ВНУТРИЛАБОРАТОРНАЯ ВАЛИДАЦИЯ «ТИГРАТЕСТ® SARS-CoV-2» ТЕСТ НА ВЫСВОБОЖДЕНИЕ ИНТЕРФЕРОНА ГАММА IN VITRO ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В КРОВИ Т-ЛИМФОЦИТОВ, СПЕЦИФИЧЕСКИ ОТВЕЧАЮЩИХ НА АНТИГЕНЫ ВИРУСА SARS-CоV-2


Cite item

Abstract

Резюме. SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2), он же 2019-nCoV (2019-Novel Coronavirus) – вид коронавируса, из рода бетакоронавирусов (Betacoronavirus), обнаруженный в конце 2019 года у больных с пневмонией в Китае. «Коронавирусная инфекция COVID-19» (COrona VIrus Disease 2019), - «COVID-19», вызванная коронавирусом 2019 (COVID-19) распространилось по миру очень быстрыми темпами и унесла уже более 5,2 миллионов жизней во всем мире. Ограниченный успех в разработке новых лекарственных средств, а также использование существующих лекарственных препаратов для лечения COVID-19 привел к тому, что долгое время основными мерами профилактики были тестирование и изоляция заболевших, в настоящий момент, ситуацию в лучшую сторону меняет вакцинация.

Проведение мониторинга формирования гуморального и Т-клеточного популяционного иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 в условиях пандемии COVID-19 является необходимым элементом эпидемиологического надзора. Для оценки гуморального иммунитета широко применяют методы на основе ИФА, а для оценки клеточного иммунитета используют различные тест-системы, в том числе и на основе ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot).  Анализ ELISPOT — это высокочувствительный и специфичный метод определения количества отдельных Т-клеток, секретирующих цитокин, после стимуляции определенным антигеном. «ТиграТест® SARS-CoV-2» Тест на высвобождение интерферона гамма in vitro для определения в крови Т-лимфоцитов, специфически отвечающих на антигены вируса SARS-COV-2 производства АО «ГЕНЕРИУМ», изготовлен на платформе ELISPOT.

В настоящем исследовании описывается процедура лабораторной валидации тест-системы с определением следующих показателей: специфичность пары антител, влияние интерферирующих веществ, чувствительность и специфичность, прецизионность, стабильность образцов крови до извлечения из нее целевых клеток.

Разработанная тест-система показала высокую диагностическую чувствительность и специфичность. Cпецифичность «ТиграТест® SARS-CoV-2» составила 100%, чувствительность для иммунизированных вакциной «Гам-КОВИД-Вак» (Спутник V) - 91,67%, а чувствительность при оценке переболевших добровольцев 95,45%. При этом вариабельность результатов как внутри, так и межсерийного сравнения теста не превышала 25%, а хранение крови в условиях (18 – 25) ºС в течение 24 часов после отбора крови от пациента и извлечения из нее целевых клеток не оказывало влияние на результаты теста.

Abstract. SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2), also known as 2019-nCoV (2019-Novel Coronavirus) is a strain of coronavirus from the genus Betacoronavirus, discovered at the end of 2019 in patients with pneumonia in China. "Coronavirus infection COVID-19" (COrona VIrus Disease 2019), - "COVID-19" caused by coronavirus 2019 (COVID-19) has spread around the world at a very fast pace and has already claimed more than 5.2 million lives worldwide. Limited success in the development of new drugs, as well as the use of existing drugs for the treatment of COVID-19, has led to the fact that for a long time the main prevention measures were testing and isolation of the sick, at the moment, vaccination is changing the situation for the better. Monitoring the formation of humoral and T-cell population immunity to the SARS-CoV-2 virus during the COVID-19 pandemic is a necessary element of epidemiological surveillance. ELISA-based methods are widely used to assess humoral immunity, and various test systems are used to assess cellular immunity, including those based on ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot). The ELISPOT assay is a highly sensitive and specific method for quantifying individual cytokine-secreting T cells after being stimulated with a specific antigen. "TigraTest® SARS-CoV-2" Test for the release of interferon gamma in vitro to determine in the blood of T-lymphocytes that specifically respond to the antigens of the SARS-COV-2 virus manufactured by GENERIUM JSC, is made on the ELISPOT platform. This study describes the procedure for laboratory validation of a test system with the determination of the following indicators: specificity of a pair of antibodies, the influence of interfering substances, sensitivity and specificity, precision, stability of blood samples until the extraction of target cells from it. The developed test system showed high diagnostic sensitivity and specificity. The specificity of TigraTest® SARS-CoV-2 was 100%, the sensitivity for those immunized with the Gam-COVID-Vac vaccine (Sputnik V) was 91.67%, and the sensitivity in assessing recovered volunteers was 95.45%. At the same time, the variability of the results both within and between series comparison of the test did not exceed 25%, and storage of blood at (18–25) ºС for 24 hours after taking blood from the patient and extracting target cells from it did not affect the test results.

 

About the authors

Акционерное Общество "ГЕНЕРИУМ"

Author for correspondence.
Email: lyagoskin@ibcgenerium.ru
ORCID iD: 0000-0002-9058-1106

Начальник Отдела Аналитических методов Департамента Фармацевтического Анализа АО «ГЕНЕРИУМ», к.б.н.

Russian Federation

Акционерное Общество "ГЕНЕРИУМ"

Email: peignatieva@ibcgenerium.ru
ORCID iD: 0000-0003-4132-5971

химик-аналитик лаборатории биологических методов Отдела Аналитических методов Департамента Фармацевтического Анализа АО «ГЕНЕРИУМ»

Russian Federation

Акционерное Общество "ГЕНЕРИУМ"

Email: daobedkov@generium.ru
ORCID iD: 0000-0002-8719-7795

научный сотрудник лаборатории биологических методов Отдела Аналитических методов Департамента Фармацевтического Анализа АО «ГЕНЕРИУМ»

Russian Federation

Акционерное Общество "ГЕНЕРИУМ"

Email: iyegorova@generium.ru
ORCID iD: 0000-0001-7996-9321

Руководитель группы диагностических тест-систем Отдела молекулярной диагностики Департамента Фармацевтического Анализа АО «ГЕНЕРИУМ», д.в.н., доцент.

Russian Federation

Акционерное Общество "ГЕНЕРИУМ"

Email: Shukurov@ibcgenerium.ru
ORCID iD: 0000-0002-6532-7835

Директор Департамента Фармацевтического Анализа АО «ГЕНЕРИУМ», к.б.н.

Russian Federation

References

  1. COVID-19 - Important considerations for developing and using a vaccine // Inayat Ur Rahman, Niaz Ali, Farhana Ijaz, Aftab Afzal & Elsayed Fathi Abd_Allah // https://doi.org/10.1080/21645515.2020.1781507
  2. Zayed R.A., Omran D. and Zayed A.A. COVID-19 clinical and laboratory diagnosis overview // Journal of the Egyptian Public Health Association volume 96, Article number: 25 (2021).
  3. Jae-Hoon Kо, Eun-Jeong Joo, Su-Jin Park et al. Neutralizing Antibody Production in Asymptomatic and Mild COVID-19 Patients, in Comparison with Pneumonic COVID-19 Patients // J Clin Med. 2020 Jul; 9(7): 2268. doi: 10.3390/jcm9072268
  4. Потеряев Д.А., Хамитов Р.А., Ефимов Г.А., Шустер А.М. Перспективы использования технологической платформы ELISPOT в системе противоэпидемических мероприятий против новой коронавирусной инфекции COVID-19. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2020;20(3):146-158. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-3-146-158
  5. Потеряев Д.А., Аббасова С.Г., Игнатьева П.Е., Стрижакова О.М., Колесник С.В., Хамитов Р.А. Оценка Т-клеточного иммунитета к SARS-CoV-2 у переболевших и вакцинированных против COVID-19 лиц с помощью ELISPOT набора ТиграТест® SARS-CoV-2. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2021;21(3):178-192. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2021-21-3-178-192
  6. Smith J.G., Liu X., Kaufhold R.M., Clair J., and Caulfield M.J. Development and Validation of a Gamma Interferon ELISPOT Assay for Quantitation of Cellular Immune Responses to Varicella-Zoster Virus // doi: 10.1128/CDLI.8.5.871–879.2001
  7. Asai,T., Storkus W.J., and Whiteside T.L. Evaluation of the modified ELISPOT assay for gamma interferon production in cancer patients receiving antitumor vaccines. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145–154. doi: 10.1128/CDLI.7.2.145-154.2000
  8. Power, C.A., C.L. Grand, N. Ismail, N.C. Peters, D.P. Yurkowski, and P.A. Bretscher. 1999. A valid ELISPOT assay for enumeration of ex vivo, antigen specific, IFN-γ-producing cells. J. Immunol. Methods 227:99–107. doi: 10.1016/s0022-1759(99)00074-5
  9. Janetzki S, Cox J.H., Oden N., and Ferrari G. Standardization and Validation Issues of the ELISPOT Assay // Methods in Molecular Biology, vol. 302: Handbook of ELISPOT: Methods and Protocol Methods Mol Biol. 2005;302:51-86. doi: 10.1385/1-59259-903-6:051.
  10. Matijevic M. and Urban R.G. Use of Interferon-γ ELISPOT in Monitoring Immune Responses in Humans // Methods Mol Biol. 2005; 302:237-52. doi: 10.1385/1-59259-903-6:237.
  11. Lalvani A., Pareek M. Interferon gamma release assays: principles and practice // Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010 Apr;28(4):245-52. doi: 10.1016/j.eimc.2009.05.012. Epub 2009 Sep 24.
  12. Henriksen L.O., Faber N.R., Moller M.F., Nexo E. and Hansen A.B. Stability of 35 biochemical and immunological routine tests after 10 hours storage and transport of human whole blood at 21°C // Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation. Volume 74, 2014 - Issue 7. https://doi.org/10.3109/00365513.2014.928940
  13. Posevitz-Fejfár A., Posevitz V., Gross C.C., Bhatia U., Kurth F., Schütte V., Bar-Or A., Meuth S.G, Wiendl H. Effects of Blood Transportation on Human Peripheral Mononuclear Cell Yield, Phenotype and Function: Implications for Immune Cell Biobanking // https://doi.org/10.1371/journal.pone.0115920
  14. Keith H., Wong K., Sandlin R.D., Carey T.R., Miller K.L, Shank A.T., Oklu R., Maheswaran Sh., Haber D.A., Irimia D., Stott Sh.L. and Toner M. The Role of Physical Stabilization in Whole Blood Preservation // Scientific Reports, volume 6, Article number: 21023 (2016).

Supplementary files

There are no supplementary files to display.


Copyright (c) ., ., ., ., .

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies