Характеристика чувствительности к антибиотикам клинических изолятов Acinetobacter baumanniI bv. tryptophandestruens и Acinetobacter baumannii

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель исследования — определить особенности чувствительности бактерий биовара Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens к антимикробным препаратам, используемым для лечения ацинетобактерной инфекции. Объектом исследования были 86 первичных клинических изолятов A. baumannii, из них 34 штамма A. baumannii bv. tryptophandestruens, выделенных в микробиологической лаборатории Военно-медицинской академии в 2021–2022 гг. Видовую идентификацию бактерий осуществляли методом MALDI-ToF масс-спектрометрии. Биовар tryptophandestruens A. baumannii определяли на плотной хромогенной среде с 0,1% антраниловой кислоты или 0,1% бензоата натрия по появлению через 18–24 ч инкубации посева при 37°С зон темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газонов бактерий. Чувствительность изолятов A. baumannii к антимикробным препаратам (АМП) определяли на микробиологическим анализаторе «Vitek 2 compact» (bioMerieux, Франция). Клинические категории чувствительности изолятов к АМП (Ч) выявляли на основании пограничных значений минимальных подавляющих концентраций (МПК, мг/л) установленных Европейским комитетом по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST), версия 11.0. Ввиду отсутствия критерия EUCAST для тигециклина, изучали чувствительность штаммов к тигециклину, оценивая распределение штаммов по МПК, МПК50%, МПК90%. Результаты сравнительной характеристики группы изолятов A. baumannii bv. tryptophandestruens и группы изолятов прочих A. baumannii по клинической категории чувствительных к АМП (Ч) показали, что очень редко в обеих группах присутствуют штаммы, чувствительные к меропенему (8,8±4,6 и 3,8±2,6% соответственно, р > 0,05), ципрофлоксацину (5,8±4,0%; 9,6±4,1%, р > 0,05). Редко представлены в обеих группах штаммы, чувствительные к гентамицину (26,7±7,55%; 19,3±5,5%, р > 0,05); триметоприм/сульфаметоксазолу (38,8±8,3%; 23,6±5,3%, р > 0,05). Сохранили чувствительность к полимиксину В все штаммы обеих групп (100%). Штаммы группы биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens превосходят штаммы группы прочих A. baumannii по частоте изолятов с МПК50% тигециклина (МПК50% — 0,5 мг/л; МПК50% — 2 мг/л соответственно), а также имеют достоверно больше штаммов с МПК 0,5 мг/л (52,9 и 15,4% соответственно, р < 0,01). Таким образом, клинические изоляты биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens не имеют достоверных различий с изолятами прочих штаммов A. baumannii по частоте встречаемости штаммов, чувствительных (Ч) к меропенему, ципрофлоксацину, гентамицину, триметоприм/сульфаметоксазолу, полимиксину В, но отличаются по показателям чувствительности к тигециклину — более высокой частотой штаммов с МПК 0,5 мг/л (р < 0,01) и МПК50%.

Полный текст

Введение

В 2019 г. нами были выделены клинические изоляты биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens, которые осуществляли хромогенную трансформацию L-триптофана и антраниловой кислоты необычным «антранилатным» путем [3]. Последующие исследования показали значительную распространенность этого биовара среди клинических изолятов A. baumannii [2]. Учитывая значение А. baumannii как ведущего возбудителя нозокомиальных и раневых инфекций, а также их экстремальную антибиотикорезистентность, представляет интерес получение сведений о чувствительности к антимикробным препаратам их биовара tryptophandestruens.

Цель исследования — определить особенности чувствительности бактерий биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens к антимикробным препаратам, используемым для лечения ацинетобактерной инфекции.

Материалы и методы

Штаммы бактерий. Исследовали 86 первичных клинических штаммов A. baumannii, из них 34 штамма A. baumannii bv. tryptophandestruens, выделенных в микробиологической лаборатории Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова в 2021–2022 гг. Видовую принадлежность всех штаммов подтверждали методом MALDI-ToF масс-спектрометрии в Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова и НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера. Указанные штаммы находятся в рабочей коллекции культур бактерий Е.П. Сиволодского на кафедре микробиологии Военно-медицинской академии.

Питательные среды и реактивы. Для культивирования бактерий применяли Колумбийский агар (НИЦФ, Санкт-Петербург) и Колумбийский агар с 5% крови овец.

Идентификация видов бактерий методом MALDI-ToF масс-спектрометрии. Использовали масс-спектрометр «BactoSCREEN MALDI-ToF» (Литех, Россия) и/или настольный MALDI-ToF масс-спектрометр с базой данных MALDI Biotyper (Bruker Daltonics Inc., Германия) в соответствии с инструкциями по применению.

Идентификация бактерий биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens по хромогенной биотрансформации бензоата натрия или антраниловой кислоты [2, 3]. Состав и приготовление питательной среды: в 1 л дистиллированной воды вносят: пептон ферментативный 5,0 г; NaCl 5,0 г; FCl36H2O 10%-ный водный раствор 0,5 мл; бромтимоловый синий 1,6%-ный водный раствор 3 мл; агар микробиологический 15,0 г; NaOH 4% раствор 2,8 мл (для среды с бензоатом натрия) или 25 мл (для среды с антраниловой кислотой); растворяют при нагревании все компоненты, затем добавляют бензоат натрия 1,0 г (или антраниловую кислоту 1,0 г); корректируют рН 7,2±0,2; стерилизуют при 112°С в течение 20 мин, разливают в чашки Петри. Питательная среда имеет зеленую окраску, прозрачная, пригодна к использованию в течение 30 суток при хранении от 4 до 8°С. Контоль питательной среды при приготовлении: суточные культуры контрольных штаммов (клинические штаммы A. baumannii и A. baumannii bv. tryptophandestruens) засевают в виде бляшки диаметром 5 мм на питательную среду в чашке, инкубируют при 37°С в течение 18–24 ч, учитывают результат: питательная среда пригодна к использованию, если вокруг газона бактерий A. baumannii bv. tryptophandestruens имеется зона темно-коричневой окраски среды (положительный контроль) при отсутствии зоны окраски среды вокруг газона A. baumannii (отрицательный контроль).

Применение питательной среды. Исследуемый материал — суточные культуры A. baumannii засевают на питательную среду в виде бляшек в отдельных секторах чашки (1/8 часть чашки), инкубируют аэробно при 37°С 18–24 ч, затем учитывают результат. Наличие вокруг газона бактерий зоны темно-коричневой окраски питательной среды указывает на принадлежность штамма к биовару A. baumannii bv. tryptophandestruens.

Определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам (АМП). Чувствительность к АМП изолятов A. baumannii определяли сразу после их видовой идентификации. Исследование проводили автоматизированным микробиологическим анализатором «Vitek 2 compact» (bioMerieux, Франция) в соответствии с инструкцией по применению. Клинические категории чувствительности изолятов к АМП определяли на основании пограничных значений минимальных подавляющих концентраций (МПК мг/л), установленных Европейским комитетом по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST), версия 11.0, и российских рекомендаций «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам», версия 11.0, 2011.01 [1]. На приборе «Vitek 2 compact» определяли результаты тестирования штаммов A. baumannii к АМП по категориям чувствительности (Ч) и резистентности (Р), используя следующие критерии пограничных значений МПК мг/л: меропенем (Ч ≤ 2; Р > 8), ципрофлоксацин (Ч ≤ 0,001; Р > 1), гентамицин (Ч ≤ 4; Р > 4), полимиксин В (Ч ≤ 2; Р > 2), триметоприм/сульфаметоксазол (Ч ≤ 20 по триметоприму). Отсутствует критерий EUCAST по определению клинической категории чувствительности бактерий Acinetobacter spp. к тигециклину. Поэтому для сравнительной характеристики штаммов A. baumannii и A. baumannii bv. tryptophandestruens по чувствительности к тигециклину оценивали распределение штаммов по МПК, МПК50%, МПК90%.

Результаты

Результаты сравнительной характеристики группы изолятов A. baumannii bv. tryptophandestruens и группы изолятов прочих A. baumannii по клинической категории чувствительных к антимикробным препаратам (Ч), определенной на основании критериев пороговых МПК мг/л по EUCAST, версия 11.0 [1], приведены в табл. 1.

 

Таблица 1. Характеристика чувствительности к антибиотикам клинических штаммов Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens и A. baumannii*

Table 1. Characteristics of antibiotic sensitivity of clinical strains of Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens and A. baumannii*

Антибиотики

Antibiotics

Штаммы A. baumannii bv. tryptophandestrues

Strains of A. baumannii bv. tryptophandestrues

n = 34

Штаммы A. baumannii

Strains of A. baumannii

n = 52

Уровни вероятностей различий М1 и М2 (Р)

M1 and M2 (P) difference probability level

Из них чувствительных к антибиотикам (Ч)**

From them sensitive to antibiotics (S)**

N1; M1 ± m1%

Из них чувствительных к антибиотикам (Ч)**

From them sensitive to antibiotics (S)**

N2; M2±m2%

Меропенем

Meropenem

3; 8,8±4,8

3,8 ± 2,6

> 0,05

Ципрофлоксацин

Ciprofloxacin

2; 5,8±4,0

5; 9,6±4,1

> 0,05

Гентамицин

Gentamicin

9; 26,7±7,5

10; 19,3±5,5

> 0,05

Триметоприм/ сульфаметоксазол

Trimethoprim/ sulfamethoxazole

13; 38,2±8,3

23,1±5,8

> 0,05

Полимиксин В

Polymyxin B

34; 100

52; 100

0

Примечание. * — чувствительность к антибиотикам определяли микробиологическим анализатором «Vitek 2 compact» (bioMerieux, Франция). ** — клиническую категорию чувствительных к антимикробным препаратам штаммов (Ч) определяли по пограничным значениям МПК, установленным EUCAST, версия 11.0 [1].

Note. * — sensitivity to antibiotics was determined by the “Vitek 2 compact” microbiological analyzer (bioMerieux, France). ** — the clinical category of antimicrobial-sensitive strains (S) was determined by the boundary MSC values established by EUCAST version 11.0 [1].

 

Результаты сравнительной характеристики чувствительности к тигециклину группы изолятов A. baumannii bv. tryptophandestruens и группы изолятов прочих A. baumannii, определенной методом их распределения по МПК, МПК50%, МПК90% представлены в табл. 2.

 

Table 2. Tigecycline sensitivity of clinical isolates of Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens and A. baumannii

Группы штаммов A. baumannii

Groups of A. baumannii strains

Распределение штаммов по значениям МПК, мг/л тигециклина (n; %)

Distribution of strains by MSC magnitude, tigecycline mg/l (n; % )

МПК, мг/л

MSC, mg/l

0,5

1

2

4

50%

90%

A. baumannii bv. tryptophandestruens (n = 34)

18; 52,9

8; 23,6

3; 8,8

5; 14,7

0,5

4

A. baumannii (n = 52)

8; 15,4

9; 17,3

3; 25,0

22; 42,3

2

4

 

Обсуждение

Установлено, что в группе изолятов A. baumannii bv. tryptophandestruens и группе изолятов прочих A. baumannii очень редко присутствуют штаммы, чувствительные (Ч) к меропенему (8,8±4,6 и 3,8±2,6% соответственно, р > 0,05) и ципрофлоксацину (5,8±4,0 и 9,6±4,1% соответственно, р > 0,05). Редко представлены в обеих группах штаммы, чувствительные к гентамицину (26,7±7,5 и 19,3±5,5% соответственно, р > 0,05) и триметоприм/сульфаметоксазолу (36,8±8,3 и 23,6±5,3% соответственно, р > 0,05). Сохранили чувствительность к полимиксину В все штаммы обеих групп (по 100%).

Выявлена особенность чувствительности к антимикробным препаратам бактерий биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens: они превосходят штаммы группы прочих A. baumannii по частоте изолятов с МПК 50% тигециклина (МПК 50% — 0,5 мг/л; МПК 50% — 2 мг/л соответственно), а также имеют достоверно больше штаммов с МПК 0,5 мг/л (52,9 и 15,4% соответственно, р < 0,01).

Результаты исследования могут быть использованы при выборе антимикробных препаратов для эмпирической химиотерапии инфекций, вызываемых A. baumannii, а также для разработки критериев определения клинической категории чувствительности A. baumannii к тигециклину по пороговой МПК.

Заключение

Таким образом, клинические изоляты биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens не имеют достоверных различий с изолятами прочих A. baumannii по частоте штаммов, чувствительных (Ч) к меропенему, ципрофлоксацину, гентамицину, триметоприм/сульфаметоксазолу, полимиксину В. Бактерии биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens отличаются от изолятов прочих A. baumannii показателями чувствительности к тигециклину — более высокой частотой штаммов с МПК 0,5 мг/л (р < 0,01) и МПК 50%.

×

Об авторах

Е. П. Сиволодский

ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова; ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера

Email: lykraeva@yandex.ru

д.м.н., профессор кафедры микробиологии, старший научный сотрудник лаборатории молекулярно-биологических технологий

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Л. А. Краева

ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова; ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера

Автор, ответственный за переписку.
Email: lykraeva@yandex.ru

д.м.н., зав. лабораторией медицинской бактериологии, профессор кафедры микробиологии

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Е. В. Мельникова

ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Email: lykraeva@yandex.ru

врач-бактериолог лаборатории бактериологии Центральной клинико-диагностической лаборатории

Россия, Санкт-Петербург

Г. В. Горелова

ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Email: lykraeva@yandex.ru

зав. лабораторией бактериологии Центральной клинико-диагностической лаборатории

Россия, Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Клинические рекомендации. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Версия 2021-01. Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии. [Clinical guidelines. Susceptibility testing to antimicrobial agents.v. 2021-01. Interregional Association for Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy (IACMAC). (In Russ.)] URL: https://www.antibiotic.ru/files/321/clrec-dsma2021.pdf
  2. Патент № 2787267 Российская Федерация. МПК G01N 33/48(2006.01), C12Q1/04(2006.01), СПК G01 33/48(2022.08), C12Q1/04(2022.080, C12Q1/045(2022.08), C12Q2304/00(2022.08). Способ идентификации биовара бактерий Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens; № 2022109368, заявлено 2022.04.07, опубликовано 2023.01.09 / Сиволодский Е.П. Патентообладатель Сиволодский Евгений Петрович.7 с. [Patent No 2787267 Russian Federation, Int.Cl. G01 33/48(2006.01), C12Q1/04(2006.01), SP.CL.G01N 33/48(2022.08), C12Q1/04(2022.08), C12Q1/04592022.08), C12Q 2304/00(2022.08). Metod of identificccation of biovar bacteria Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens; No 2023109368, application 2022.04.07.; date of publication 2023.01.09 / Sivolodskij T.P. Proprittors. Sivolodskij Evgenij Petrovich.7 p. (In Russ.)].
  3. Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Старкова Д.А., Михайлоов Н.В., Горелова Г.А. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens bv. nov., выделенный из клинического материала // Инфекция и иммунитет. 2021. Т. 11, № 5. С. 965–972. [Sivolodskii E.P., Kraeva L.A., Starkova D.A., Mikhailov N.V., Gorelova G.V. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens bv. nov., isolated from clinical samples. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2021, vol. 11, no. 5, pp. 965–972. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-ABB-1676

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Мельникова Е.В., Горелова Г.В., 2024

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 64788 от 02.02.2016.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах