ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ ФРАГМЕНТОВ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК В КРОВИ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТОВ С ПОСТКОВИДНЫМ СИНДРОМОМ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ

Резюме

Для пациентов с COVID-19 характерен существенно повышенный уровень содержания внеклеточной ДНК в периферической крови, а недавно нити ДНК нейтрофильных внеклеточных ловушек были обнаружены в плазме крови лиц с постковидным синдромом. Цель исследования – разработать методический подход (технологию) детекции внеклеточной ДНК и оценить ее уровень в крови лиц с постковидным синдромом. Материалы и методы. В исследование включены: пациенты с постковидным  синдромом, ранее перенесшие тяжёлую форму болезни (опытная группа, n=8, от 53 до 64 лет); больные с тяжёлой формой течения COVID-19 (I группа сравнения, n=5, от 48 до 67 лет); условно здоровые добровольцы разных возрастных групп: 18-30 лет (II группа сравнения,  n =12) и старше 60 лет  (III группа сравнения, n=10, более 60 лет), в крови которых отсутствовали специфические IgG антитела к вирусу SARS-CoV-2. Исследование проводили в микрообъемах цельной крови. Результаты. Для определения содержания в крови фрагментов внутриклеточной ДНК был разработан способ проточно-цитофлуориметрического анализа, основанный на добавлении в кровь раствора красителя йодистого пропидия вместе с маркером CD45-FITC, используемым при иммунофенотипировании лейкоцитов по Lyse/No-Wash протоколу для дифференцирования неповрежденных клеток от клеточного дебриса. У здоровых людей краситель после добавления в кровь лизирующего эритроциты и фиксирующего лейкоциты реагента проникает внутрь клеток и окрашивает только внутриклеточную ДНК неповрежденных диплоидных лейкоцитов. Доля слабых сигналов ДНК-флуоресценции от фрагментов внеклеточной ДНК в общем числе регистрируемых цитометром импульсов в этом случае не более 3,2 (2,0-5,6) %. С возрастом или на фоне болезни этот показатель повышается в среднем до 13,4 (10,1-18,6) %. У лиц с тяжёлой формой течения COVID-19 регистрировали очень высокие значения исследуемого показателя - на уровне 82 (68,0-88,6) %. У реконвалесцентов после перенесенного COVID-19 в течение месяца сохранялись высокие показатели уровня внеклеточной ДНК, постепенно снижаясь к 3-му месяцу до 40,5 (27,4-52,0) %.  Заключение.  Согласно полученным данным определение внеклеточной ДНК по разработанной технологии позволяет характеризовать тяжесть течения COVID-19 и оценить к омпенсаторные возможности организма в постковидном периоде.