PhD (Biology), Leading Researcher, Laboratory of Molecular Biology and Biotechnology,
603950, Nizhny Novgorod, Malaya Yamskaya str., 71
к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии,
603950, Нижний Новгород, ул. Малая Ямская, 71
Junior Researcher, Laboratory of Molecular Biology and Biotechnology,
Nizhny Novgorod
младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии,
Нижний Новгород
Researcher, Laboratory of Molecular Biology and Biotechnology,
Nizhny Novgorod
научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии,
Нижний Новгород
PhD (Medicine), Assistant Professor, Department of Childhood Infections,
Nizhny Novgorod
к.м.н., ассистент кафедры детских инфекций,
Нижний Новгород
PhD (Biology), Head of the Laboratory of Molecular Biology and Biotechnology; Associate Professor, Department of Microbiology and Immunology,
Nizhny Novgorod
к.б.н., зав. лабораторией молекулярной биологии и биотехнологии;
доцент кафедры микробиологии и иммунологии,
Нижний Новгород
Infectious mononucleosis is a widespread disease caused by certain members of Herpesviridae family. Acute infectious mononucleosis develops predominantly in children and is accompanied by an increase of the number of circulating naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes in the peripheral blood. The normalization of immunological parameters is achieved within 4–6 months after recovery and that is an indicator of a proper functioning of the immune system. CD95 and DR3 death receptors are involved in the initiation of apoptosis of naive T-lymphocytes in healthy people and in patients with infectious mononucleosis. The aim of the study was to evaluate the ability of CD95 and DR3 receptors to initiate apoptosis of naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes in children with infectious mononucleosis during convalescence. The material for the study was the samples of the peripheral blood of children who previously had infectious mononucleosis. The blood sampling was carried out again after 4–6 months after the disease. At the time of the study, children did not display clinical and laboratory signs of infectious mononucleosis. Same children who were examined earlier in the period of the development of acute infectious mononucleosis, as well as relatively healthy children were used as the comparison groups. Isolation of naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes was performed by negative magnetic immunoseparation. For specific stimulation of CD95 and DR3 receptors monoclonal antibodies were used. The level of apoptosis and expression of death receptors were evaluated by flow cytometry. Freshly isolated cells were analyzed, as well as cells cultured with the addition of appropriate monoclonal antibodies. It was shown that the recovery period was accompanied by increased apoptosis of freshly isolated naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes compared with the acute phase of infectious mononucleosis. Thus in both populations of naive T-cells showed an increase of CD95+ cells’ susceptibility to apoptosis. CD95 stimulation in the cell culture did not lead to the change in the level of apoptosis of naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes. The freshly isolated naive CD4+ and naive CD8+ T-lymphocytes DR3+ cells were resistant to apoptosis, and in the process of cultivating their sensitivity varied depending on the subpopulation belonging. Thus in the culture of naive CD4+ T-lymphocytes DR3 was not involved in the transfer of pro-apoptotic signal. In the culture of naive CD8+ T-lymphocytes DR3+ cells were possible to increase the apoptosis of DR3-negative cells. At the same time the DR3 activation by monoclonal antibodies in the culture caused the death of DR3+ naive CD8+ T-lymphocytes that naturally associated with decreased proapoptotic activity of these cells and resulted in inhibition of apoptosis of total pool of naive CD8+ T-lymphocytes. Thus, the functional ability of CD95 and DR3 receptors to trigger an apoptosis of naive T-lymphocytes in children during convalescence of infectious mononucleosis varied and depended on their belonging to naive CD4+ or naive CD8+ T-lymphocytes.
Инфекционный мононуклеоз — широко распространенное заболевание, вызываемое некоторыми представителями семейства Herpesviridae. Острая форма инфекционного мононуклеоза развивается преимущественно у детей и на уровне иммунного ответа сопровождается увеличением в периферической крови числа циркулирующих наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов. Нормализация иммунологических показателей достигается в течение 4–6 месяцев после выздоровления, что служит индикаторным показателем адекватного функционирования иммунной системы. «Рецепторы смерти» CD95 и DR3 участвуют в инициации апоптоза наивных Т-лимфоцитов, как в норме, так и при остром инфекционном мононуклеозе. Целью работы явилась оценка способности рецепторов CD95 и DR3 инициировать апоптоз наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов у детей с инфекционным мононуклеозом в период реконвалесценции. Материалом для исследования послужили образцы периферической крови детей, ранее перенесших инфекционный мононуклеоз. Забор крови проводили повторно спустя 4–6 месяцев после заболевания. На момент проведения исследования у детей не выявлялись клинические и лабораторные признаки инфекционного мононуклеоза. В качестве группы сравнения выступали дети, которые обследовались нами ранее в период развития у них острого инфекционного мононуклеоза, а также условно здоровые дети. Выделение наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов проводили методом негативной магнитной иммуносепарации. Для специфической стимуляции рецепторов CD95 и DR3 использовали моноклональные антитела. Уровень апоптоза и экспрессию «рецепторов смерти» оценивали методом проточной цитофлуориметрии. Анализировали свежеизолированные клетки, а также клетки, культивируемые с добавлением соответствующих моноклональных антител. Показано, что период выздоровления сопровождался усилением апоптоза свежеизолированных наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов по сравнению с острой фазой инфекционного мононуклеоза. При этом в обеих популяциях наивных Т-лимфоцитов наблюдалось повышение восприимчивости CD95+ клеток к апоптозу. В культуре клеток стимуляция CD95 не приводила к изменению уровня апоптоза наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов. В свежеизолированных наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитах DR3+ клетки были резистентными к апоптозу, а в процессе культивирования их сенситивность изменялась в зависимости от субпопуляционной принадлежности. Так, в культуре наивных CD4+ Т-лимфоцитов DR3 не участвовал в передаче проапоптотического сигнала. В культуре наивных CD8+ Т-лимфоцитов DR3+ клетки усиливали апоптоз клеток, не экспрессирующих этот рецептор. При этом активация DR3 моноклональными антителами в культуре вызывала гибель DR3+ наивных CD8+ Т-лимфоцитов, что закономерно сопровождалось снижением проапоптотической активности этих клеток и приводило к ингибированию апоптоза суммарного пула наивных CD8+ Т-лимфоцитов. Таким образом, функциональная способность рецепторов CD95 и DR3 участвовать в инициации апоптоза наивных Т-лимфоцитов у детей в период реконвалесценции инфекционного мононуклеоза различается и зависит от их принадлежности к наивным CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитам.