Russian Journal of Infection and ImmunityRussian Journal of Infection and ImmunityИнфекция и иммунитет2220-76192313-7398SPb RAACI78810.15789/2220-7619-2018-3-361-368ORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИEFFICIENCY OF APPLICATION OF ISOTHERMAL AMPLIFICATION AT INSPECTION OF PATIENTS WITH WHOOPING COUGHЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОТЕРМИЧЕСКОЙ АМПЛИФИКАЦИИ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ БОЛЬНЫХ КОКЛЮШЕМPimenovaA. S.ПименоваА. С.
Russian Federation

Junior Researcher, Laboratory of Diagnostic of Diphtheria and Pertussis Infections.

Moscow.

младший научный сотрудник лаборатории диагностики дифтерийной и коклюшной инфекций.

Москва.BorisovaO. Yu.БорисоваО. Ю.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Associate Professor, Head of the Laboratory of Diagnostic of Diphtheria and Pertussis Infections.

125212, Russian Federation, Moscow, Admiral Makarov str., 10.

Phone: +7 (499) 747-64-84 (office); +7 916 147-19-60 (mobile).

Fax: +7 (495) 452-18-30.

д.м.н., доцент, руководитель лаборатории диагностики дифтерийной и коклюшной инфекций.

125212, Россия, Москва, ул. Адмирала Макарова, 10.

Тел.: 8 (499) 747-64-84 (служебн.); 8 916 147-19-60 (моб.).

Факс: 8 (495) 452-18-30.

olgborisova@mail.ruPetrovaM. S.ПетроваМ. С.
Russian Federation

PhD (Medicine), Senior Researcher, Clinical Department.

Moscow.

старший научный сотрудник клинического отдела.

Москва.VoroninaI. S.ВоронинаИ. С.
Russian Federation

Junior Researcher, Clinical Department.

Moscow.

младший научный сотрудник клинического отдела.

Москва.BorisovaA. B.БорисоваА. Б.
Russian Federation

Junior Researcher, Clinical Department.

Moscow.

младший научный сотрудник клинического отдела.

Москва.ShamshevaO. V.ШамшеваО. В.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor, Head of Department of Infectious Diseases of Children.

Moscow.

д.м.н., профессор, зав. кафедрой инфекционных болезней у детей.

Москва.AfanasievS. S.АфанасьевС. С.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor, Head Researcher.

Moscow.

д.м.н., профессор, главный научный сотрудник.

Москва.VlasovE. V.ВласовЕ. В.
Russian Federation

Deputy Chief Physician For A Medical Part (Childhood).

Moscow.

зам. главного врача по медицинской части (детство).

Москва.

AleshkinV. A.АлешкинВ. А.
Russian Federation

PhD, MD (Biology), Professor, Director.

Moscow.

д.б.н., профессор, директор.

Москва.

G.N. Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and Microbiology.ФБУН Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.G.N. Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and MicrobiologyФБУН Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского РоспотребнадзораRussian National Research Medical University named after N.I. Pirogov.ФГБОУ ВО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова МЗ РФ.G.N. Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and Microbiology.ФГБОУ ВО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова МЗ РФ.Infectious Diseases Clinical Hospital No. 1 of the Moscow Department of Healthcare.ГБУЗ Инфекционная клиническая больница № 1 Департамента здравоохранения города Москвы.04112018833613680211201802112018Copyright ©; 2018, Pimenova A.S., Borisova O.Y., Petrova M.S., Voronina I.S., Borisova A.B., Shamsheva O.V., Afanasiev S.S., Vlasov E.V., Aleshkin V.A.Copyright ©; 2018, Пименова А.С., Борисова О.Ю., Петрова М.С., Воронина И.С., Борисова А.Б., Шамшева О.В., Афанасьев С.С., Власов Е.В., Алешкин В.А.2018Pimenova A.S., Borisova O.Y., Petrova M.S., Voronina I.S., Borisova A.B., Shamsheva O.V., Afanasiev S.S., Vlasov E.V., Aleshkin V.A.Пименова А.С., Борисова О.Ю., Петрова М.С., Воронина И.С., Борисова А.Б., Шамшева О.В., Афанасьев С.С., Власов Е.В., Алешкин В.А.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://iimmun.ru/iimm/article/view/788

Purpose: efficiency isothermal amplification (LAMP) at inspection of patients with whooping cough in clinical conditions. Materials and methods. Examination of 262 patients aged from 0 months up to 30 years hospitalized in Infectious diseases clinical hospital No. 1 of the Moscow Department of Healthcare is conducted. Clinical specimens (pharyngeal swabs) were collected according to MR 3.1.2.0072-13. Extraction DNA of B. pertussiswas carried out by means of the АmplyPrime® DNA-sorb-AM. Identification of specific fragments of a genome of B. pertussiswas performed by PCR-real time by means of the АmplySens ® Bordetella Multi-FL set (a comparison method) and by the LAMP with a phoresis and intercalating dye. Results.When using of the optimized method LAMP the DNA of B. pertussisis found at 252 (96.2%) patients. The method was effective at any forms of whooping cough —DNA of B. pertussisis found in all patients with a severe form, in 95.8% of cases — in patients with medium-weight and in 95.3% of cases — in patients with an easy form. The DNA of B. pertussisis found in clinical specimens received from patients on different terms from the beginning of a disease — from 92.3% on the 1st week up to 96% of cases — on the 5 th and more weeks of a disease. The DNA of B. pertussisis found in high percent of cases (96.7–95.9%) and did not depend on acceptance of antibacterial therapy. Children till 1 year are the main age group which is subject to hospitalization at suspicion of whooping cough and in which the highest risk of development of complications and severe forms of a clinical disease. At inspection of 169 children from 0 to 12 months by means of the optimized method LAMP, DNA of B. pertussisit is found in 98.6% of cases in children of patients with whooping cough aged from 0–3 months, in 98.4% of cases — children of 4–7 months and in 94.6% of cases — at children have 8–12 months. The efficiency of detection of DNA of B. pertussisat patients with whooping cough of children aged till 1 year by means of the optimized LAMP method was 97.6%.

Цель исследования: оценка эффективности применения оптимизированного нами способа генодиагностики на основе изотермической амплификации (LAMP) при обследовании больных с подозрением на коклюш в клинических условиях. Материалы и методы. Проведено обследование 262 пациентов в возрасте от 0 месяцев до 30 лет, госпитализированных в ГБУЗ Инфекционная клиническая больница № 1 ДЗМ. Взятие патологического материала проводили согласно МР 3.1.2.0072-13 с задней стенки ротоглотки. Экстракцию ДНК B. pertussis из исследуемых образцов проводили с помощью тест-системы «АмплиПрайм ® ДНК-сорб-АМ». Выявление специфических фрагментов генома возбудителя коклюша осуществляли методом ПЦР-РВ с помощью набора «АмплиСенс ® Bordetella multi-FL» (метод сравнения) и методом LAMP c помощью электрофореза и интеркалирующего красителя. Результаты. При использовании оптимизированного нами способа, ДНК B. pertussis обнаружена у 252 (96,2%) больных. Метод был эффективен при любых формах клинического течения коклюша — ДНК B. pertussis обнаружена у всех пациентов с тяжелой формой, в 95,8% случаев — у пациентов со среднетяжелой и в 95,3% случаев — у пациентов с легкой формой. ДНК B. Pertussis обнаружена в пробах клинического материала, полученных от больных на разных сроках от начала заболевания — от 92,3% на 1-й неделе до 96% случаев — на 5-й и более неделях заболевания. ДНК B. pertussis обнаружена в высоком проценте случаев (96,7–95,9%) и не зависела от приема антибактериальных препаратов. Дети до 1 года являются основной возрастной группой, подлежащей госпитализации при подозрении на коклюш, так как имеют наиболее высокий риск развития осложнений и тяжелых форм клинического течения. При обследовании 169 детей от 0 до 12 месяцев с помощью оптимизированного метода LAMP, ДНК B. pertussisобнаружена в 98,6% случаев у детей, больных коклюшем, в возрасте от 0–3 месяцев, в 98,4% случаев — у детей 4–7 месяцев и в 94,6% случаев — у детей 8–12 месяцев. Эффективность обнаружения ДНК возбудителя у больных коклюшем детей в возрасте до 1 года с помощью оптимизированного метода LAMP составила 97,6%.

whooping coughisothermal amplificationpatientsageperiod of diseaseкоклюшизотермальная амплификацияпациентывозрастпериод болезни1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998. 459 с.2. Медкова А.Ю., Синяшина Л.Н., Румянцева Ю.П., Воронина О.Л., Кунда М.С., Каратаев Г.И. Накопление авирулентных инсерционных Bvg мутантов Bordetella pertussis при экспериментальной инфекции лабораторных мышей // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2013. № 4. С. 22–26.3. Петри А., Сэбин К. Наглядная медицинская статистика. Москва: «ГЭОТАР-Медиа», 2015. 216 с.4. Пpадед М.Н., Яцышина С.Б., Селезнева Т.С., Малинина С.В., Биpюлева Н.В., Любимова Т.Е., Воpобьева Н.С. ПЦР-диагностика инфекций, вызванных B. pertussis, B. parapertussis и B. bronchiseptica // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. № 1. С. 53–56.5. Backman A., Johansson B., Olcen P. Nested PCR optimized for detection of Bordetella pertussis in clinical nasopharyngeal samples. J. Clin. Microbiol., 1994, vol. 32, no. 10, pp. 2544–2548.6. Birkebaek N.H., Heron I., Skjodt K. Bordetella pertussis diagnosed by polymerase chain reaction. APMIS, 1994, vol. 102, no. 4, pp. 291–294. doi: 10.1111/j.1699-0463.1994.tb04878.x7. Brotons P., de Paz H.D., Esteva C., Latorre I., Muñoz-Almagro C. Validation of a loop-mediated isothermal amplification assay for rapid diagnosis of pertussis infection in nasopharyngeal samples. Expert Rev. Mol. Diagn., 2016, vol. 16, no. 1, pp. 125–130. doi: 0.1586/14737159.2016.11127418. Douglas E., Coote J.G., Parton R., McPheat W. Identification of Bordetella pertussis in nasopharyngeal swabs by PCR amplification of a region of the adenylate cyclase gene. J. Med. Microbiol., 1993, vol. 38, no. 2, pp. 140–144. doi: 10.1099/00222615-38-2-1409. Dragsted D.M., Dohn B., Madsen J., Jensen J.S. Comparison of culture and PCR for detection of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis under routine laboratory conditions. J. Med. Microbiol., 2004, vol. 53, no. 8, pp. 749–754. doi: 10.1099/jmm.0.45585-010. Fujino M., Suzuki E., Watanabe M., Nakayama T. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) aids the clinical diagnosis of pertussis. Jpn. J. Infect. Dis., 2015, vol. 68, no. 6, pp. 532–533. doi: 10.7883/yoken.JJID.2015.12511. Glare E.M., Paton J.P., Premier R.R., Lawrence A.J., Nisbet I.T. Analysis of a repetitive DNA sequence from Bordetella pertussis and its application to the diagnosis of pertussis using the polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol., 1990, vol. 28, no. 9, pp. 1982–1987.12. Grimprel E.P., Begue P., Anjak I., Betsou F., Guiso N. Comparison of polymerase chain reaction, culture and Western immunoblot serology for diagnosis of Bordetella pertussis infections. J. Clin. Microbiol., 1993, vol. 31, no. 10, pp. 2745–2750.13. He Q., Mertsola J., Soini H., Skurnik M., Ruuskanen O., Viljanen M.K. Comparison of polymerase chain reaction with culture and enzyme immunoassay for diagnosis of pertussis. J. Clin. Microbiol., 1993, vol. 31, no. 3, pp. 642–645.14. Houard S., Hackel C., Herzog A., Bollen A. Specific identification of Bordetella pertussis by the polymerase chain reaction. Res. Microbiol., 1989, vol. 140, no. 7, pp. 477–487.15. Kamachi K., Moriuchi T., Hiramatsu Y., Otsuka N., Shibayama K. Evaluation of a commercial loop-mediated isothermal amplification assay for diagnosis of Bordetella pertussis infection. J. Microbiol. Methods, 2017, vol. 133, pp. 20–22. doi: 10.1016/j.mimet.2016.12.00916. Kamachi K., Toyoizumi-Ajisaka H., Toda K., Soeung S.Ch., Sarath S., Nareth Y., Horiuchi Y., Kojima K., Takahashi M., Arakawa Y. Development and evaluation of a loop-mediated isothermal amplification method for rapid diagnosis of Bordetella pertussis infection. J. Clin. Microbiol., 2006, vol. 44, no. 5, pp. 1899–1902. doi: 10.1128/JCM.44.5.1899-1902.200617. Kamachi K., Yoshino S., Katsukawa C., Otsuka N., Hiramatsu Y., Shibayama K. Laboratory-based surveillance of pertussis using multitarget real-time PCR in Japan: evidence for Bordetella pertussis infection in preteens and teens. New Microbes New Infect., 2015, vol. 8, pp. 70–74. doi: 10.1016/j.nmni.2015.10.00118. Lanotte Ph., Plouzeau C., Burucoa C., Grélaud C., Guillot S., Guiso N., Garnier F. Evaluation of four commercial real-time PCR assays for detection of Bordetella spp. in nasopharyngeal aspirates. J. Clin. Microbiol., 2011, vol. 49, no. 11, pp. 3943–3946. doi: 10.1128/JCM.00335-1119. Li Z.M., Hannah J.H., Stibitz S., Nguyen N.Y., Manclark C.R., Brennan M.J. Cloning and sequencing of the structural gene for the porin protein of Bordetella pertussis. Mol. Microbiol., 1991, vol. 5, no. 7, pp. 1649–1656.20. Li Z.M., Jansen D.L., Finn T.M., Halperin S.A., Kasina A., O’Connor S.P., Aoyama T., Manclark C.R., Brennan M.J. Identification of Bordetella pertussis infection by shared-primer PCR. J. Clin. Microbiol., 1994, vol. 32, no 3, pp. 783–789.21. Litt D.J., Jauneikaite E., Tchipeva D., Harrison T.G., Fry N.K. Direct molecular typing of Bordetella pertussis from clinical specimens submitted for diagnostic quantitative (real-time) PCR. J. Med. Microbiol., 2012, vol. 61, no. 12, pp. 1662–1668. doi: 10.1099/jmm.0.049585-022. Loeffelholz M. Towards improved accuracy of Bordetella pertussis nucleic acid amplification tests. J. Clin. Microbiol., 2012, vol. 50, no. 7, pp. 2186–2190. doi: 10.1128/JCM.00612-1223. Mastrantonio P., Stefanelli P., Giuliano M. Polymerase chain reaction for the detection of Bordetella pertussis in clinicalnasopharyngeal aspirates. J. Med. Microbiol., 1996, vol. 44, no. 4, pp. 261–266. doi: 10.1099/00222615-44-4-26124. Mattoo S., Cherry J.D. Molecular pathogenesis, epidemiology, and clinical manifestations of respiratory infections due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies. Clin. Microbiol. Rev., 2005, vol. 18, no. 2, pp. 326–382. doi: 10.1128/CMR.18.2.326-382.200525. Notomi T., Mori Y., Tomita N., Kanda H. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): principle, features, and future prospects. J. Microbiol., 2015, vol. 53, no. 1, pp. 1–5. doi: 10.1007/s12275-015-4656-926. Notomi T., Okayama H., Masubuchi H., Yonekawa T., Watanabe K., Amino N., Hase T. Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res., 2000, vol. 28, no. 12, pp. e63.27. Qin X. Resurgence of pertussis and its laboratory diagnosis. Clin. Microbiol. Newsl., 2015, vol. 37, no. 9, pp. 69–76. doi: 10.1016/j.clinmicnews.2015.04.00128. Qin X., Galanakis E., Martin E.T., Englund J.A. Multitarget PCR for diagnosis of pertussis and its clinical implications. J. Clin. Microbiol., 2007, vol. 45, no. 2, pp. 506–511. doi: 10.1128/JCM.02042-0629. Rodgers L., Martin S.W., Cohn A., Budd J., Marcon M., Terranella A., Mandal S., Salamon D., Leber A., Tondella M.L., Tatti K., Spicer K., Emanuel A., Koch E., McGlone L., Pawloski L., Lemaile-Williams M., Tucker N., Iyer R., Clark T.A., Diorio M. Epidemiologic and laboratory features of a large outbreak of pertussis-like illnesses associated with cocirculating Bordetella holmesii and Bordetella pertussis – Ohio, 2010–2011. Clin. Infect. Dis., 2013, vol. 56, no. 3, pp. 322–331. doi:10.1093/cid/cis88830. Schlapfer G., Cherry J.D., Heininger U., Uberal M., Schmitt-Grohe S., Laussucq S., Just M., Stehr K. Polymerase chain reaction identification of Bordetella pertussis infections in vaccinees and family members in a pertussis vaccine efficacy trial in Germany. Pediatr. Infect. Dis. J., 1995, vol. 14, no. 3, pp. 209–214.31. Schlapfer G., Senn H.P., Berger R., Just M. Use of the polymerase chain reaction to detect Bordetella pertussis in patientswith mild or atypical symptoms of infection. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1993, vol. 12, no. 6, pp. 459–463.32. Stone B.L., Daly J., Srivastava R. Duration of Bordetella pertussis polymerase chain reaction positivity in confirmed pertussis illness. J. Pediatric. Infect. Dis. Soc., 2014, vol. 3, no. 4, pp. 347–349. doi: 10.1093/jpids/piu00433. Van der Zee A., Agterberg C., Peeters M., Mooi F., Schellekens J. A clinical validation of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis polymerase chain reaction: comparison with culture and serology using samples from patients with suspected whooping cough from a highly immunized population. J. Infect. Dis., 1996, vol. 174, no. 1, pp. 89–96.34. Van der Zee A., Agterberg C., Peeters M., Schellekens J., Mooi F.R. Polymerase chain reaction assay for pertussis: simultaneous detection and discrimination of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis. J. Clin. Microbiol., 1993, vol. 31, no. 8, pp. 2134–2140.