ИССЛЕДОВАНИЕ ПРИРОДЫ ЦИТОКИНОПОДОБНЫХ ВЕЩЕСТВ, ВЫЯВЛЯЕМЫХ ИММУНОХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ В СУПЕРНАТАНТАХ КУЛЬТУР STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Резюме

Цитокины регулируют взаимодействие между клетками разного происхождения у высших животных и человека, однако, близкие им по структуре молекулы – цитокиноподобные вещества (ЦПВ), обнаружены и у более примитивных организмов. С использованием методов иммунохимического анализа ЦПВ, напоминающие ряд цитокинов человека, обнаружены в супернатантах, полученных после культивировании бактерий разной видовой принадлежности, в том числе в супернатантах бульонных культур бактерий вида Staphylococcus aureus. Целями настоящей работы являлись изучение специфичности иммунохимического определения, и молекулярная характеристика ЦПВ из супернатантов культур различных штаммов стафилококков. Поскольку наиболее продуктивным источником ЦПВ являлся штамм Staphylococcus aureus АТСС 25923, а в супернатантах культур стафилококков максимальные концентрации регистрировались с помощью антител к рецепторному антагонисту интерлейкина-1 человека (IL-1rа), была изучена специфичность иммуноферментных методов, используемых для определения именно этого цитокина. Результаты экспериментов показали, что супернатанты Staphylococcus aureus АТСС 25923 содержат вещества, отличные от IL-1ra, поскольку с ними связывались не только специфические к IL-1ra антитела, но и антитела другой направленности (например, к супероксиддисмутазе человека), характеризуя тем самым неспецифичность регистрируемого взаимодействия. При этом супернатант штамма S. aureus АТСС 25923 не оказывал конкурирующего эффекта на взаимодействие с иммобилизованным IL-1rа, что свидетельствовало об отсутствии специфического антигена в тестируемой пробе. Для идентификации ЦПВ их выделяли из супернатанта культуры Staphylococcus aureus АТСС 25923 посредством иммуноаффинной хроматографии на колонке с Сефарозой, нагруженной антителами против IL-1ra. При анализе методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия элюат адсорбированных на антителах к IL-1ra ЦПВ был гетерогенен и характеризовался 4 мажорными зонами в области молекулярных масс 50-60 кДа и 35 кДа, причем в спектре отсутствовал компонент с ММ 20 кДа, характерный для белка IL-1ra. Во фракциях разделенных компонентов элюата, вырезанных из геля и подвергнутых обработке трипсином для последующего исследования при помощи масс-спектрометрии, обнаружены триптические пептиды, гомологичные производным стафилококкового белка А (SpA). Результаты этого анализа позволили идентифицировать белок А как основной компонент исследованных образцов элюата. Таким образом, с большой долей вероятности можно полагать, что иммуноглобулины из иммуноферментных тест-систем для определения цитокинов могут реагировать с секреторными производными иммуноглобулин-связывающих белков стафилококков, которые регистрируются как ЦПВ. Следовательно, так называемые ЦПВ, выявляемые методом ИФА в супернатантах культивируемых стафилококков, отличаются от истинных цитокинов человека, а их взаимодействие с антителами носит «неспецифический» характер.