Biomedical parameters assessed in pregnant mice receiving oral commercial nanosilver preparations

Full Text

Введение

Проблема борьбы с антибиотикоустойчивыми штаммами возбудителей инфекционных заболеваний продолжает оставаться актуальной для медицины [1, 5]. Среди новейших разработок современных ученых на первое место выходит направление нанотехнологии, занимающееся синтезом наночастиц, имеющих размер менее 100 нм, что позволяет им проникать через микроскопические поры и уничтожать бактерии [9, 12, 16, 17]. В настоящее время использование препаратов наносеребра считается очень перспективным в связи с отсутствием устойчивых к нему форм микробов, грибов и вирусов [22]. Поэтому широко рассматривается возможность терапевтического применения наночастиц серебра [7]. Большинство препаратов коллоидного наносеребра используют в медицине и в косметологии путем наружного применения [19]. Значительно реже наноколлоид серебра используется перорально для лечения инфекций желудочно-кишечного тракта [11]. При создании таких препаратов прежде всего учитывается их безопасность, однако исследования, проведенные в последнее десятилетие, показывают различные результаты [2]. Так в работе Shahare B. (2013) установлено, что при пероральном воздействии наносеребра на слизистую тонкой кишки мышей уничтожаются микроворсинки энтероцитов, что способствует уменьшению площади всасывания питательных веществ и приводит к потере массы животных [25]. При вдыхании наносеребра крысами отмечено его распределение по всему организму и отложение в низких концентрациях в сердце, почках, селезенке, печени, мозге [26]. В исследованиях Gromadszka-Ostrovwska J. с соавт. выявлено, что накопление наносеребра влияет на функционирование репродуктивной системы, проявляя цитотоксический эффект, повреждая клетки свободными радикалами [22, 24]. Однако при контакте клеток с наночастицами более 500 нм инициируется иммунный ответ в виде фагоцитоза/пиноцитоза, поэтому для антибактериальных целей обычно используют наносеребро диаметром 50 нм [27]. Установлено, что антибактериальные свойства серебра обусловлены контактом ионов с органическими жидкостями, а наибольшая их реактогенность наступает при взаимодействии с соединениями серы с образованием ионов серебра, которые проникают в бактериальные клетки и приводят к их гибели [18, 23]. Наносеребро имеет доказанную эффективность, тем не менее основные проблемы его использования связаны с токсичностью, представляющей высокий риск для здоровья человека и зависящей от формы, количества и размера применяемых частиц [19].

Особый интерес представляет использование наносеребра для санации воспалительных очагов различной локализации и этиологии у беременных, что обусловлено ограниченным спектром препаратов, используемых в этом состоянии. Однако среди множества исследований, проводимых по нанотоксикологии, лишь немногие касаются оценки влияния наносеребра на репродуктивную функцию, используя в качестве экспериментальных животных самок, что делает данное исследование актуальным [21, 24].

В связи с этим целью работы стало определение безопасности использования коммерческих препаратов коллоидного наносеребра при беременности путем оценки состояния микробиоты и местной неспецифической резистентности толстой кишки мышей, изучения морфологии жизненно важных органов мышей, выпаиваемых препаратами наносеребра на течение и исход беременности. Были поставлены следующие задачи:

1. Провести бактериологические, биохимические исследования фекалий экспериментальных животных до и после использования препаратов коллоидного наносеребра.
2. Оценить достижение эффективности проводимых мероприятий по нормализации численности УМП и уровня МДА.
3. Оценить нормальность течения и исход беременности у мышей.
4. Провести после родов гистологическое исследование органов для оценки возможного влияния наносеребра на мозг, печень, почки самок и печень приплода после вскармливания молоком матери, принимавшей препарат серебра во время беременности.

Материалы и методы

Для исследования из аптечной сети эмпирически были выбраны коммерческие препараты коллоидного наносеребра «Аджента» и «Витаргол», рекомендованные к внутреннему применению людям, но противопоказанные при беременности в связи с отсутствием экспериментальных данных.

Эксперимент был проведен дважды, в апреле 2023 и 2024 гг. Материалом для исследования служило содержимое толстой кишки 36 белых беспородных беременных мышей весом 20–24 г. Самки были взяты в эксперимент на 4–5 день беременности.

Мышей распределяли на группы по 6 особей в каждой: группа К — животные, не принимавшие препараты серебра, группа 1 — мыши, принимавшие водный раствор коммерческого препарата коллоидного серебра «Аджента» AgА (30 ppm — 300 мг/л), группа 2 — мыши, принимавшие водный раствор коммерческого препарата коллоидного серебра «Витаргол» AgВ (30 ppm — 300 мг/л). В скобках указана исходная концентрация серебра до его разведения.

Разведение препаратов серебра осуществляли питьевой бутилированной водой, которой поили контрольных и экспериментальных животных. Приготовление растворов серебра проводили в соответствие с инструкцией по применению препаратов, добавляя к 1000 мл воды 50 мл раствора «Адженты», а к 900 мл воды 1,5 мл раствора «Витаргола». На протяжении 30 суток мышей выпаивали в дозе, пересчитанной на вес животного, по 0,1 мл (2 капли) 2 раза в сутки.

Работа с животными проводилась в соответствие с Директивой 2010/63/ЕС международной Конвенции об охране животных, используемых в научных целях, а также согласно ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур», на основании Протокола Локального этического комитета при Ростовском научно-исследовательском институте микробиологии и паразитологии от 2023 г.

В ходе эксперимента животным боль не причинялась. Изъятие органов для гистологического исследования проводилось у минимального количества особей (по 3 из каждой исследуемой группы) после их усыпления эфиром. Органы были фиксированы в 15% растворе формалина.

В работе использованы бактериологические и биохимические методы исследования содержимого толстой кишки.

Исследования микрофлоры содержимого толстой кишки осуществляли микробиологическими методами [4, 15] в соответствии с Приказом Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985 «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений», ОСТ 91500.11.0004-2003, утв. Приказом Минздрава РФ от 09.06.2003 г. № 231 и методическими рекомендациям 2007 г.

Определение активностей антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы и количества продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ) — малонового диальдегида (МДА) — определяли в копрофильтратах спектрометрически по стандартным биохимическим методикам [3, 8, 13, 14].

Гистологическое исследование органов родивших самок и их детей осуществляли путем микроскопии срезов биоптатов (почек, печени, мозга), окрашенных гематоксилин-эозином.

Статистическая обработка данных проводилась с применением программного обеспечения «Statistica 10.0 for Windows XP».

Результаты

Результаты бактериологического исследования микробиоты толстой кишки экспериментальных животных свидетельствуют об одинаковом микробном пейзаже, присутствующем как у интактных животных, так и у мышей до использования препаратов серебра. В связи с этим, их данные были объединены и представлены в колонке «до санации» в табл. 1. Среди представителей нормальной микрофлоры присутствовали Lactobacillus в количестве lg 7,3±0,3 КОЕ/г, Bifidobacterium — lg 8,4±0,4 КОЕ/г, E. coli с нормальной ферментативной активностью — lg 8,2±0,4 КОЕ/г и Enterococcus fecalis — lg 7,0±0,3 КОЕ/г. Среди условно-патогенной микрофлоры присутствовали: Proteus mirabilis lg 2,0±0,1 КОЕ/г, условно-патогенные энтеробактерии (Citrobacter freundii, Hafnia alvei) lg 5,3±0,2 КОЕ/г, коагулазоотрицательные стафилококки lg 6,1±0,3 КОЕ/г, дрожжеподобные грибы р. Candida 6,0±0,2 КОЕ/г, клостридии отсутствовали (табл. 1).

 

Таблица 1. Состояние микробиоты толстой кишки беременных мышей до (К) и после 30-дневного перорального использования препаратов коллоидного наносеребра

Table 1. Colon microbiota in pregnant mice before (K) and 30 days after oral colloidal nanosilver preparation intake

Микроорганизмы Мicroorganisms	Среднее количество микроорганизмов lg KOE/г в разных группах мышей Average number of microorganisms lg KOE/g
	До санации Before therapy	После санации After therapy
	К n = 12	1 группа AgА 1 group AgA n = 12	2 группа AgВ 2 group AgB n = 12
Бифидобактерии Bifidobacteria	8,4±0,4	10,0±0,5* р < 0,05 р < 0,1	10,0±0,5* р < 0,05 р < 0,1
Лактобактерии Lactobacteria	7,3±0,3	8,2±0,1* р < 0,05 р < 0,1	8,2±0,1* р < 0,05 р < 0,1
E. coli с НФА E. coli NFA	8,2±0,4	5,6±0,2*, ** р < 0,05 р < 0,05	5,0±0,2*, ** р < 0,05 р < 0,05
Энтерококки Enterococcus	7,0±0,3	7,0±0,1 р < 0,1 р < 0,1	7,0±0,1 р < 0,1 р < 0,1
Proteus mirabilis	2,0±0,1	2,0±0,1 р < 0,1 р < 0,1	2,0±0,1 р < 0,1 р < 0,1
Hafnia alvei	5,3±0,2	0* р < 0,05 р < 0,1	0* р < 0,05 р < 0,1
Сitrobacter freundii	5,3±0,2	0* р < 0,05 р < 0,1	0* р < 0,05 р < 0,1
Стафилококки коагулазоотрицательные Staphylococci coagulase-negative	6,1±0,2	6,0±0,2 р < 0,1 р < 0,1	6,0±0,2 р < 0,1 р < 0,1
p. Clostridium	0	0	0
Дрожжеподобные грибы Yeast-like fungi Candida sp.	6,0±0,2	5,2±0,2* р < 0,05 р < 0,1	5,0±0,2* р < 0,05 р < 0,1

Примечание. НФА (нормальная ферментативная активность); * — достоверность отличий изучаемого показателя в группах 1 и 2 от группы К, р < 0,05; ** — достоверность отличий изучаемого показателя в группах сравнения (1 и 2), р < 0,05.

Note. NFA (normal enzymatic activity); * — significant differences between groups 1 and 2 from group K, p < 0.05; ** — significant difference in comparison groups (1 and 2), p < 0.05.

 

Изменение количества типичных эшерихий во второй группе произошло через 7 дней употребления коллоидного серебра, при этом в первой группе их количество снизилось на один порядок относительно контроля, достигая своего минимального уровня lg 5,6±0,2 КОЕ/г к 30 суткам, тогда как во второй группе численность эшерихий достоверно уменьшилась относительно контроля в 2 раза — до lg 4,0±0,2 КОЕ/г с последующим увеличением количества на один порядок к последним суткам исследования.

На протяжении 7 дней приема обоих препаратов коллоидного серебра содержание бифидобактерий оставалось стабильным и соответствовало контрольным значениям, на 23 сутки уровень бифидобактерий увеличился до lg 10,0±0,5 КОЕ/г и оставался таковым до окончания исследования.

Уровень лактобактерий в обеих экспериментальных группах в течение 7 суток сохранялся стабильным, соответствуя контрольным значениям. С 14 суток приема препаратов содержание лактобактерий увеличивалось на один порядок, оставаясь на том же уровне до конца наблюдения.

Характерным для всех животных явилось одинаковое действие наносеребра на численность протея. Так на 22 сутки приема препаратов уровень протея сравнялся с контрольным — lg 2,0±0,1 КОЕ/г. На 23 сутки протей не определялся, а затем, к 30 суткам, появлялся вновь, несмотря на непрерывный прием препаратов.

Численность коагулазоотрицательных стафилококков во всех исследуемых группах на протяжении всего срока исследования оставалась неизменной, соответствующей контрольному уровню.

На 23 сутки использования наносеребра в составе микробиоты мышей 1 и 2 групп не выявлялись условно-патогенные энтеробактерии — гафнии и цитробактеры, присутствующие в группе контроля.

В результате месячного приема разными группами животных коллоидного серебра (AgА и AgB) в рекомендованной дозе численность кандид в содержимом кишечника снизилась на 1 порядок — с lg 6,0 до lg 5,0 КОЕ/г фекалий, при этом не достигнув нормального уровня (≤ lg 4,0).

Действие препаратов наносеребра на беременность и на развитие приплода у мышей. На протяжении всей беременности по внешнему виду и поведению экспериментальные животные не отличались от особей контрольной группы.

Периодическое взвешивание беременных самок свидетельствовало о регулярной прибавке веса во всех группах, принимавших разные препараты наносеребра (табл. 2).

 

Таблица 2. Динамика изменения веса у беременных самок и их приплода в ходе эксперимента

Table 2. Body weight dynamics in pregnant female mice and paired offspring during the experiment

Группы мышей Groups of mice		Средний вес (г) в группе (t, недели) Average weight (g) in the group (t, weeks)
		t1	t2	t3	t4
Беременные самки Pregnant females	K, n = 12	32,2±1,1	34,8±1,5	36,1±1,6	22,2±0,9
	«Аджента» “Adjenta” n = 12	31,8±1,2	34,2±1,4	35,9±1,5	20,5±0,8
	«Витаргол» “Vitargol” n = 12	32,3±1,1	34,3±1,4	36,0±1,6	22,3±0,9
Приплод Offspring	K, n = 96	1,5±0,2	11,5±0,4	16,3±0,7	–
	«Аджента» “Adjenta” n = 96	1,4±0,3	10,8±0,5	16,0±0,7	–
	«Витаргол» “Vitargol” n = 96	1,5±0,2	10,8±0,5	16,1±0,7	–

 

На 21–23 день у каждой самки родилось по 8 детенышей.

Внешний вид и поведение приплода в экспериментальных группах не отличались от приплода в контрольной группе. Все детеныши самостоятельно питались материнским молоком, набирали вес (с 1,4 г до 16 г) и были активны. На 7 сутки после рождения у мышат отлипли уши, на 11 сутки появилась шерсть, на 13 сутки открылись глаза. В трехнедельном возрасте потомство перешло к самостоятельному питанию.

Действие препаратов наносеребра на местную антиоксидантную защиту и на процессы пероксидации. Исследование состояния местной неспецифической резистентности в толстой кишке у беременных мышей, принимавших перорально препараты наносеребра, выявило различие в активности сопряженных антиоксидантных ферментов (СОД и каталазы) в сравниваемых группах мышей.

Средние показатели активности антиоксидантных ферментов СОД и каталазы, а также среднее содержание МДА в копрофильтратах беременных мышей, принимавших препараты наносеребра, представлены на рис. 1.

 

Рисунок 1. Средние показатели активности СОД, каталазы и содержания МДА в копрофильтратах мышей, получавших разные препараты наносеребра (%)

 

Определение активности антиоксидантных ферментов СОД и каталазы в копрофильтратах самок мышей, принимавших перорально терапевтические дозы коллоидного наносеребра — АgА, АgВ на протяжении 30 дней, выявило снижение уровня всех показателей относительно контроля за исключением активности ферментов в группе животных, получавших коллоидное серебро АgА, у которых активность СОД достоверно превышала контрольные значения в 1,4 раза (p < 0,05). При использовании АgВ отмечались максимально низкая активность антиоксидантных ферментов и высокий уровень продукта перекисного окисления липидов — МДА (рис. 1).

Оценка состояния местной неспецифической резистентности в копрофильтратах после терапии «Аджентой» с достоверностью (р < 0,05) выявила дисбаланс в работе антиоксидантных ферментов, когда активность супероксиддисмутазы на 46% превышала контрольный уровень, а активность каталазы была ниже контрольной на 50%, что способствовало увеличению содержания продукта пероксидации — малонового диальдегида на 164%. После терапии «Витарголом» количество МДА достигало большего уровня, как относительно контроля, так и относительно сравниваемой группы, составляя 431%. При этом активность СОД и каталазы составляла всего лишь 43% и 25% соответственно, что свидетельствует о несостоятельности местной антирадикальной защиты.

Гистологическое исследование органов экспериментальных животных. Морфологические изменения в органах экспериментальных животных после приема препаратов коллоидного серебра визуализированы на рисунках (Б) и (В) 2–5, для сравнения рядом с ними представлены контрольные изображения (А) (III обложка).

Микроскопическое описание рисунка 2 (Б): в коре умеренно выраженный периваскулярный и перицеллюлярный отек, умеренно выраженное кровенаполнение сосудов, дистрофические изменения нейронов.

Микроскопическое описание рисунка 2 (В): в препарате представлен мозжечок — умеренно выраженный периваскулярный и перицеллюлярный отек, умеренное кровенаполнение сосудов, дистрофия нейронов.

Микроскопическое описание рисунка 3 (Б): полнокровие, дольковое строение, ядра округлой формы контурируются четко во всех полях зрения, цитоплазма зернистая, в печеночных дольках умеренно выраженная дискомплексация гепатоцитов.

Микроскопическое описание рисунка 3 (В): перинуклеарно отмечается просветление цитоплазмы в отдельных группах, ядра округлой формы контурируются четко во всех полях зрения, цитоплазма зернистая.

Микроскопическое описание рисунка 4 (Б): венозное полнокровие межканальцевых вен, капилляров почечных клубочков, цитоплазма нефроцитов дистальных и проксимальных канальцев зернистая.

Микроскопическое описание рисунка 4 (В): венозное полнокровие, в интерстиции мелкоочаговые свежие кровоизлияния, дистальные и проксимальные канальцы — без особенностей, ядра нефроцитов округлой формы контурируются четко во всех полях зрения, цитоплазма зернистая.

Микроскопическое описание рисунка 5 (Б) и (В): полнокровие центральных вен и гемокапилляров, дольковое строение сохранено, балочное расположение в дольках просматривается, умеренно выраженная их дискомплексация, ядра гепатоцитов округлой формы, цитоплазма зернистая.

 

Рисунок 2. Препарат ткани мозга самок мышей до (А) и после приема препаратов «Витаргол» (Б) и «Аджента» (В). Примечание. Микроскоп «LEICA DFC 295» (Окуляр НС Plan ×10/20. Объектив HI-Plan ×10/0,25).

 

Рисунок 3. Препарат ткани печени самок мышей до (А) и после приема препаратов «Витаргол» (Б) и «Аджента» (В). Примечание. Микроскоп «LEICA DFC 295» (Окуляр НС Plan ×10/20. Объектив HI-Plan ×10 /0,25).

 

Рисунок 4. Препарат ткани почки самок мышей до (А) и после приема препаратов «Витаргол» (Б) и «Аджента» (В). Примечание. Микроскоп «LEICA DFC 295» (Окуляр НС Plan ×10/20. Объектив HI-Plan ×10 /0,25).

 

Рисунок 5. Препарат ткани печени молоди мышей до (А) и после приема препаратов «Витаргол» (В) и «Аджента» (С). Примечание. Микроскоп «LEICA DFC 295» (Окуляр НС Plan ×10/20. Объектив HI-Plan ×10 /0,25).

 

Обсуждение

Микробиологическое исследование содержимого толстой кишки беременных самок, выпаиваемых препаратами «Аджента» и «Витаргол», выявило идентичность изменений показателей в ходе эксперимента результатам аналогичного исследования, проводимого на самцах в 2022 г. Зафиксировано достижение микробного баланса с элиминацией условно-патогенных возбудителей, исчезновение протея и восстановление его первоначальной численности после перорального приема обоих препаратов наносеребра. Сравнение противокандидозного эффекта препаратов коллоидного серебра в модели in vivo выявило их незначительное действие при пероральном использовании, позволяющее лишь уменьшить численность кандид, что может быть обусловлено связыванием частиц серебра с микроэлементами макроорганизма, которое могло способствовать снижению дозы воздействия, являющейся достаточной для бактерий и недостаточной для дрожжеподобных грибов.

Результаты нашего биохимического исследования копрофильтратов свидетельствуют об угнетении антиоксидантной защиты при активации процессов пероксидации, что непосредственно связано с присутствием свободнорадикальных процессов. Полученные нами данные согласуются с результатами исследований, выявивших активацию процессов, приводящих к окислительному стрессу в эукариотических клетках в присутствии наносеребра [10]. Сведение о том, что наносеребро при высоких дозах (0,1 мг/см³ Аg) является индуктором окислительного стресса в клеточных культурах и в организмах гидробионтов присутствует в опубликованных работах [20]. В работе по токсикологической оценке коллоидного наносеребра Гмошинский И.В. с соавт. в 2015 г. определяли содержание малонового диальдегида в плазме крови, а активность ферментов антиоксидантной защиты — в эритроцитах [6]. Результаты их исследования свидетельствовали об активации ключевых ферментов системы детоксикации ксенобиотиков, указывающей на ее функциональное перенапряжение, обусловленное повышенными дозами серебра [6]. В нашем случае несостоятельность местной неспецифической резистентности не может быть связана с дозой, так как количества обоих препаратов коллоидного наносеребра не превышали терапевтические значения. Возможно, такой эффект обусловлен сильной антибактериальной активностью препаратов, в результате чего увеличивалась концентрация Н₂О₂ и погибших клеток бактерий, что в свою очередь могло вызвать усиление процессов пероксидации и интоксикации с возрастанием нагрузки на детоксикационные органы макроорганизма.

В результате проведенного гистологического анализа печени, почек и мозга самок, принимавших во время беременности препараты наносеребра, выявлены некоторые морфологические изменения в тканях. При микроскопическом исследовании всех биоптатов органов экспериментальных мышей из групп, принимавших коммерческие препараты коллоидного наносеребра «Аджента» и «Витаргол», каких-либо принципиальных отличий не обнаружено. У всех животных присутствует зернистая дистрофия гепатоцитов, нефроцитов проксимальных и дистальных канальцев, в препаратах печени перинуклеарно имеется просветление цитоплазмы в отдельных группах печеночных клеток. Во всех препаратах мозга — умеренно выраженный периваскулярно-перицеллюлярный отек, полнокровие сосудов, дистрофия нейронов.

Однако при гистологическом исследовании печени молоди, выросшей на грудном молоке самок, также принимавших в терапевтических дозах «Витаргол», каких-либо отрицательных изменений обнаружено не было.

Ни один из препаратов коллоидного наносеребра отрицательного действия на течение и исход беременности у мышей не оказал.

Заключение

Таким образом, в эксперименте зафиксировано позитивное действие обоих препаратов «Аджента» и «Витаргол» по восстановлению микробного баланса в кишечном микробиоме беременных мышей с элиминацией условно-патогенных возбудителей и негативное действие на состояние местной неспецифической резистентности в толстой кишке животных. Полученные данные о высоком количестве МДА в копрофильтратах мышей после внутреннего использования препаратов свидетельствуют о токсическом действии наночастиц серебра, в основе которого лежит интенсификация процессов перекисного окисления липидов, увеличивающая проницаемость клеточных мембран. Возможно, этот факт подтверждают результаты послеродового гистологического исследования жизненно важных органов самок (мозг, печень, почки), установившего в них патоморфологические изменения после перорального приема препаратов. Однако отрицательного воздействия наносеребра через материнское молоко на печень молоди не выявлено. Процесс беременности протекал нормально и имел благополучный исход.

Несмотря на существование положительных фактов, зафиксированных в эксперименте по пероральному использованию препаратов «Аджента» и «Витаргол» при беременности, сделать однозначный вывод невозможно.

About the authors

Marina N. Gapon

Rostov Research Institute of Microbiology and Parasitology of Rospotrebnadzor

Author for correspondence.
Email: marina.gapon@mail.ru

PhD (Biology), Leading Researcher of Laboratory of Microbiology of Water Bodies and Human Microbial Ecology

Россия, Rostov-on-Don

E. A. Ivanova

Rostov Research Institute of Microbiology and Parasitology of Rospotrebnadzor

Email: marina.gapon@mail.ru

Junior Researcher, Laboratory of Microbiology of Water Bodies and Human Microbial Ecology

Россия, Rostov-on-Don

T. I. Tverdokhlebova

Rostov Research Institute of Microbiology and Parasitology of Rospotrebnadzor; Rostov State Medical University of the Ministry of Health of Russia

Email: marina.gapon@mail.ru

DSc (Medicine), Director; Associate Professor, Department of Epidemiology

Россия, Rostov-on-Don; Rostov-on-Don

А. V. Kantaria

Pathoanatomical Bureau

Email: marina.gapon@mail.ru

Pathologist, Head of the Laboratory

Россия, Rostov-on-Don

Z. T. Tagirov

Rostov State Medical University of the Ministry of Health of Russia

Email: marina.gapon@mail.ru

PhD (Medicine), Associate Professor of the Department of Pathological Physiology

Россия, Rostov-on-Don

I. A. Loginov

Rostov State Medical University of the Ministry of Health of Russia

Email: marina.gapon@mail.ru

PhD (Medicine), Associate Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology No. 1

Россия, Rostov-on-Don

E. A. Gapon

Rostov Research Institute of Microbiology and Parasitology of Rospotrebnadzor; Rostov State Medical University of the Ministry of Health of Russia

Email: marina.gapon@mail.ru

Epidemiologist; Resident

Россия, Rostov-on-Don; Rostov-on-Don

References

Supplementary files