Влияние условий хранения на стабильность хантавирусных вакцинных препаратов на основе вируса Пуумала

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Стабильность цельновирионных инактивированных вакцин в значительной степени зависит от формуляции готового препарата. В данном исследовании изучалось влияние на сохранность иммуногенных свойств экспериментального вакцинного препарата против геморрагической лихорадки с почечным синдромом условий хранения вакцинного полуфабриката и использование в составе вакцины человеческого сывороточного альбумина, широко использующегося в качестве криопротектора. Для получения экспериментальной вакцины вирус Пуумала, размноженный в культуре клеток Vero, был сконцентрирован, инактивирован бета-пропиолактоном в разведении 1:6000 и очищен хроматографически на мультимодальном сорбенте Capto™Core 700 (GE Healthcare, США). Содержание целевого компонента в вакцинном препарате составило 2±0,2 × 106 копий РНК/мл. Гуморальный иммунный ответ на введение вакцинного препарата определяли по индукции нейтрализующих антител в сыворотках крови иммунизированных сирийских хомяков (Mesocricetus auratus). Установлено, что инактивированный бета-пропиолактоном вирус Пуумала индуцирует выраженный гуморальный иммунный ответ, что свидетельствует о сохранности соответствующих иммуногенных эпитопов. Показано, что вирусная РНК более стабильна при хранении инактивированного вируса по сравнению с неинактивированным. В исследовании подтвержден факт полной инактивации вируса через 24 ч хранения при температуре 37°С. Отмечено значительное снижение иммуногенной активности вируса при термоинактивации, что подтверждает необходимость тщательного подбора условий хранения для термолабильных хантавирусов. Установлена прямая корреляция между титром вируса и количеством копий вирусной РНК/мл. Добавление человеческого сывороточного альбумина стабилизирует инфекционность вируса при хранении: титр вируса Пуумала оставался на неизменном уровне в течение 3 месяцев хранения при 6±2°С, тогда как в материале без добавления альбумина титр снижался до неопределяемых значений. Добавление 0,1% человеческого сывороточного альбумина к инактивированному вирусному препарату способствует стабилизации его иммуногенных свойств при длительном хранении. Показано, что препараты с добавлением человеческого сывороточного альбумина (0,1–1%) дозозависимо более стабильны при многократном замораживании по показателям содержания вирусной РНК и иммуногенности. Можно предполагать, что человеческий сывороточный альбумин способствует лучшей сохранности генетического материала вируса при хранении, а белковые эпитопы, ответственные за протективный иммунный ответ в форме индукции нейтрализующих антител, претерпевают в присутствии альбумина менее выраженные конформационные изменения. Эти данные указывают на целесообразность включения человеческого сывороточного альбумина в состав вакцинного препарата.

Полный текст

Введение

При производстве цельновирионных вакцин для профилактики хантавирусных инфекций решающее значение имеет разработка и внедрение безопасных и технологичных способов инактивации и хранения хантавирусного вакцинного препарата. Для цельновирионных вакцин помимо выбора оптимального способа инактивирования большое значение имеет конечная формуляция вакцинного препарата, определяющая его стабильность на протяжении срока годности. Человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), который широко используется в качестве криопротектора, также применяется и в качестве стабилизирующей добавки в вакцины. В исследованиях с инкапсулированным антигеном гепатита В были установлены защитные эффекты 0,5–1% ЧСА на стабильность HBsAg в периоде инкапсуляции, высвобождения и восстановления антигенности во время лиофилизации и эмульгирования. Кроме того, при иммунизации крыс Sprague-Dawley препаратом HBsAg-ЧСА наблюдалось повышение уровня анти-HBsAg IgG и Тх1 цитокинов в сравнении с препаратом без ЧСА [11]. В исследованиях Choo J. показано повышение иммуногенной активности аттенуированной вакцины против вируса Денге (bDENV2 HD-MAPs) при добавлении 1% ЧСА в сравнении с аналогичным препаратом без ЧСА, а также стабилизация антигенных структур вириона в процессе хранения в течение 6 месяцев при 4°С в высушенном виде [5]. ЧСА входит в состав вакцины от клещевого энцефалита FSME-Immun®, причем было показано, что его исключение из формуляции вакцины приводило к увеличению уровней провоспалительных цитокинов TNFα и IL-1β, что влияло на частоту побочных эффектов в виде лихорадки у вакцинированных [8]. В связи с отсутствием для возбудителя ГЛПС лабораторной модели инфекции, представляет интерес поиск чувствительной лабораторной модели для изучения иммуногенной активности вакцинного препарата. Ранее с этой целью мы использовали мышей BALB/с и морских свинок [3]. В данном эксперименте в качестве животной модели для иммунизации были использованы сирийские хомяки. Ответ иммунной системы хомяков на инфекции во многом близок к человеческому [9], более того, они являются основной лабораторной моделью для исследований хантавирусов, вызывающих хантавирусный пульмональный синдром [10]. Целью исследования было определение стабильности и иммуногенности препаратов вируса Пуумала при различных условиях хранения.

Материалы и методы

Вакцинный штамм PUU-ТKD-VERO вируса Пуумала, размноженный в культуре клеток Vero, был сконцентрирован методом ультрафильтрации в тангенциальном потоке, как было описано ранее [4]. Хроматографически очищенный на мультимодальном сорбенте Capto™Core 700 (GE Healthcare, США) препарат вируса Пуумала с титром 6,0±0,5 lg ФОЕ/мл (7±0,33 × 106 копий РНК/мл) разводили физиологическим раствором до 4,5±0,5 lg ФОЕ/мл (2±0,2 × 106 копий РНК/мл). Контрольный образец полученного препарата в аликвотах по 1 мл хранили при температуре –70±2°С. Половину полученного препарата инактивировали бета-пропиолактоном в разведении 1:6000 (И-ПУУ). Варианты условий хранения препаратов вируса Пуумала — 3 месяца при температуре 6±2°С; 6 суток при 37±2°С; многократное замораживание материала — 5 и 40 раз при температуре –70±2°С, в том числе с добавлением ЧСА в качестве стабилизатора, представлены в табл.

 

Таблица. Условия хранения

Table. Storage conditions

Условия хранения

Storage conditions

Вирус Пуумала (ПУУ)

Puumala virus (PUU)

Инактивированный вирус Пуумала (И-ПУУ)

Inactivated Puumala virus (I-PUU)

3 месяца при 6±2°С

3 months at 6±2°С

ПУУ

PUU

И-ПУУ

I-PUU

6 суток при 37±2°С

6 days at 37±2°С

ПУУ-37

PUU-37

И-ПУУ-37

I-PUU-37

Замораживание 5 раз при –70±2°С

Freezing 5 times at –70±2°С

ПУУ-5з

PUU-5f

И-ПУУ-5з

I-PUU-5f

Замораживание 40 раз при –70±2°С

Freezing 40 times at –70±2°С

ПУУ-40з

PUU-40f

И-ПУУ-40з

I-PUU-40f

3 месяца при 6±2°С + 0,1% ЧСА

3 months at 6±2°С + 0,1% HSA

ПУУ × 0,1

PUU × 0,1

И-ПУУ × 0,1

I-PUU × 0,1

6 суток при 37±2°С + 0,1% ЧСА

6 days at 37±2°С + 0,1% HSA

ПУУ-37 × 0,1

PUU-37 × 0,1

И-ПУУ-37 × 0,1

I-PUU-37 × 0,1

Замораживание 5 раз при –70±2°С + 0,1% ЧСА

Freezing 5 times at –70±2°С + 0,1% HSA

ПУУ-5з × 0,1

PUU-5f × 0,1

И-ПУУ-5з × 0,1

I-PUU-5f × 0,1

Замораживание 40 раз при –70±2°С + 0,1% ЧСА

Freezing 40 times at –70±2°С + 0,1% HSA

ПУУ-40з × 0,1

PUU-40f × 0,1

И-ПУУ-40з × 0,1

I-PUU-40f × 0,1

3 месяца при 6±2°С + 1% ЧСА

3 months at 6±2°С + 1% HSA

ПУУ × 1

PUU × 1

И-ПУУ× 1

I-PUU × 1

6 суток при 37±2°С + 1% ЧСА

6 days at 37±2°С + 1% HSA

ПУУ-37 × 1

PUU-37 × 1

И-ПУУ-37 × 1

I-PUU-37 × 1

Замораживание 5 раз при –70±2°С + 1% ЧСА

Freezing 5 times at –70±2°С + 1% HSA

ПУУ-5з × 1

PUU-5f × 1

И-ПУУ-5з × 1

I-PUU-5f × 1

Замораживание 40 раз при –70±2°С + 1% ЧСА

Freezing 40 times at –70±2°С + 1% HSA

ПУУ-40з × 1

PUU-40f × 1

И-ПУУ-40з × 1

I-PUU-40f × 1

 

Контроль на остаточную инфекционность И-ПУУ оценивали в трех последовательных пассажах методами флюоресцирующих антител (МФА) [1], титрованием фокусобразующих единиц (ФОЕ) [6] и определением вирусной РНК в полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) [7]. Иммуногенную активность И-ПУУ оценивали на самках сирийских хомяков в возрасте 2 недель и весом 48±0,3 г. Согласно утвержденному на Этическом комитете заключению, данное исследование соответствует положениям Хельсинской декларации и не нарушает биоэтических правил обращения с животными, участвующими в экспериментах (выписка № 100622-5 от 10.06.2022 г.). Самки хомяков были рандомизированно распределены по 6 особей в каждой группе. Образцы И-ПУУ вводили по 200 мкл в мышечную ткань бедра по схеме: 2 иммунизации с двухнедельным интервалом. Через 14 дней после второй иммунизации все животные были подвергнуты эвтаназии путем декапитации после введения в наркоз сначала стандартной дозой комбинации препаратов Золетил-Ксила [Золетил (10 мг/кг) + Ксила (1 мг/кг)], а затем тройной дозой этих препаратов. Сыворотки крови животных трехкратно исследовали в реакции нейтрализации в клеточной культуре Vero. Результат представлен в виде среднегеометрического значения титра (СГТ) нейтрализующих антител (нАТ) в двоичных логарифмах по 50% редукции числа фокусобразующих единиц (РН/ФОЕ/50). Для количественной оценки РНК в образцах хантавирусного препарата использовали ПЦР в режиме реального времени со штаммоспецифичными праймерами Ufa_F, Ufa_R, и зондом Ufa_Z. Количественное содержание живого вируса ПУУ оценивали по титру вируса методом определения числа фокусобразующих единиц в культуре клеток Vero. Результаты обработаны и проанализированы в программе GraphPad Prism 8.4.3. Представленные усредненные данные являются результатом трех независимых экспериментов, статистически обработанных с использованием одностороннего ANOVA с тестом множественных сравнений Тьюки: ns — не значима, *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,005, ****p < 0,0001.

Результаты

Титр вируса ПУУ без добавления человеческого сывороточного альбумина снижался через 3 месяца хранения при температуре 6±2°С до неопределяемого уровня по сравнению с контрольным образцом (рис. 1). Хранение ПУУ при 37°С приводило к полной инактивации через 24 ч вне зависимости от добавления 0,1% и 1% человеческого сывороточного альбумина в образцы (данные не показаны). Это подтверждает необходимость тщательного подбора условий хранения, предотвращающих термоинактивацию термолабильных хантавирусов. Добавление 0,1% и 1% человеческого сывороточного альбумина в образцы, хранившиеся при температуре 6±2°С в течение 3 месяцев, стабилизировало титр вируса на уровне 3,7±0,5 lg ФОЕ/мл. В препарате ПУУ, не содержавшем ЧСА, титр вируса после 5- и 40-кратной заморозки снижался до неопределяемых значений. При добавлении 0,1% и 1% человеческого сывороточного альбумина к образцам, после 5-кратного замораживания титр вируса снижался до 2,6±0,3 и 3,2±0,2 lg ФОЕ/мл соответственно по сравнению с контролем (p < 0,0001). После 40-кратной заморозки титр вируса снижался до неопределяемых значений (p < 0,0001).

 

Рисунок 1. Зависимость стабильности неинактивированного вируса Пуумала (ПУУ) от условий хранения

 

Количество копий вирусной РНК/мл при сравнении с контрольным образцом статистически значимо снизилось (p < 0,0001) в образце без ЧСА и с 0,1% ЧСА; для образца с 1% ЧСА снижение не наблюдалось (рис. 1). Замораживание образцов приводило к значимому снижению числа копий РНК/мл до 5,41±0,3 × 103 (p < 0,0001) при сравнении с образцами, хранившимися при 6±2°С в течение 3 месяцев, вне зависимости от добавления человеческого сывороточного альбумина. Стоит отметить, что наибольшее количество детектируемой РНК как после 5-кратной, так и после 40-кратной заморозки, выявляли при добавлении 1% ЧСА. Хранение образца при 37°С также достоверно снижало количество определяемой РНК/мл. Для препарата ПУУ была установлена прямая зависимость степени сохранности вирусной РНК от количества добавленного человеческого сывороточного альбумина. Установлена прямая корреляция между титром вируса и количеством копий РНК/мл. Эта зависимость сохранялась и при снижении титра вируса в результате хранения. Добавление даже 0,1% человеческого сывороточного альбумина приводило к менее значительному снижению титра вируса и количества копий РНК, но корреляция сохранялась. Увеличение концентрации ЧСА приводило к статистически значимой сохранности титра вируса и количества копий РНК/мл.

Инактивированный вирус обладал большей стабильностью при хранении, в сравнении с ПУУ (рис. 2). Было показано, что вирусная РНК, несмотря на значительное повреждение при инактивации [2], стабильно определялась в течение 24–32 месяцев хранения при температуре 6±2°С, в отличие от ПУУ, что свидетельствует о наличии некоторой РНК-стабилизирующей активности самого бета-пропиолактона. Добавление человеческого сывороточного альбумина дополнительно стабилизировало И-ПУУ при хранении. При этом эффект коррелировал с концентрацией ЧСА. В образцах, подвергнутых 5- и 40-кратному замораживанию, и хранившихся 6 суток при 37°С, было отмечено достоверное снижение количества копий РНК (p < 0,0001), обратно пропорциональное концентрации человеческого сывороточного альбумина.

 

Рисунок 2. Анализ стабильности инактивированного бета-пропиолактоном вируса Пуумала (И-ПУУ)

 

Данные, полученные в этом эксперименте, имеют нормальное распределение (данные не показаны).

Для оценки влияния человеческого сывороточного альбумина на иммуногенную активностьИ-ПУУ была выбрана концентрация 0,1%. На модели сирийских хомяков (рис. 3) были показаны значительные различия в иммуногенной активности пяти вариантов хранения И-ПУУ: 3 месяца при 6±2°С без добавок (И-ПУУ); 3 месяца при 6±2°С с добавлением 0,1% ЧСА (И-ПУУ-0,1) или после 5-кратной заморозки (И-ПУУ-5з × 0,1), или после 40-кратной заморозки (И-ПУУ-40з × 0,1); 6 суток при 37°С (И-ПУУ-37). Более высокий титр нАТ отмечен при добавлении 0,1% человеческого сывороточного альбумина (p = 0,0152). При этом статистически значимых различий в титре нАТ между группами И-ПУУ и И-ПУУ-5з × 0,1 выявлено не было. И-ПУУ, хранившийся 6 дней при 37°С, обладал меньшей иммуногенной активностью (СГТ = 3±0,5 log2) в сравнении с И-ПУУ (p < 0,0001), что свидетельствует о значительном термическом разрушении иммуногенных эпитопов, сопровождающемся и значительным повреждением вирусной РНК. Также достоверно более низкий уровень нАТ определялся в группе после иммунизации И-ПУУ-40з × 0,1 в сравнении с И-ПУУ (p < 0,0001). Таким образом, наблюдалась прямая зависимость между повреждением вирусной РНК в результате термического воздействия при хранении и уровнем иммуногенной активности для И-ПУУ-37 и И-ПУУ-40з × 0,1.

 

Рисунок 3. Зависимость иммуногенной активности инактивированногобета-пропиолактоном хантавирусного вакцинного препарата от условий хранения

Примечание. Титры нейтрализующих антител определяли в сыворотках крови сирийских хомяков(n = 6) после двукратной иммунизации в неразведенном виде: хранение 3 месяца при 6±2°С без добавок (И-ПУУ); хранение 3 месяца при 6±2°С с добавлением 0,1% ЧСА (И-ПУУ × 0,1) или после 5кратной заморозки (И-ПУУ-5з × 0,1), или после 40-кратной заморозки (И-ПУУ40з × 0,1); хранение 6 суток при 37°С (И-ПУУ-37). Титры нАТ измеряли методом РН/ФОЕ/50.

 

Исследования подтвердили факт потери вирулентной и иммуногенной активности вируса Пуумала при термоинактивации, а также установили влияние условий хранения на детектируемые уровни вирусной РНК. Установлена прямая корреляция между титром вируса и количеством копий РНК/мл. Эта зависимость сохранялась и при снижении титра вируса в результате хранения. Добавление даже 0,1% ЧСА приводило к менее значительному снижению титра вируса и количества копий РНК. Добавление ЧСА к инактивированному вирусу приводило к стабилизации иммунного ответа, а также способствовало стабилизации вирусной РНК на разных этапах хранения И-ПУУ, включая многократное замораживание. Можно предполагать, что белковые эпитопы, ответственные за протективный иммунный ответ, претерпевают менее выраженные конформационные изменения в присутствии ЧСА.

×

Об авторах

Анна Николаевна Ветрова

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита); ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова (Сеченовский Университет)

Автор, ответственный за переписку.
Email: ann.vetr.99@mail.ru

лаборант-исследователь лаборатории геморрагических лихорадок; студент магистратуры направления «Биотехнология»

Россия, Москва; Москва

Светлана Сергеевна Курашова

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории геморрагических лихорадок

Россия, Москва

Ростислав Дмитриевич Теодорович

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

научный сотрудник лаборатории геморрагических лихорадок

Россия, Москва

Юлия Валерьевна Попова

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

научный сотрудник лаборатории геморрагических лихорадок

Россия, Москва

Екатерина А. Блинова

ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора

Email: ann.vetr.99@mail.ru

младший научный сотрудник научной группы генной инженерии и биотенологии

Россия, Москва

Павел Алексеевич Набатников

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

ведущий технолог

Россия, Москва

Евгений Александрович Ткаченко

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

д.м.н., профессор, руководитель научного направления

Россия, Москва

Тамара Казбековна Дзагурова

ФГАНУ Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН (Институт полиомиелита)

Email: ann.vetr.99@mail.ru

д.м.н., зав. лабораторией геморрагических лихорадок

Россия, Москва

Список литературы

  1. Дзагурова Т.К., Ткаченко Е.А., Петров В.А. Эффективность применения культуральных антигенов для серодиагностики ГЛПС с помощью метода иммунофлюоресценции // Вопросы вирусологии. 1988. № 1. С. 71–75. [Dzagurova T.K., Tkachenko E.A., Petrov V.A. The effectiveness of culture antigens for HFRS serodiagnostics by means of the immunofluorescence method. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 1988, no. 1, pp. 71–75. (In Russ.)]
  2. Егорова М.С., Курашова С.С., Дзагурова Т.К., Баловнева М.В., Ишмухаметов А.А., Ткаченко Е.А. Влияние инактивирующих вирус агентов на иммуногенность вакцин против геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Биотехнология. 2020. Т. 36, № 2. С. 64–73. [Egorova M.S., Kurashova S.S., Dzagurova T.K., Balovneva M.V., Ishmukhametov A.A., Tkachenko E.A. The effect of virus inactivating agents on the immunogenicity of vaccines against hemorrhagic fever with renal syndrome. Biotekhnologiya = Biotechnology, 2020, vol. 36, no. 2, pp. 64–73. (In Russ.)] doi: 10.21519/0234-2758-2020-36-2-64-73
  3. Курашова С.С., Баловнева М.В., Ишмухаметов А.А., Теодорович Р.Д., Попова Ю.В., Ткаченко Е.А., Дзагурова Т.К. Гуморальный иммунный ответ после иммунизации морских свинок вакцинным препаратом на основе вируса Пуумала // Инфекция и иммунитет. 2022. Т. 12, № 5. C. 971–975. [Kurashova S.S., Balovneva M.V., Ishmukhametov A.A., Teodorovich R.D., Popova Yu.V., Tkachenko E.A., Dzagurova T.K. Immune response evaluation in the guinea pigs after immunization with the experimental Puumala virus vaccine. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2022, vol. 12, no. 5, pp. 971–975. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-IRE-1956
  4. Ткаченко Е.А., Ишмухаметов А.А., Дзагурова Т.К., Синюгина А.А., Коротина Н.А., Набатников П.А., Соцкова С.Е., Баловнева М.В., Малкин А.Е. Разработка экспериментально-промышленной технологии производства вакцины для профилактики геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Ремедиум. 2015. Т. 6. С. 47–53. [Tkachenko E.A., Ishmukhametov A.A., Dzagurova T.K., Sinyugina A.A., Korotina N.A., Nabatnikov P.A., Sotskova S.E., Balovneva M.V., Malkin A.E. Development of experimental and industrial technology for the production of a vaccine for the prevention of hemorrhagic fever with renal syndrome. Remedium = Remedium, 2015, vol. 6, pp. 47–53. (In Russ.)]
  5. Choo J.J.Y., McMillan C.L.D., Fernando G.J.P., Hall R.A., Young P.R., Hobson-Peters J., Muller D.A. Developing a stabilizing formulation of a live chimeric dengue virus vaccine dry coated on a high-density microarray patch. Vaccines (Basel), 2021, vol. 9, no. 11: 1301. doi: 10.3390/vaccines9111301
  6. Dzagurova T.K., Klempa B., Tkachenko E.A., Slyusareva G.P., Morozov V.G., Auste B., Kruger D.H. Molecular diagnostics of hemorrhagic fever with renal syndrome during a Dobrava virus infection outbreak in the European part of Russia. J. Clin. Microbiol., 2009, vol. 47, no. 12, pp. 4029–4036. doi: 10.1128/JCM.01225-09
  7. Egorova M.S., Kurashova S.S., Ishmukhametov A.A., Balovneva M.V., Deviatkin A.A., Safonova M.V., Ozherelkov S.V., Khapchaev Y.K., Balkina A.S., Belyakova A.V., Dzagurova T.K., Tkachenko E.A. [Real-time PCR assay development for the control of vaccine against hemorrhagic fever with renal syndrome]. Vopr. Virusol., 2021, vol. 66, no. 1, pp. 65–73. (In Russ.). doi: 10.36233/0507-4088-30
  8. Marth E., Kleinhappl B. Albumin is a necessary stabilizer of TBE-vaccine to avoid fever in children after vaccination. Vaccine, 2001, vol. 20, no. 3–4, pp. 532–537. doi: 10.1016/s0264-410x(01)00329-2
  9. Miao J., Chard L.S., Wang Z., Wang Y. Syrian hamster as an animal model for the study on infectious diseases. Front. Immunol., 2019, vol. 10: 2329. doi: 10.3389/fimmu.2019.02329
  10. Safronetz D., Ebihara H., Feldmann H., Hooper J.W. The Syrian hamster model of hantavirus pulmonary syndrome. Antiviral Res., 2012, vol. 95, no. 3, pp. 282–292. doi: 10.1016/j.antiviral.2012.06.002
  11. Xu W., He J., Wu G., Xiong F., Du H., Wang G. Stabilization and immune response of HBsAg encapsulated within poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres using HSA as a stabilizer. Int. J. Pharm., 2015, vol. 496, no. 2, pp. 332–341. doi: 10.1016/j.ijpharm.2015.10.004

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рисунок 1. Зависимость стабильности неинактивированного вируса Пуумала (ПУУ) от условий хранения

Скачать (314KB)
Метаданные
3. Рисунок 2. Анализ стабильности инактивированного бета-пропиолактоном вируса Пуумала (И-ПУУ)

Скачать (163KB)
Метаданные
4. Рисунок 3. Зависимость иммуногенной активности инактивированногобета-пропиолактоном хантавирусного вакцинного препарата от условий храненияПримечание. Титры нейтрализующих антител определяли в сыворотках крови сирийских хомяков(n = 6) после двукратной иммунизации в неразведенном виде: хранение 3 месяца при 6±2°С без добавок (И-ПУУ); хранение 3 месяца при 6±2°С с добавлением 0,1% ЧСА (И-ПУУ × 0,1) или после 5кратной заморозки (И-ПУУ-5з × 0,1), или после 40-кратной заморозки (И-ПУУ40з × 0,1); хранение 6 суток при 37°С (И-ПУУ-37). Титры нАТ измеряли методом РН/ФОЕ/50.

Скачать (76KB)
Метаданные

© Ветрова А.Н., Курашова С.С., Теодорович Р.Д., Попова Ю.В., Блинова Е.А., Набатников П.А., Ткаченко Е.А., Дзагурова Т.К., 2023

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 64788 от 02.02.2016.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах