Analysis of the state of immunity in patients with chronic gastritis infected with Helicobacter pylori

Full Text

Введение

В настоящее время показана связь между инфицированием организма агентами бактериальной и вирусной природы и развитием аутоиммунных заболеваний разного характера. Стало очевидным, что эволюционные процессы могут стимулировать фиксацию генетических вариаций, которые увеличивают или уменьшают степень иммунологической защиты организма от инфекций, но также приводят к более высокому риску развития аутоиммунных заболеваний [11]. В группу инфекционных агентов, которые могут служить потенциальными факторами развития аутоиммунных заболеваний, включен Helicobacter pylori (H. pylori). Данный микроорганизм находится в центре пристального внимания с момента своего открытия в 1982 г. Он встречается у более чем 60% населения планеты. В настоящее время его считают основным этиологическим фактором гастрита и язвенной болезни, а также фактором, вовлеченным в генез рака и лимфомы желудка MALT-типа [12, 19]. Характерной особенностью хеликобактерной инфекции является то, что у значительного процента зараженных она протекает практически бессимптомно, что, несомненно, сильно затрудняет ее идентификацию [9]. Одним из факторов, влияющих на подобное положение вещей, считают способность H. pylori воздействовать на иммунный ответ хозяина, направляя его в сторону усиления толерогенных процессов [5]. На фоне толерогенного действия показана возможность влиять на развитие аутоиммунных и аллергических заболеваний [8, 17, 21, 31]. Таким образом существует достаточно сложная и неоднозначная картина влияния H. pylori на иммунологические процессы организма, в том числе на состояние иммунитета и цитокинового статуса у больных хроническим гастритом. Цель настоящей работы — проведение сравнительного анализа состояния иммунитета у больных с хроническим гастритом в стадии обострения, ассоциированным и не ассоциированным с инфицированием H. pylori.

Материалы и методы

Исследование проводили согласно биоэтическим и этическим принципам, установленным Хельсинкской декларацией, принятой в июне 1964 г. (г. Хельсинки, Финляндия) и пересмотренной в октябре 2013 г. (г. Форталеза, Бразилия). В соответствии со статьей 24 Конституции РФ и Хельсинкской декларацией (1964 г.) все пациенты дали информированное согласие на использование биологического материала в научном исследовании. Проведение данного исследования одобрено локальным комитетом по этике ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора (протокол № 6 от 25.11.2021). В работе использовали образцы цельной периферической крови (n = 50) и плазмы крови (n = 49) больных с впервые выявленным хроническим гастритом в стадии обострения, проходивших лечение в клинике инфекционных болезней ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора. Диагноз «хронический гастрит» подтверждали проводимым алгоритмом исследования с детализацией жалоб и времени их появления, проведением эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) с забором биопсии слизистой оболочки из антрального отдела и тела желудка, морфологическим исследованием биоптатов слизистой. При выполнении исследования в серии предварительных наблюдений было проведено сопоставление результатов ПЦР (определение ДНК H. pylori в желудочном соке) с анализом обсемененности образцов биопсии слизистой антрального отдела и тела желудка H. pylori, а также сопоставление результатов ПЦР с выделением H. pylori в культуру и анализом образцов с помощью MALDI-TOF спектрометрии с использованием аппарата Autoflex Speed LRF (Bruker Daltonics, Германия). Во всех случаях было обнаружено полное совпадение результатов ПЦР, анализа биопсии и результатов спектрометрии. В связи с этим в дальнейшей работе мы использовали только определение ДНК H. pylori в желудочном соке методом ПЦР в реальном времени с использованием набора «РеалБест ДНК Helicobacter pylori» производства «Вектор-Бест», Россия.

В первую группу вошли лица с гастритами (n = 26), ассоциированными с H. pylori, а во вторую — с гастритами, не связанными с инфекцией H. pylori (n = 24).

Периферическую кровь забирали в объеме 10 мл в вакуумные пробирки с динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) (Vacuette, Германия) и использовали в дальнейшем исследовании.

Из образцов цельной периферической крови выделяли лейкоцитарную фракцию клеток. В отдельной пробирке смешивали 1 мл крови и 10 мл раствора для лизиса эритроцитов (1x Red Blood Cell (1х RBC) Lysis Buffer, eBioscience, США), аккуратно перемешивали и инкубировали 10 минут при комнатной температуре. Лейкоциты осаждали центрифугированием 5 минут (400g, 2–8°С) и промывали 0,9% NaCl. Лейкоциты ресуспендировали в 400 мкл буфера для цитометрии (Flow Cytometry Staining Buffer Solution, eBioscience, США). Для фенотипирования Тh17 проводили поверхностное окрашивание моноклональными антителами Anti-Human СD4-FITC, Anti-Human CD161-PE (eBioscience, США). Для фенотипирования Т-регуляторных лимфоцитов клетки окрашивали моноклональными антителами Anti-Human СD4-FITC (eBioscience, США), фиксировали и пермеабилизировали соответствующим набором буферных растворов (Fixation/Permeabilization Diluent, Permeabilization Buffer 10X, eBioscience, США) и добавляли моноклональные антитела Anti-Human FoxP3-РE (eBioscience, США). Клетки анализировали на проточном цитофлуориметре CytoFLEX (Beckman Coulter, США). Использовали программное обеспечение CytExpert (Beckman Coulter, США). Т-хелперы 17 типа (Th17) и T-регуляторы (Treg) определяли как клетки фенотипа CD4⁺CD161⁺ и клетки фенотипа CD4⁺FoxP3⁺ соответственно [10, 11].

Содержание цитокинов IL-2 и IL-23 определяли в плазме крови с помощью иммуноферментных наборов Интерлейкин-2-ИФА-БЕСТ (Вектор-Бест, Россия) и Human IL-23 Platinum ELISA (eBioscience, США). При анализе результатов в качестве нормы использовали данные производителей наборов и результаты, представленные в работах других авторов. За норму принимали концентрацию IL-2 не выше 10 пг/мл [2], концентрацию IL-23 не выше 40 пг/мл [30].

Относительный уровень мРНК IL-17А и FoxP3 определяли в периферической крови методом ОТ-ПЦР в реальном времени. Для этого из 200 мкл периферической крови выделяли нуклеиновую кислоту с использованием набора «РИБО-преп» (Интерлабсервис, Россия) и инкубировали с DNase I RNase-free (Fermentas, ЕС) для удаления ДНК, согласно рекомендациям производителей. Полученный препарат РНК использовали в реакции обратной транскрипции с использованием статистических затравок и M-MLV RT (Invitogen, США). С полученной комплементарной ДНК проводили дуплексную полимеразную цепную реакцию в реальном времени. Реакционная смесь содержала 20 mMTris-HClpH 8.4, 50 mMKCl, 1,5 мМ MgCl₂, 0,4 мМдНТФ, по 10 пг прямого, обратного праймеров и флуоресцентно меченных зондов, 5 единиц активности полимеразы TaqF (Амплисенс, Россия) и 2 мкл комплементарной ДНК. Реакцию проводили в амплификаторе DTprime5 (ООО «ДНК-Технология, Россия) при следующих температурных условиях: 94°С – 10 мин, 45 циклов амплификации (94°С — 30 с, 55°С — 30 с, 72°С — 30 с). Первичная структура используемых праймеров и зондов представлена в табл.

 

Таблица. Первичная структура олигонуклеотидов

Table. Primary structure of oligonucleotides

мРНК mRNA	Праймер Primer	Первичная структура (5′→3′) Primary structure (5′→3′)
IL-17	прямой/forward	TCTGTGATCTGGGAGGCAAAGT
	обратный/reverse	GGAGTTGGGGCAGTGTGGAG
	зонд/probe	ROX-TGGGAACGTGGACTACCACATGAACTCT-BHQ-2
FoxP3	прямой/forward	GAGAAGCTGAGTGCCATGCA
	обратный/reverse	GGAGCCCTTGTCGGATGAT
	зонд/probe	FAM-TGCCATTTTCCCAGCCAGGTGG-BHQ-1
YWHAZ	прямой/forward	TGCAATGATGTACTGTCTCT
	обратный/reverse	ACTGATCGACAATCCCTTTC
	зонд/probe	Cy5-ATTACTACCGTTACTTGGCTGAGGTTGCC-BHQ-2

 

Уровень исследуемой мРНК (Х) рассчитывали относительно мРНК референсного гена (N) с использованием значений пороговых циклов амплификации Ct по формуле: 2^–(CtN-CtX).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерной программы GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, США). Исследованные количественные показатели представлены в виде Me (25–75%), где Me — медиана, 25% — нижний квартиль, 75% — верхний квартиль. Для сопоставления двух независимых групп использовали двусторонний U-критерий Манна–Уитни, предварительно проведя проверку на нормальное распределение значений. Корреляционный анализ проводили методом ранговой корреляции Спирмена. Различия между группами полагали статистически значимыми при p ≤ 0,05.

Результаты

В крови больных хроническим гастритом проанализировано содержание клеток фенотипа CD4⁺FoxP3⁺ от всех СD4⁺ Т-лимфоцитов. Обнаружено, что у пациентов, положительных по H. pylori, медиана содержания клеток фенотипа CD4⁺FoxP3⁺ составила 2,37 (1,52–4,45)%. В то же время у пациентов с отсутствием хеликобактерной инфекции этот показатель составил 2,31 (1,92–5,58)% (рис. 1). Количество клеток фенотипа CD4⁺FoxP3⁺ у пациентов с наличием H. pylori статистически значимо не отличалось от такового у пациентов, у которых H. pylori не было выявлено.

 

Рисунок 1. Содержание клеток CD4+FoxP3+ в периферической крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori (% от CD4+ Т-лимфоцитов)

Figure 1. The content of CD4⁺FoxP3⁺ cells in the peripheral blood of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori (% от CD4⁺ Т cells)

 

С помощью ОТ-ПЦР в реальном времени был определен относительный уровень мРНК гена, кодирующего FoxP3. Статистически значимых различий в экспрессии гена FoxP3 у больных, инфицированных и не инфицированных H. pylori, обнаружено не было, что соответствует результатам цитофлуориметрического анализа (рис. 2).

 

Рисунок 2. Уровень мРНК FoxP3 относительно мРНК YWHAZ в периферической крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori

Figure 2. The level of FoxP3 mRNA relative to YWHAZ mRNA in the peripheral blood of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori

 

Цитофлуориметрический анализ популяций CD4⁺ клеток показал, что относительное содержание Т-лимфоцитов фенотипа CD4⁺CD161⁺ у положительных по Н. pylori пациентов с обострением хронического гастрита статистически значимо не отличалось от количества CD4⁺CD161⁺ клеток у больных хроническим гастритом в стадии обострения, но не инфицированных Н. pylori. Медиана содержания Т-лимфоцитов фенотипа CD4⁺CD161⁺ у пациентов с положительным тестом на H. pylori составила 9.94 (8,89–12,36)% от всех CD4⁺ клеток, у пациентов, негативных по H. pylori, — 10,84 (8,74–14,40)% от всех CD4⁺ клеток (рис. 3).

 

Рисунок 3. Содержание клеток CD4+CD161+ в периферической крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori (% от CD4+ Т-лимфоцитов)

Figure 3. The content of CD4⁺CD161⁺ cells in the peripheral blood of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori (% от CD4⁺ Т cells)

 

Наряду с цитофлуориметрическим анализом содержания CD4⁺CD161⁺ клеток в крови больных хроническим гастритом был определен относительный уровень мРНК IL-17A (рис. 4). В крови больных, инфицированных H. pylori, как и в крови больных, отрицательных по этому показателю, содержание мРНК IL-17A статистически значимо не различалось, что соответствует полученным данным по содержанию CD4⁺CD161⁺ клеток.

 

Рисунок 4. Уровень мРНК IL-17A относительно мРНК YWHAZ в периферической крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori

Figure 4. The level of IL-17A mRNA relative to YWHAZ mRNA in the peripheral blood of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori

 

В сыворотке крови больных хроническим гастритом в стадии обострения был определен уровень цитокинов IL-2 и IL-23. Медиана концентрации IL-2 у пациентов, положительных по H. pylori, составила 18,51 (17,67–19,34) пг/мл, у отрицательных — 16,84 (16,21–17,28) пг/мл (рис. 5). В сыворотке крови пациентов, инфицированных H. pylori, выявлено статистически значимое повышение уровня IL-2 в сравнении с группой пациентов, не инфицированных H. pylori (p < 0,0001).

 

Рисунок 5. Содержание IL-2 в сыворотке крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori

Figure 5. The content of IL-2 in the blood serum of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori

Примечание. p ≤ 0,001 достоверные отличия при p ≤ 0,05.

Note. p ≤ 0.001 significant differences at p ≤ 0.05.

 

У отрицательных по H. pylori пациентов медиана концентрации IL-23 составила 294,8 [259, 1–362, 9] пг/мл. В то же время у положительных по H. pylori пациентов она была статистически значимо выше и составила 419,8 [324, 2–625, 4] пг/мл (р = 0,0008) (рис. 6). В обоих случаях уровень IL-23 многократно превышал показатели нормы.

 

Рисунок 6. Содержание IL-23 в сыворотке крови больных хроническим гастритом, инфицированных (+) и не инфицированных (–) H. pylori

Figure 6. The content of IL-23 in the blood serum of patients with chronic gastritis infected (+) and not infected (–) with H. pylori

 

Обсуждение

В настоящее время хорошо известно, что Т-клетки, продуцирующие IL-17 и IFNγ, играют решающую роль в иммунитете против H. pylori, а регуляторные Т-клетки способны подавлять эти Т-клеточные функции и обладают толерогенным действием [16]. У инфицированных H. pylori пациентов в слизистой желудка обнаружено повышенное содержание Т-регуляторов, которое положительно коррелирует с тяжестью хронического гастрита [15]. Ранее нами была проведена оценка способности H. pylori модулировать дифференцирующее действие на Т-лимфоциты при прямом контакте в условиях in vitro, что оценивалось по изменению содержания в культуре T-регуляторов фенотипа CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺. Было показано, что при прямом контакте с H. pylori количество Т-регуляторов увеличивается в 2,5 раза. Одновременно регистрировалось многократное повышение продукции Т-клетками IL-10 [1].

Представлены сообщения о локальных изменениях количества Т-регуляторов в слизистой оболочке желудка и об увеличении их количества в периферической крови больных с инфекцией CagA⁺ H. pylori, которое определялось по уровню CD4⁺CD25^+hi клеток. Однако, в крови больных с CagA^– H. pylori инфекцией уровень CD4⁺CD25^+hi клеток оставался соответствующим норме [29]. В исследовании К. Hussain и соавт. показано, что содержание FoxP3⁺ клеток среди CD4⁺CD25^+hi клеток периферической крови и уровень мРНК FoxP3 не различались у инфицированных и неинфицированных H. pylori доноров [14], что соответствует полученным нами данным об отсутствии различий между инфицированными и не инфицированными H. pylori больными хроническим гастритом, содержании в периферической крови CD4⁺FoxP3⁺ Т-клеток и мРНК FoxP3.

Наряду с оценкой влияния H. pylori на популяцию T-регуляторов в условиях in vitro ранее нами была проведена также оценка влияния H. pylori на популяции CD4⁺CD161⁺ Т-клеток, которые являются IL-17-продуцирующими клетками и перекрываются с популяцией Th17-клеток, играющей важную роль в развитии иммунного ответа на H. pylori. Было показано, что при прямом контакте с H. pylori содержание CD4⁺CD161⁺ Т-лимфоцитов не изменяется на фоне многократного повышения концентрации INFγ [3]. В то же время имеются сообщения о повышении уровня Th17-клеток, продуцирующих IL-17 в слизистой желудка инфицированных H. pylori лиц [10].

По данным литературы, количество Th17-клеток в крови здоровых доноров составляет 6–7% от всех CD4⁺ клеток [20, 27]. Содержание Т-клеток фенотипа CD4⁺CD161⁺ у тестированных больных обеих групп превышало представленные в литературе контрольные показатели CD4⁺CD161⁺ клеток в крови здоровых доноров.

Молекула CD161, известная как молекула, относящаяся к лектиноподобным рецепторам натуральных киллеров, участвует в клеточной передаче сигналов и активации клеток. Имеются противоречивые данные о специфичности этой молекулы по отношению к Th17-клеткам, поскольку она экспрессируется в различной степени на многих других популяциях Т-клеток, включая наивные Т-клетки, CD4⁺ Т-клетки памяти, Th2 и Т-регуляторные клетки [4, 22, 25].

Определение мРНК IL-17А, продукция которого характерна для Th17-клеток, также не обнаружило различий между инфицированными H. pylori и не инфицированными H. pylori больными. Известно несколько изоформ IL-17, самыми распространенными из которых являются IL-17A и IL-17C. В слизистой желудка больных с хеликобактерной инфекцией недавно был обнаружен повышенный уровень мРНК IL-17С, уровень IL-17А не менялся в ответ на инфицирование H. pylori [28]. Однако существуют и противоположные данные, свидетельствующие о повышении и понижении экспрессии мРНК IL-17 в слизистой разных отделов желудка при хеликобактерной инфекции [24]. Данных о содержании IL-17A в крови при хеликобактерной инфекции в доступной литературе нами не обнаружено.

Таким образом, полученные в рамках настоящей работы результаты свидетельствуют об отсутствии на системном уровне изменений в содержании регуляторных CD4⁺FoxP3⁺ клеток, мРНК FoxP3, мРНК IL-17A и близкой к Th17 популяции CD4⁺CD161⁺ T-клеток у инфицированных H. pylori больных хроническим гастритом.

Известно, что равновесие между популяциями Тh17-клеток и Тreg модулируется IL-2, который важен для генерации популяции Т-регуляторов, но ингибирует поляризацию иммунного ответа в сторону Th17-клеток. Делеции в гене, кодирующем IL-2, блокада антителами против IL-2, разрушение сигнальных путей транскрипционного фактора STAT5 приводит к дифференцировке в сторону популяции Th17-клеток [18]. Мы оценили уровень IL-2 в крови больных хроническим гастритом в стадии обострения. Обнаружено повышение сывороточного содержания IL-2 в крови, инфицированных H. pylori лиц, что, вероятно, является свидетельством смещения равновесия популяций Т-клеток в сторону Тreg и объясняет не только отсутствие повышенного содержания у инфицированных H. pylori больных уровня CD4⁺CD161⁺ T-клеток, но также отсутствие различий в содержании мРНК IL-17А.

Еще одним важным регулятором функции Th17-клеток является IL-23, основная роль которого — индукция дифференцировки наивных Т-лимфоцитов в Th1- и Тh17-клетки, принимающие участие в воспалительных и аутоиммунных реакциях [26]. Интерлейкин-23 (IL-23) относится к семейству IL-12. Показано, что IL-23 повышает секрецию IL-17, в то время как IL-12 опосредует специфическое ингибирование продукции IL-17. Считается, что за счет этого IL-23 играет роль провоспалительного цитокина, стимулируя продукцию Т-лимфоцитами IL-17 [22]. IL-23 может выступать в качестве промотора аутоиммунного воспаления, в отличие от IL-12, который парадоксальным образом обеспечивает защиту от аутоиммунного воспаления [23]. Нами получены данные о многократном повышении уровня IL-23 в крови больных хроническим гастритом, что отражает наличие воспалительных процессов, сопровождающих течение острой фазы заболевания. Кроме того, получены данные о статистически значимом подъеме содержания IL-23 в крови инфицированных H. pylori больных в сравнении с больными, у которых H. pylori не был выявлен. Это указывает как на провоспалительное действие IL-23, развивающееся при обострении хронического гастрита, так и на возможную провокацию этим цитокином аутоиммунных реакций. Показано, что слизистыми поверхностями инфицированных H. pylori лиц продуцируется повышенное количество IL-23, которое поддерживает продукцию IL-17, результатом чего является стимуляция воспаления [6, 7]. Известно, что повышенное содержание IL-23 ассоциируется с некоторыми аутоиммунными заболеваниями, такими как ревматоидный артрит и множественный склероз [30]. Полученные нами результаты не исключают возможного участия IL-23 в формировании аутоиммунных сдвигов у лиц с хеликобактерной инфекцией, однако этот вопрос требует дальнейшего изучения.

About the authors

Ekaterina V. Mokhonova

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: ekaterinamohonova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-9742-7646

Researcher, Immune Chemistry Laboratory, I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Rospotrebnadzor

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

V. A. Lapin

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: fridens.95@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-5905-5722

Junior Researcher, Immune Chemistry Laboratory

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

D. A. Melentiev

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: dim-melente@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2441-6874

Junior Researcher, Immune Chemistry Laboratory

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

D. V. Novikov

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: novikov.dv75@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7049-6935

PhD (Biology), Associate Professor, Leading Researcher, Immune Chemistry Laboratory

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

N. V. Neumoina

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: tak1510@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-1394-3484

PhD (Medicine), Head Physician of the Infectious Diseases Clinic

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

K. M. Perfilova

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: kperfilova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-6395-9014

PhD (Medicine), Deputy Head Physician of the Infectious Diseases Clinic

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

M. V. Neumoina

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: tak1510@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-0153-3573

PhD (Medicine), Head of the Department of Patient Consultation and Admission, Infectious Diseases Clinic

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

T. A. Troshina

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: tak1510@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-3724-4258

Head of the Third Infection Diseases Department, Infectious Diseases Clinic

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

I. V. Shutova

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Email: tak1510@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-7073-9113

PhD (Medicine), Head of the Second Infection Diseases Department, Infectious Diseases Clinic

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

V. V. Novikov

I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)

Author for correspondence.
Email: mbre@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2449-7213

PhD, MD (Biology), Professor, Head of the Immune Chemistry Laboratory

Russian Federation, 603950, Nizhniy Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71

References

Supplementary files