и статистически значимо отличались от соответствующих показателей группы контроля (все pI–К < 0,001), pII–К < 0,001).

Через 12 месяцев лечения в I группе пациентов абсолютное содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток повысилось на 24 и 27% соответственно (все p1I < 0,001), что оказалось в среднем в 3–4 раза выше, чем во II группе (pI–II < 0,01). Во II группе пациентов при внутригрупповом сравнении средних значений CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов до старта и через 12 месяцев лечения различия были статистически не значимыми (p1II > 0,05).

Уровень CD16+ клеток у больных ХГВ через 12 месяцев лечения в I группе повысился на 34% и стал выше, чем во II группе (pI–II < 0,001).

Повышенное содержание CD20+-лимфоцитов, установленное у больных обеих групп на старте ПВТ, через 12 месяцев лечения в I группе пациентов снизилось на 31% и стало соответствовать значениям группы контроля, чего не произошло в группе сравнения, где снижение составило 8% (pI–II < 0,001).

Данные по динамике содержания ДНК ВГB и уровня HBsAg в сыворотке крови у больных ХГВ представлены в табл. 4.

 

Таблица 4. Динамика вирусологического ответа и уровня HBsAg у лиц различных групп наблюдений (Х±s)

Table 4. Dynamics of virological response and HBsAg levels in individuals from different observation groups (Х±s)

Показатели

Parameters

Период наблюдения больных ХГВ

Chronic hepatitis B patients observation period

Группы пациентов с ХГВ

Chronic hepatitis B patients groups

p

I группа

1st group

n = 27

II группа

2nd group

n = 25

ДНК ВГB, МЕ/мл

HBV DNA, IU/ml

до лечения

before treatment

1 230 785±92 786,3

1 345 187±82 548,5

pI–II > 0,05

лечение через 12 месяцев

after 12 month of treatment

0

0

pI–II > 0,05

p1

p1I < 0,001

p1II < 0,001

HBsAg, МЕ/мл

HBsAg, IU/ml

до лечения

before treatment

28 475,3±1728,5

26 895,3±1121,3

pI–II > 0,05

лечение через 12 месяцев

after 12 month of treatment

14 756,3±1278,3

21 646,5±2387,1

pI–II < 0,01

p1

p1I < 0,001

p1II < 0,05

Примечание. То же, что и для табл. 2.

Note. The same as for Table 2.

 

До начала противовирусного лечения у больных ХГВ регистрировалась вирусная нагрузка ДНК ВГB от 2 × 104 до 2 × 107 МЕ/мл, уровень HВsAg — от 2000 до 50 000 МЕ/мл. На фоне лечения тенофовиром была достигнута авиремия у 100% больных в обеих группах (p1I < 0,001 и p1II < 0,001 соответственно).

Содержание HBsAg менялось не однозначно. В I группе больных ХГВ, получавших комплексную терапию, уровень HBsAg через 12 месяцев лечения стал на 52% ниже, чем до начала терапии (p1I < 0,001). При этом в группе сравнения увеличилась дисперсия этого показателя, так как наряду со снижением уровня HBsAg, у 15% пациентов наблюдался его рост. В итоге, при общей тенденции к уменьшению средних значений HBsAg во II группе, межгрупповые различия оказались значимыми (pI–II < 0,01).

Обсуждение

В нашем пилотном исследовании зарегистрировано наличие у больных ХГВ дисбаланса в содержании основных субпопуляций лимфоцитов со снижением уровня СD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов, СD16+-лимфоцитов и повышением СD20+. Это согласуется с выводами других исследователей о негативном влиянии ВГВ как на врожденный, так и на адаптивный иммунитет в процессе длительной персистенции в иммунных клетках хозяина [27].

Возможности адъювантной терапии с иммунореставрационной целью обсуждается научным сообществом, однако единого мнения по выбору иммунотропного препарата нет. Так, исследователи, применявшие при лечении больных ХГВ АН в сочетании с PegIFNα, получили данные о снижении уровня HBsAg, а также увеличении активности NK-клеток [18]. Zhang X. в своем обзоре фокусируется на роли ВГB-специфического ответа Т-клеток, обсуждая новые стратегии в применении иммуномодулирующих препаратов, направленных на активацию противовирусного иммунитета с целью излечения ХГВ [29]. Wang D. и соавт., назначавшие rIL-2 после проведенной терапии ХГВ PegIFNα, отмечают снижение количества Treg и степень экспрессии белка программируемой гибели клеток 1 (PD-1), а также усиление функции ВГB-специфичных CD8+ Т-клеток [23]. Qi W. и соавт. сообщают об эффективности раннего введения rIL-2 в противовирусную схему лечения больных ХГВ, так как это способствует снижению уровня HBsAg в крови [19]

В нашем исследовании было показано, что при комплексном лечении больных ХГВ тенофовиром с rIL-2 по сравнению с пациентами, принимавшими тенофовир в режиме монотерапии, статистически значимо уменьшается дисбаланс в содержании основных субпопуляций лимфоцитов, за счет восстановления уровня СD4+ и CD8 Т-лимфоцитов, ИРИ и уменьшения числа СD20+-клеток. Также следует отметить более значительное и устойчивое снижение количества HBsAg. Аналогичный результат был описан в работе Wu D. при комбинированной терапии интерфероном, интерлейкином-2 и энтекавиром, при этом в процессе лечения отмечалась корреляция низкого уровня HВsAg с частичным восстановлением NK-клеток [25].

В настоящее время сроки завершения лечения больных ХГВ АН не определены. Длительный (многолетний) прием этих препаратов ориентирован на достижение сероконверсии по HBsAg, что происходит крайне редко. В исследовании Rivino L. показана роль функциональных ВГB-специфичных Т-клеток в качестве кандидата на иммунологический биомаркер для безопасного прекращения терапии у больных ХГВ [20]. Это согласуется с данными нашего исследования об уменьшении дисбаланса в содержании СD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в сочетании с устойчивым снижением уровня HBsAg, что может учитываться при определении сроков ПВТ у больных ХГВ.

Выводы

Проведенное пилотное исследование показало, что комплексная этиопатогенетическая терапия больных ХГВ тенофовиром и rIL-2 улучшает функциональное состояние печени, восстанавливает нарушенный баланс иммунокомпетентных клеток, повышая количество СD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов, СD16+-лимфоцитов и снижая число СD20+-клеток, а также позволяет устойчиво снизить уровень HВsAg в сыворотке крови.

В дальнейшем целесообразно исследовать состояние других компонентов иммунореактивности при проведении предложенной схемы лечения ХГВ.

Для повышения практической значимости предложенной комплексной терапии больных ХГВ тенофовиром и rIL-2 следует оценить ее эффективность и переносимость у большего числа пациентов.

×

Об авторах

Анастасия Федоровна Новикова

ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: a.f.novikova@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0002-7067-9069
SPIN-код: 1744-3938

к.м.н., ассистент кафедры инфекционных болезней с эпидемиологией

Россия, Самара

Лариса Леонидовна Попова

ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России

Email: ll_popova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0549-361X

д.м.н., профессор, профессор кафедры инфекционных болезней с эпидемиологией 

Россия, Самара

Дмитрий Юрьевич Константинов

ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России

Email: d.u.konstantinov@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0002-6177-8487

д.м.н., доцент, зав. кафедрой инфекционных болезней с эпидемиологией 

Россия, Самара

Список литературы

  1. Абдурахманов Д.Т. Хронический гепатит B и D. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 288 с. [Abdurahmanov D.T. Chronic hepatitis B and D. Moscow: GEOTAR-Media, 2010. 288 p. (In Russ.)]
  2. ВОЗ. Гепатит B. [WHO. Hepatitis B (In Russ.)] URL: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b (09.07.2021)
  3. Зайцева Е.А., Попова Л.Л., Константинов Д.Ю. Динамика отдельных показателей цитокинового спектра у больных с HBeAG-негативным гепатитом В на фоне проведения противовирусной терапии // Уральский медицинский журнал. 2017. № 1 (145). С. 73–77. [Zayceva E.A., Popova L.L., Konstantinov D.Y. The individual dynamics of the cytokine spectrum in patients with HBEAG-negative chronic hepatitis B on the background of antiviral therapy. Ural’skii meditsinskii zhurnal = Ural Medical Journal, 2017, no. 1 (145), pp. 73–77. (In Russ.)]
  4. Зайцева Е.А., Попова Л.Л., Константинов Д.Ю., Недугов Г.В. Новые возможности прогнозирования исходов противовирусной терапии у больных хроническим гепатитом В // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2018. № 3. C. 47–50. [Zaitseva E.A., Popova L.L., Konstantinov D.Y., Nedugov G.V. New possibilities of predicting the outcomes of antiviral therapy in patients with chronic hepatitis B. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. Aktual’nye voprosy = Epidemiology and Infectious Diseases. Current Items, 2018, no. 3, pp. 47–50. (In Russ.)] doi: 10.18565/epidem.2018.3.47-50
  5. Константинова Е.А., Константинов Д.Ю., Попова Л.Л. Роль иммуноопосредованной терапии при рецидиве HBeAg-негативного гепатита В // Поликлиника. 2015. № 1-1. С. 18–20. [Konstantinova E.A., Konstantinov D.Yu., Popova L.L. The role of immune-mediated therapy in relapsed HBEAG-negative hepatitis B. Poliklinika = Polyclinic, 2015, no. 1-1, pp. 18–20. (In Russ.)]
  6. Патент № 2365381 Российская Федерация, МПК A61K 38/20 (2006.01), A61P 1/16 (2006.01), A61K 38/21 (2006.01). Способ лечения хронического вирусного гепатита В. № 2006145918/14; заявлено 22.12.2006: опубликовано : 27.08.2009 / Попова Л.Л., Мельникова Е.А., Смирнов М.Н., Суздальцев А.А., Юрченко Н.Г., Константинов Д.Ю. Патентообладатель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет». 6 с. [Patent No. 2365381 Russian Federation, Int. Cl. A61K 38/20 (2006.01), A61P 1/16 (2006.01), A61K 38/21 (2006.01). Method of chronic virus hepatitis B treatment. No. 2006145918/14; application: 22.12.2006: date of publication 27.08.2009 / Popova L.L., Mel’nikova E.A., Smirnov M.N., Suzdal’tsev A.A., Yurchenko N.G., Konstantinov D.Yu. Proprietors: Gosudarstvennoe obrazovatel’noe uchrezhdenie vysshego professional’nogo obrazovanija “Samarskij gosudarstvennyj meditsinskij universitet”. 6 p. (In Russ.)]
  7. Попова Л.Л. Применение ронколейкина в противорецидивной терапии хронического вирусного гепатита С // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2007. № 5. С. 57–60. [Popova L.L. Use of roncoleukin in the antirecurrent therapy of chronic viral gepatitis C. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni = Epidemiology and Infectious Diseases, 2007, no. 5, pp. 57–60. (In Russ.)]
  8. Akbar S.M.F., Yoshida O., Hiasa Y. Immune therapies against chronic hepatitis B. J. Gastroenterol., 2022, vol. 57, no. 8, pp. 517–528. doi: 10.1007/s00535-022-01890-8
  9. Arasli M., Ustundag Y., Delikanli B., Harmandar F., Buyukuysal C. Peripheral blood lymphocyte dynamics and viral kinetics in patients with chronic active hepatitis B virus infection treated by tenofovir. Hepatogastroenterology, 2012, vol. 59, no. 115, pp. 851–857. doi: 10.5754/hge11580
  10. Boni C., Laccabue D., Lampertico P., Giuberti T., Viganò M., Schivazappa S., Alfieri A., Pesci M., Gaeta G.B., Brancaccio G., Colombo M., Missale G., Ferrari C. Restored function of HBV-specific T cells after long-term effective therapy with nucleos(t)ide analogues. Gastroenterology, 2012, vol. 143, no. 4, pp. 963–973.e9. doi: 10.1053/j.gastro.2012.07.014
  11. Czaja A.J. Exploring the pathogenic role and therapeutic implications of interleukin 2 in autoimmune hepatitis. Dig. Dis. Sci., 2021, vol. 66, no. 8, pp. 2493–2512. doi: 10.1007/s10620-020-06562-2
  12. Duan S.P., Zhu L.H., Hou L.J., Wang H.W., Zhu X.W., Hao J. [Effect of tenofovir disoproxil fumarate antiviral therapy on virus-specific CD8+ T cells function in patients with chronic hepatitis B]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, 2021, vol. 29, no. 5, pp. 421–426. (In Chinese). doi: 10.3760/cma.j.cn501113-20191113-00420
  13. He J., Zhang R., Shao M., Zhao X., Miao M., Chen J., Liu J., Zhang X., Zhang X., Jin Y., Wang Y., Zhang S., Zhu L., Jacob A., Jia R., You X., Li X., Li C., Zhou Y., Yang Y., Ye H., Liu Y., Su Y., Shen N., Alexander J., Guo J., Ambrus J., Lin X., Yu D., Sun X., Li Z. Efficacy and safety of low-dose IL-2 in the treatment of systemic lupus erythematosus: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Ann. Rheum. Dis., 2020, vol. 79, no. 1, pp. 141–149. doi: 10.1136/annrheumdis-2019-215396
  14. Meng Z., Chen Y., Lu M. Advances in targeting the innate and adaptive immune systems to cure chronic hepatitis B virus infection. Front. Immunol., 2020, vol. 10: 3127. doi: 10.3389/fimmu.2019.03127
  15. Mitra S., Leonard W.J. Biology of IL-2 and its therapeutic modulation: mechanisms and strategies. J. Leukoc. Biol., 2018, vol. 103, no. 4, pp. 643–655. doi: 10.1002/JLB.2RI0717-278R
  16. Paccoud O., Surgers L., Lacombe K. Infection par le virus de l’hépatite B: histoire naturelle, manifestations cliniques et principes thérapeutiques. Rev. Med. Interne., 2019, vol. 40, no. 9, pp. 590–598. doi: 10.1016/j.revmed.2019.03.333
  17. Pal S., Dey D., Chakraborty B.C., Nandi M., Khatun M., Banerjee S., Santra A., Ghosh R., Ahammed S.M., Chowdhury A., Datta S. Diverse facets of MDSC in different phases of chronic HBV infection: impact on HBV-specific T-cell response and homing. Hepatology, 2022, vol. 76, no. 3, pp. 759–774. doi: 10.1002/hep.32331
  18. Pang X., Zhang L., Liu N., Liu B., Chen Z., Li H., Chen M., Peng M., Ren H., Hu P. Combination of pegylated interferon-alpha and nucleos(t)ide analogue treatment enhances the activity of natural killer cells in nucleos(t)ide analogue experienced chronic hepatitis B patients. Clin. Exp. Immunol., 2020, vol. 202, no. 1, pp. 80–92. doi: 10.1111/cei.13486
  19. Qi W., Wang Y., Huang G., Wang K. Interleukin-2 promotes pegylated interferon alpha for hepatitis B surface antigen loss: a retrospective pragmatic clinical study at the Fourth Affiliated Hospital of Zhejiang University Medical College. Health Sci. Rep., 2022, vol. 5, no. 6: e932. doi: 10.1002/hsr2.932
  20. Rivino L., Le Bert N., Gill U.S., Kunasegaran K., Cheng Y., Tan D.Z., Becht E., Hansi N.K., Foster G.R., Su T.H., Tseng T.C., Lim S.G., Kao J.H., Newell E.W., Kennedy P.T., Bertoletti A. Hepatitis B virus-specific T cells associate with viral control upon nucleos(t)ide-analogue therapy discontinuation. J. Clin. Invest., 2018, vol. 128, no. 2, pp. 668–681. doi: 10.1172/JCI92812
  21. Shao M., He J., Zhang R., Zhang X., Yang Y., Li C., Liu X., Sun X., Li Z. Interleukin-2 deficiency associated with renal impairment in systemic lupus erythematosus. J. Interferon Cytokine Res., 2019, vol. 39, no. 2, pp. 117–124. doi: 10.1089/jir.2018.0016
  22. Tülek N., Saglam S.K., Saglam M., Türkyilmaz R., Yildiz M. Soluble interleukin-2 receptor and interleukin-10 levels in patients with chronic hepatitis B infection. Hepatogastroenterology, 2000, vol. 47, no. 33, pp. 828–831.
  23. Wang D., Fu B., Shen X., Guo C., Liu Y., Zhang J., Sun R., Ye Y., Li J., Tian Z., Wei H. Restoration of HBV-specific CD8+ T-cell responses by sequential low-dose IL-2 treatment in non-responder patients after IFN-α therapy. Signal. Transduct. Target. Ther., 2021, vol. 6, no. 1: 376. doi: 10.1038/s41392-021-00776-0
  24. Tsukuda S., Watashi K. Hepatitis B virus biology and life cycle. Antiviral. Res., 2020, vol. 182: 104925. doi: 10.1016/j.antiviral.2020.104925
  25. Wu D., Wang P., Han M., Chen Y., Chen X., Xia Q., Yan W., Wan X., Zhu C., Xie Q., Jiang J., Wei L., Tan D., Dou X., Yu Y., Hou J., Luo X., Ning Q. Sequential combination therapy with interferon, interleukin-2 and therapeutic vaccine in entecavir-suppressed chronic hepatitis B patients: the Endeavor study. Hepatol. Int., 2019, vol. 13, no. 5, pp. 573–586. doi: 10.1007/s12072-019-09956-1
  26. Wu J., Han M., Li J., Yang X., Yang D. Immunopathogenesis of HBV Infection. Adv. Exp. Med. Biol., 2020, vol. 1179, pp. 71–107. doi: 10.1007/978-981-13-9151-4_4
  27. Zhao F., Xie X., Tan X., Yu H., Tian M., Lv H., Qin C., Qi J., Zhu Q. The functions of hepatitis B virus encoding proteins: viral persistence and liver pathogenesis. Front. Immunol., 2021, vol. 12: 691766. doi: 10.3389/fimmu.2021.691766
  28. Zhu M.E., Wang Q., Zhou S., Wang B., Ke L., He P. Recombinant interleukin-2 stimulates lymphocyte recovery in patients with severe COVID-19. Exp. Ther. Med., 2021, vol. 21, no. 3: 227. doi: 10.3892/etm.2021.9658
  29. Zhu W., Liu H., Zhang X. Toward curative immunomodulation strategies for chronic hepatitis B virus infection. ACS Infect. Dis., 2019, vol. 5, no. 5, pp. 703–712. doi: 10.1021/acsinfecdis.8b00297

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Новикова А.Ф., Попова Л.Л., Константинов Д.Ю., 2023

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 64788 от 02.02.2016.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах