TIME-KILL ASSAY: ЭФФЕКТИВНОСТЬ СИНЕРГИДНОГО ДЕЙСТВИЯ КАРБАПЕНЕМОВ И КЛОДРОНОВОЙ КИСЛОТЫ

Резюме. В связи с возросшей частотой выделения изолятов грамотрицательных микроорганизмов, резистентных к карбапенемам, важным остается поиск способов усиления действия этого класса антибиотиков. Одним из возможных способов решения этой проблемы является комбинация карбапенемов с препаратами — ингибиторами металло-бета-лактамаз (МБЛ). К сожалению, в настоящее время разрешенных для применения в клинике ингибиторов МБЛ карбапенемрезистентных микроорганизмов. Патогенные микроорганизмы могут переживать антибиотическую атаку, проявлять свойства толерантности и персистенции, при этом инфекционный процесс продолжается. В связи с этим важно определение зависимости между бактерицидным действием антимикробных средств и временем экспозиции их воздействия на микроорганизм не в одной временной точке через 24 ч инкубации, а в нескольких — через 4, 8, 12 и 24 ч, так называемая кривая зависимости «время — летальное действие» (time-kill assay). Синергидный эффект двух препаратов отмечается при условии снижения уровня микробной популяции на ≥ 3 log10. Для оценки эффективности синергидного действия карбапенемов и клодроновой кислоты использовали микрометод перекрестного титрования («шахматной доски») с последующим высевом содержимого ячеек на плотную питательную среду в разные временные промежутки. Исследования проводили в отношении клинического штамма Pseudomonas aeruginosa 532/14, выделенного от пациентов с инфекционными осложнениями, продуцирующего МБЛ генотипа VIM и характеризующегося высокой степенью резистентности к карбапенемам (МПК имипенама или меропенема 512 мкг/мл); микробная нагрузка 106 КОЕ/мл. На ридере ELx800 проводили измерение оптической плотности при двух длинах волн (490 и 630 нм) при экспозициях от 4 до 24 ч и выявляли время появления логарифмичес кой фазы роста тест-культуры. Следует отметить, что при бихроматическом измерении значение оптической плотности является разницей двух измерений, при этом значительно снижается погрешность результатов, вызванная царапинами или отпечатками пальцев на планшете. В исследовании показана способность клод роновой кислоты проявлять синергидный бактерицидный эффект с карбапенемами в отношении клиничес кого резистентного штамма P. aeruginosa 532/14, продуцирующего металло-бета-лактамазу генотипа VIM. При этом в таком сочетании антимикробное действия у имипенема начинается с 8 часов инкубации до уровня 1,4 log10 по сравнению с контролем, а с 12 ч отмечено полное подавление роста тест-культуры. При этом снижение роста тест-штамма составило 6 log10. Меропенем в комбинации с клодроновой кислотой проявлял более выраженную активность: полное отсутствие роста P. aeruginosa 532/14 к 8 часам инкубации, подавление роста на 3,2 log10. Этот показатель через 12–24 ч составил 6 log10. Получение кривой зависимости «время — летальное действие» позволяет выявлять эффективные комбинации карбапенемов и ингибиторов металло-бета-лактамаз грамотрицательных бактерий, что имеет большое значение для повышения эффективности лечения тяжелых гнойно-септических осложнений у пациентов.