Russian Journal of Infection and ImmunityRussian Journal of Infection and ImmunityИнфекция и иммунитет2220-76192313-7398SPb RAACI887510.15789/2220-7619-IAT-8875ORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИResearch ArticleIgG-antibodies to individual cytomegalovirus proteins and the peripheral blood lymphocyte subset profile in patients with anterior uveitis of varying severityIgG-антитела к индивидуальным белкам цитомегаловируса и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у пациентов с передними увеитами разной степени тяжестиKrichevskayaGalina I.КричевскаяГалина Исааковна
Russian Federation

PhD (Medicine), Leading Researcher, Department of Immunology and Virology

кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии

gkri@yandex.ruBalatskayaNatalya V.БалацкаяНаталья Владимировна
Russian Federation

PhD (Biology), Leading Researcher, Department of Immunology and Virology, Head of the Department of Immunology and Virology

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, начальник отдела иммунологии и вирусологии

gkri@yandex.ruAlatortsevaGalina I.АлаторцеваГалина Ивановна
Russian Federation

PhD (Biology), Head of the Laboratory for Cloning Viral Genomes

кандидат биологических наук, зав. лабораторией клонирования вирусных геномов

gkri@yandex.ruSorozhkinaEkaterina S.СорожкинаЕкатерина Сергеевна
Russian Federation

Researcher, Department of Immunology and Virolog

научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии

gkri@yandex.ruKovalevaLyudmila A.КовалеваЛюдмила Анатольевна
Russian Federation

PhD (Medicine), Researcher, Department of Infectious and Allergic Eye Diseases

кандидат медицинских наук, научный сотрудник отдела инфекционных и аллергических заболеваний глаз

gkri@yandex.ruKulikovaIrina G.КуликоваИрина Геннадиевна
Russian Federation

Senior Researcher, Department of Immunology and Virology

старший научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии

gkri@yandex.ruDotsenkoVera V.ДоценкоВера Васильевна
Russian Federation

PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory for Cloning Viral Genomes

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории клонирования вирусных геномов

gkri@yandex.ruNesterenkoLyubov N.НестеренкоЛюбовь Николаевна
Russian Federation

PhD (Chemistry), Leading Researcher, Laboratory for Cloning Viral Genomes

кандидат химических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клонирования вирусных геномов

gkri@yandex.ruLukhverchikLyudmila N.ЛухверчикЛюдмила Николаевна
Russian Federation

PhD (Biology), Leading Researcher, Laboratory for Cloning Viral Genomes

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клонирования вирусных геномов

gkri@yandex.ruHelmholtz National Medical Research Center of Eye DiseasesФГБУ НМИЦ глазных болезней имени Гельмгольца Минздрава РоссииI.I. Mechnikov Research Institute for Vaccines and SeraФГБНУ НИИ вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова30062023241020231346997082604202321062023Copyright ©; 2023, Kriсhevskaya G.I., Balatskaya N.V., Alatortseva G.I., Sorozhkina E.S., Kovaleva L.A., Kulikova I.G., Dotsenko V.V., Nesterenko L.N., Lukhverchik L.N.Copyright ©; 2023, Кричевская Г.И., Балацкая Н.В., Алаторцева Г.И., Сорожкина Е.С., Ковалева Л.А., Куликова И.Г., Доценко В.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н.2023Kriсhevskaya G.I., Balatskaya N.V., Alatortseva G.I., Sorozhkina E.S., Kovaleva L.A., Kulikova I.G., Dotsenko V.V., Nesterenko L.N., Lukhverchik L.N.Кричевская Г.И., Балацкая Н.В., Алаторцева Г.И., Сорожкина Е.С., Ковалева Л.А., Куликова И.Г., Доценко В.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://iimmun.ru/iimm/article/view/8875

Background. Cytomegalovirus (CMV), a human beta-herpesvirus, persists latently lifelong after infection. CMV reactivation that occurs periodically can cause disease in target organs including the eye, not only in immunosuppressed, but also in immunocompetent people. Due to its immunosuppressive properties, persistent CMV is involved in the pathogenesis of diverse diseases. The aim was to study the features of antibody formation against six individual CMV proteins and to conduct a correlation analysis with parameters of peripheral blood lymphocyte profile in patients with anterior uveitis of varying severity (without hypopion-mild course, with hypopion-more severe course). Materials and methods. 36 patients with anterior uveitis were examined. Group I consisted of 20 patients without hypopion, group II — 16 people with hypopion. No characteristic features of CMV anterior uveitis (elevated intraocular pressure, stromal iris atrophy) were found. Blood serum anti-CMV IgG antibodies (markers of chronic infection) were measured by ELISA, antibodies against individual recombinant CMV antigens were assessed by Line-Immunoassay specific to the main non-structural immediate early protein (IE), DNA-binding phosphoprotein p52, phosphoproteins of the tegument p150, p65, p28, GB-AD envelope glycoprotein. Lymphocyte subset composition was studied by flow cytometry: T-lymphocytes (CD3+), T-helper cells (CD3+CD4+CD8–), T-cytotoxic (CD3+CD4–CD8+), T-double-positive (CD3+CD4+CD8+), natural killers (CD16+CD56+), B-lymphocytes (CD19+). Statistical analysis was performed using StatTech v. 3.0.2 program (Stattech LLC, Russia). Results. In mild anterior uveitis, there was observed a significantly increased percentage of CD16+CD56+ and a decreased absolute number of CD3+CD8+ compared with anterior uveitis of a more severe course. Only in the group of patients with hypopion (more severe course) there was a direct significant correlation between level of antibodies against IE, p65, p28 antigens and percentage of double-positive cells (CD3+CD4+CD8+) as well as an negative significant relationship between the level of antibodies against IE, p65 and p52 antigens and CD19+ lymphocytes. Conclusion. The data obtained are consistent with few reports on the role of double-positive lymphocytes in the pathogenesis of severe forms of some viral diseases. Further studies are needed to assess an effect of individual viral antigens on CD3+CD4+CD8+ level in patients with chronic CMV infection to confirm the role of double-positive lymphocytes in the pathogenesis of a more severe course of anterior uveitis.

Актуальность. Цитомегаловирус (CMV), β-герпесвирус человека, после попадания в организм человека пожизненно персистирует в латентной форме. Возникающая периодически реактивация CMV может вызывать заболевание разных органов, включая глаз, не только при иммуносупрессии, но и у иммунокомпетентных людей. Благодаря своим иммуносупрессивным свойствам персистирующий CMV участвует в патогенезе заболеваний разной этиологии.

Целью данного исследования было изучение особенностей антителообразования к шести индивидуальным белкам CMV и проведение корреляционного анализа его взаимосвязи с показателями субпопуляционного состава лимфоцитов крови у пациентов с передними увеитами разной степени тяжести (без гипопиона — легкое течение, с гипопионом — более тяжелое течение).

Материалы и методы. Обследовано 36 пациентов с передними увеитами. I группу составили 20 пациентов без гипопиона, II группу — 16 человек с гипопионом. Патогномоничные для ЦМВ-обусловленных передних увеитов клинические симптомы (глаукомо-циклитические кризы, секторальная атрофия радужки) отсутствовали. В сыворотках крови в иммуноферментном анализе определяли IgG-антитела к CMV (маркеры хронической инфекции), в линейном иммуноанализе — антитела к индивидуальным рекомбинантным антигенам CMV: основному неструктурному предраннему белку (IE), ДНК-связывающему фосфопротеину р52, фосфопротеинам тегумента р150, р65, р28, гликопротеину оболочки GB-AD. Методом проточной цитометрии исследовали субпопуляционный состав лимфоцитов: Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы (CD3+CD4+CD8—), Т-цитотоксические (CD3+CD4–CD8+), Т-дубль-позитивные (CD3+CD4+CD8+), натуральные киллеры (CD16+CD56+), В-лимфоциты (CD19+), иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+). Статистический анализ проводили с помощью программы StatTech v. 3.0.2 (ООО «Статтех»).

Результаты. При передних увеитах легкого течения обнаружено статистически значимое повышение относительного содержания CD16+CD56+ и снижение абсолютного числа CD3+CD8+ по сравнению с передними увеитами более тяжелого течения. Только в группе пациентов с наличием гипопиона (более тяжелое течение) выявлена прямая корреляционная заметная достоверная связь между уровнями антител к антигенам IE, р65, р28 и содержанием дубль-позитивных клеток (CD3+CD4+CD8+) и обратная достоверная связь между уровнями антител к антигенам IE, p65 и р52 и CD19+ лимфоцитами.

Заключение. Полученные результаты согласуются с имеющимися в литературе единичными сообщениями о роли дубль-позитивных лимфоцитов в патогенезе тяжелых форм ряда вирусных заболеваний. Необходимы дальнейшие исследования влияния индивидуальных вирусных антигенов на содержание CD3+CD4+CD8+ у пациентов с хронической ЦМВИ для подтверждения роли дубль-позитивных лимфоцитов в патогенезе более тяжелого течения передних увеитов.

CMV antigenslymphocyte subpopulationsdouble positive lymphocytesanterior uveitisline-immunoassayhypopion.антигены ЦМВсубпопуляции лимфоцитовдубль-позитивные лимфоцитыпередние увеитылинейный иммуноанализгипопион.Балацкая Н.В., Еремеева Е.А., Слепова О.С., Рябина М.В., Куликова И.Г., Сорожкина Е.С. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у пациентов с возрастной макулярной дегенерацией // Медицинская иммунология. 2015. Т. 17, № 5. С. 461–466. [Balatskaya N.V., Eremeeva E.A., Slepova O.S., Ryabina M.V., Kulikova I.G., Sorozhkina E.S. Peripheral blood subpopulation of lymphocytes of patients with age-related macular degeneration. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2015, vol. 17, no. 5, pp. 461–466. (In Russ.)] doi: 10.15789/1563-0625-2015-5-461-466Лебедев М.Ю., Шолкина М.Н., Живцов О.П. Содержание дубль-позитивных CD4+CD8+ лимфоцитов в периферической крови тяжелообожженных и больных с остеомиелитом // Фундаментальные исследования. 2013. № 12-1. С. 45–48. [Lebedev M.Y., Sholkina M.N., Zhivshov O.P. Content of double-positive CD4+CD8+ lymphocytes in peripheral blood of patients with severe burns and patients with osteitis. Fundamental’nye issledovaniya = Fundamental Research, 2013, no. 12, pp. 45–48. (In Russ.)]Нероев В.В., Кричевская Г.И., Алаторцева Г.И., Рябина М.В., Сарыгина А.П., Нестеренко Л.Н., Доценко В.В., Лухверчик Л.Н. Особенности продукции IgG-антител к индивидуальным белкам цитомегаловируса при различных заболеваниях глаз (возрастной макулярной дегенерации и центральной серозной хориоретинопатии) // Инфекция и иммунитет. 2021. Т. 11, № 3. C. 530–538. [Neroev V.V., Krichevskaya G.I., Alatortseva G.I., Ryabina M.V., Sarygina A.P., Nesterenko L.N., Dotsenko V.V., Lukhverchik L.N. Features of IgG-antibodies production to individual Cytomegalovirus proteins in various eye diseases (age-related macular degeneration and central serous chorioretinopathy). Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2021, vol. 11, no. 3, pp. 530–538. (in Russ)] doi: 10.15789/2220-7619-FOI-1424Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян Арег А., Черешнев В.А. Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения (методом многоцветного цитометрического анализа) // Медицинская иммунология. 2009, Т. 11, № 2–3. C. 227–238. [Khaidukov S.V., Zuruchka A.V., Totolian Areg A., Chereshnev V.A. Major and lymphocyte populations of human peripheral blood lymphocytes and their reference values? As assayed by multi-colour cytometry. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2009, vol. 11, no. 2–3, рр. 227–238. (In Russ.)]Blue M.L., Daley J.F., Levine H., Craig K.A., Schlossman S.F. Biosynthesis and surface expression of T8 by peripheral blood T4+ cells in vitro. J. Immunol., 1986, vol. 137, no. 4, pp. 1202–1207.Chan N.S., Chee S.P., Caspers L., Bodaghi B. Clinical features of CMV-associated anterior uveitis. Ocul. Immunol. Inflamm., 2018, vol. 26, no. 1, pp. 107–115. doi:10.1080/09273948.2017.1394471Giraldo N.A., Bolaños N.I., Cuellar A., Guzman F., Uribe A.M., Bedoya A., Olaya N., Cucunubá Z.M., Roa N., Rosas F., Velasco V., Puerta C.J., González J.M. Increased CD4+/CD8+ double-positive T cells in chronic Chagasic patients. PLoS Negl. Trop. Dis., 2011, vol. 5, no. 8: e1294. doi: 10.1371/journal.pntd.0001294Jackson S.E., Mason G.M., Okecha G., Sissons J.G., Wills M.R. Diverse specificities, phenotypes, and antiviral activities of cytomegalovirus-specific CD8+ T cells. J. Virol., 2014, vol. 88, no. 18, pp. 10894–10908. doi: 10.1128/JVI.01477-14Kern F., Bunde T., Faulhaber N., Kiecker F., Khatamzas E., Rudawski I.M., Pruss A., Gratama J.W., Volkmer-Engert R., Ewert R., Reinke P., Volk H.D., Picker L.J. Cytomegalovirus (CMV) phosphoprotein 65 makes a large contribution to shaping the T cell repertoire in CMV-exposed individuals. J. Infect. Dis., 2002, vol. 185, no. 12, pp. 1709–1716. doi: 10.1086/340637Kucuksezer U.C., Aktas Cetin E., Esen F., Tahrali I., Akdeniz N., Gelmez M.Y., Deniz G. The role of natural killer cells in autoimmune diseases. Front. Immunol., 2021, vol. 12: 622306. doi:10.3389/fimmu.2021.622306König P., Svrlanska A., Read C., Feichtinger S., Stamminger T. The autophagy-initiating protein kinase ULK1 phosphorylates human cytomegalovirus tegument protein pp28 and regulates efficient virus release. J. Virol., 2021, vol. 95, no. 6: e02346–20. doi: 10.1128/JVI.02346-20Overgaard N.H., Jung J.W., Steptoe R.J., Wells J.W. CD4+/CD8+ double-positive T cells: more than just a developmental stage? J. Leukoc. Biol., 2015, vol. 97, no. 1, pp. 31–38. doi: 10.1189/jlb.1RU0814-382Siddiqui S., Hackl S., Ghoddusi H., McIntosh M.R., Gomes A.C., Ho J., Reeves M.B., McLean G.R. IgA binds to the AD-2 epitope of glycoprotein B and neutralizes human cytomegalovirus. Immunology, 2021, vol. 162, no. 3, pp. 314–327. doi: 10.1111/imm.13286Sylwester A.W., Mitchell B.L., Edgar J.B., Taormina C., Pelte C., Ruchti F., Sleath P.R., Grabstein K.H., Hosken N.A., Kern F., Nelson J.A., Picker L.J. Broadly targeted human cytomegalovirus-specific CD4+ and CD8+ T cells dominate the memory compartments of exposed subjects. J. Exp. Med., 2005, vol. 202, no. 5, pp. 673–685. doi: 10. 1084/jem.20050882Vescovini R., Telera A.R., Pedrazzoni M., Abbate B., Rossetti P., Verzicco I., Arcangeletti M.C., Medici M.C., Calderaro A., Volpi R., Sansoni P., Fagnoni F.F. Impact of persistent cytomegalovirus infection on dynamic changes in human immune system profile. PLoS One, 2016, vol. 11, no. 3: e0151965. doi: 10.1371/journal.pone.0151965Yu E.D., Wang H., da Silva Antunes R., Tian Y., Tippalagama R., Alahakoon S.U., Premawansa G., Wijewickrama A., Premawansa S., De Silva A.D., Frazier A., Grifoni A., Sette A., Weiskopf D. A population of CD4+CD8+ double-positive T cells associated with risk of plasma leakage in dengue viral infection. Viruses, 2022, vol. 14, no. 1: 90. doi: 10.3390/v14010090Zhang H., Wang Y., Ma Y., Tang K., Zhang C., Wang M., Zhang X., Xue M., Jia X., Hu H., Li N., Zhuang R., Jin B., Chen L., Zhang Y., Zhang Y. Increased CD4+CD8+ double positive T cells during hantaan virus infection. Viruses, 2022, vol. 14, no. 10: 2243. doi: 10.3390/v14102243