Russian Journal of Infection and ImmunityRussian Journal of Infection and ImmunityИнфекция и иммунитет2220-76192313-7398SPb RAACI47910.15789/2220-7619-2017-1-51-60ORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИPHAGOCYTIC ACTIVITY AND BLOOD NEUTROPHILS RESPIRATORY BURST STATE FEATURES AMONGST WIDESPREAD PURULENT PERITONITIS PATIENTS IN THE POSTOPERATIVE PERIOD DYNAMICSОСОБЕННОСТИ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ И СОСТОЯНИЯ РЕСПИРАТОРНОГО ВЗРЫВА НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАСПРОСТРАНЕННЫМ ГНОЙНЫМ ПЕРИТОНИТОМ В ДИНАМИКЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОГО ПЕРИОДАSavchenkoA. A.СавченкоА. А.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor, Head of the Laboratory of Molecular-Cell Physiology and Pathology

д.м.н., профессор, руководитель лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии

GvozdevI. I.ГвоздевИ. И.
Russian Federation

Junior Researcher, Laboratory of Cellular and Molecular Physiology and Pathology

младший научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии

BorisovA. G.БорисовА. Г.
Russian Federation

PhD (Medicine), Leading Researcher, Laboratory of Molecular-Cell Physiology and Pathology

к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии

CherdancevD. V.ЧерданцевД. В.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor, Head of the Department and Clinic of Surgical Diseases named after prof. A.M. Dykhno with a Course of Endoscopy and Endosurgery

д.м.н., профессор, зав. кафедрой и клиникой хирургических болезней им. проф. А.М. Дыхно с курсом эндоскопии и эндохирургии

PervovaO. V.ПервоваО. В.
Russian Federation

PhD, MD (Medicine), Professor of the Department and Clinic of Surgical Diseases named after prof. A.M. Dykhno with a Course of Endoscopy and Endosurgery

д.м.н., профессор кафедры и клиники хирургических болезней им. проф. А.М. Дыхно с курсом эндоскопии и эндохирургии

KudryavcevI. V.КудрявцевИ. В.
Russian Federation

PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory of Immunology, Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg; Senior Researcher, Department of Fundamental Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok; Associate Professor, Department of Immunology, Pavlov First St. Petersburg State Medical University, St. Petersburg, Russian Federation

197376, Russian Federation, St. Petersburg, Akademika Pavlova str., 12, Phone: +7 (812) 234-29-29

к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории общей иммунологии ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург; старший научный сотрудник кафедры фундаментальной медицины ФГАОУ ВПО Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский Государственный медицинскийуниверситет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ, Россия

197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, 12, Тел.: (812) 234-29-29

igorek1981@yandex.ruMoshevA. V.МошевА. В.
Russian Federation

Junior Researcher, Laboratory of Cellular and Molecular Physiology and Pathology

младший научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии

Research Institute of Medical Problems of the North Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-YasenetskyФГБНУ НИИ медицинских проблем Севера ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФResearch Institute of Medical Problems of the NorthФГБНУ НИИ медицинских проблем СевераKrasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-YasenetskyГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФResearch Institute of Experimental Medicine Far Eastern Federal University Pavlov First St. Petersburg State Medical UniversityФГБНУ Институт экспериментальной медицины ФГАОУ ВПО Дальневосточный федеральный университет ФГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова МЗ РФ280320177151602803201728032017Copyright ©; 2017, Savchenko A.A., Gvozdev I.I., Borisov A.G., Cherdancev D.V., Pervova O.V., Kudryavcev I.V., Moshev A.V.Copyright ©; 2017, Савченко А.А., Гвоздев И.И., Борисов А.Г., Черданцев Д.В., Первова О.В., Кудрявцев И.В., Мошев А.В.2017Savchenko A.A., Gvozdev I.I., Borisov A.G., Cherdancev D.V., Pervova O.V., Kudryavcev I.V., Moshev A.V.Савченко А.А., Гвоздев И.И., Борисов А.Г., Черданцев Д.В., Первова О.В., Кудрявцев И.В., Мошев А.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://iimmun.ru/iimm/article/view/479

The research aim was to study the phagocytic activity and the blood neutrophils respiratory burst state amongst the patients with widespread purulent peritonitis (WPP) in the dynamics of the postoperative period. The study was involved patients with acute surgical diseases and injuries of the abdominal organs complicated by WPP. Blood sampling was performed prior to surgery (pre-operative period) and at 7, 14 and 24 day post-operative period. The neutrophil phagocytosis level was determined by flow cytometry using FITC-labeled staphylococcal protein A. There was counted the percentage of fluorescent neutrophils (defined as the phagocytic index — PI) and average of the cell fluorescence (phagocytic number — PN). According to the fluorescence intensity divided phagocytic neutrophils in an active (high PN) and weakly phagocytic (low PN). Condition of the respiratory burst in the neutrophils was examined using a chemiluminescent assay. It was found that patients with WPP in the preoperative period had increased phagocytic activity of the blood neutrophils. The maximum phagocytic activity observed on day 7 of the postoperative period and by 24 days the number of phagocytic cells is reduced to control level whereas phagocytic activity of the cells remains at the preoperative level. In the preoperative period in patients with WPP the amount of active phagocytic blood neutrophils 3.3 times higher than the number of weakly phagocytic cells. By the end of the observation period the number of active and weakly phagocytic neutrophils returning to normal. In the study of the state of respiratory burst in the neutrophils by the WPP patients discovered that the primary synthesis levels of reactive oxygen species (ROS) increases only with 7 days of postoperative period and the induced activity of NADPH-oxidase remains elevated to the end of the observation period. At the same time, the synthesis of secondary ROS in the blood neutrophil of the WPP patients increased already in the preoperative period and remains high until the end of the survey. Using correlation analysis it was found that if healthy people had a competitive relationship between the level of synthesis of primary ROS and the activity of phagocytosis then all detected correlations in the WPP patients characterized by high level of coordination between the respiratory burst and the phagocytic activity of the neutrophils. These relationships are identified in the preoperative period, postoperatively do not exist. It can be assumed that the surgery and the subsequent treatment leads to complete incoordination in the neutrophils the mechanisms of phagocytosis and respiratory burst.

Целью исследования явилось изучение фагоцитарной активности и состояния респираторного взрыва нейтрофилов крови у больных распространенным гнойным перитонитом (РГП) в динамике послеоперационного периода. Обследованы пациенты с острыми хирургическими заболеваниями и травмами органов брюшной полости, осложнившимися РГП. Забор крови производили перед операцией (дооперационный период), а также на 7, 14 и 24 сутки послеоперационного периода. Уровень фагоцитоза нейтрофилов определяли методом проточной цитометрии с помощью FITC-меченного стафилококкового белка А. Подсчитывали процент флуоресцирующих нейтрофилов (определяли как фагоцитарный индекс — ФИ) и средний уровень флуоресценции клеток (фагоцитарное число — ФЧ). По интенсивности флуоресценции разделяли нейтрофилы на активно фагоцитирующие (с высоким уровнем ФЧ) и слабо фагоцитирующие (с низким уровнем ФЧ). Состояние респираторного взрыва нейтрофильных гранулоцитов исследовали с помощью хемилюминесцентного анализа. Установлено, что у больных РГП уже в дооперационном периоде повышена фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов крови. Максимум фагоцитарной активности наблюдается на 7 сутки послеоперационного периода и к 24 суткам количество фагоцитирующих клеток снижается до контрольного уровня, тогда как фагоцитарная активность клеток остается на дооперационном уровне. В дооперационном периоде у больных РГП количество активно фагоцитирующих нейтрофилов крови в 3,3 раза превышает число слабо фагоцитирующих клеток. К концу периода наблюдения количество активно и слабо фагоцитирующих нейтрофилов нормализуется. При исследовании состояния респираторного взрыва в нейтрофилах больных РГП обнаружено, что уровень синтеза первичных активных форм кислорода (АФК) возрастает только с 7 суток послеоперационного периода и индуцированная активность НАДФН-оксидазы остается повышенной к концу периода наблюдения. В то же время, синтез вторичных АФК в нейтрофилах крови больных РГП повышен уже в дооперационном периоде и остается высоким до конца обследования. С помощью корреляционного анализа установлено, что, если у здоровых людей выявляются конкурентные взаимосвязи между уровнем синтеза первичных АФК и активностью фагоцитоза, то все обнаруженные корреляционные связи у больных РГП характеризуют высокий уровень скоординированности между респираторным взрывом и фагоцитарной активностью нейтрофилов. Указанные взаимосвязи выявляются только в дооперационном периоде, в послеоперационном периоде — отсутствуют. Можно предположить, что оперативное вмешательство и последующее лечение приводят к полной дискоординации в нейтрофилах крови механизмов фагоцитоза и респираторного взрыва.

peritonitisdynamics of the postoperative periodneutrophilsphagocytosisrespiratory burstreactive oxygen speciesперитонитдинамика послеоперационного периоданейтрофилыфагоцитозреспираторный взрывактивные формы кислорода1. Борисов А.Г., Савченко А.А., Смирнова С.В. К вопросу о классификации нарушений функционального состояния иммунной системы // Сибирский медицинский журнал. 2008. Т. 23, № 3 (вып. 1). С. 13–18. [Borisov A.G., Savchenko A.A., Smirnova S.V. On the classification of the functional state of the immune system disorders. Sibirskii meditsinskii zhurnal = Siberian Medical Journal, vol. 23, no. 3 (iss. 1), pp. 13–18. (In Russ.)]2. Мазуров Д.В., Пинегин Б.В. Применение проточной цитометрии для оценки поглотительной и бактерицидной функций гранулоцитов и моноцитов периферической крови // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999. № 9. С. 154–156. [Mazurov D.V., Pinegin B.V. Application of flow cytometry for evaluating the absorbency and the antibacterial functions of granulocytes and monocytes of peripheral blood. Allergiya, astma i klinicheskaya immunologiya = Allergy, Asthma and Clinical Immunology, 1999, no. 9, pp. 154–156. (In Russ.)]3. Савченко А.А., Борисов А.Г., Здзитовецкий Д.Э., Кудрявцев И.В. Состояние клеточного и гуморального иммунитета в зависимости от исхода распространенного гнойного перитонита // Инфекция и иммунитет. 2015. Т. 5, № 1. С. 63–70. [Savchenko A.A., Borisov A.G., Zdzitoveckij D.E., Kudryavtsev I.V. The cellular and humoral immunity state depending on the outcome of a widespread purulent peritonitis. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2015, vol. 5, no. 1, pp. 63–70. doi: 10.15789/2220-7619-2015-1-63-70 (In Russ.)]4. Савченко А.А., Здзитовецкий Д.Э., Борисов А.Г. Иммунометаболические нарушения при распространенном гнойном перитоните. Новосибирск: Наука, 2013. 142 с. [Savchenko A.A., Zdzitoveckij D.Je., Borisov A.G. Immunometabolicheskie narusheniya pri rasprostranennom gnoinom peritonite [The immune and metabolic disorders by the widespread purulent peritonitis]. Novosibirsk: Nauka, 2013. 142 p.]5. Савченко А.А., Здзитовецкий Д.Э., Борисов А.Г., Лузан Н.А. Хемилюминесцентная активность нейтрофильных гранулоцитов и уровни концентрации цитокинов у больных распространенным гнойным перитонитом // Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12, № 1–2. С. 115–119. [Savchenko A.A., Zdzitoveckij D.Je., Borisov A.G., Luzan N.A. The chemiluminescent activity of neutrophils and concentration levels of cytokines in patients with widespread purulent peritonitis. Tsitokiny i vospalenie = Cytokines and Inflammation, 2013, vol. 12, no. 1–2, pp. 115–119. (In Russ.)]6. Шкапова Е.А., Куртасова Л.М., Савченко А.А. Показатели люцигенин- и люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови у больных раком почки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 149. № 2. С. 201–203. [Shkapova E.A., Kurtasova L.M., Savchenko A.A. The indicators of the lucigenin- and luminol- dependent chemiluminescence of blood neutrophils by the patients with kidney cancer. Byulleten’ eksperimental’noi biologii i meditsiny = Bulletin of Experimental Biology and Medicine, vol. 149, no. 2, pp. 201–203. (In Russ.)]7. Allen R.C. Neutrophil leukocyte: combustive microbicidal action and chemiluminescence. J. Immunol. Res., vol. 2015: 794072, 11 p. doi: 10.1155/2015/7940728. Arnardottir H.H., Freysdottir J., Hardardottir I. Dietary fish oil increases the proportion of a specific neutrophil subpopulation in blood and total neutrophils in peritoneum of mice following endotoxin-induced inflammation. J. Nutr. Biochem., 2013, vol. 24, no. 1, pp. 248–255. doi: 10.1016/j.jnutbio.2012.05.0129. Bilen Y., Cankaya E., Bilen N., Keles M., Erdem F., Uyanik A., Hamidullah Uyanik M. Peritonitis incidence was correlated with duration of peritoneal dialysis rather than leptin or neutrophil to lymphocyte (n/l) ratio in peritoneal dialysis patients. Eurasian J. Med., 2014, vol. 46, no. 3, pp. 145–150. doi: 10.5152/eajm.2014.4510. Dupont A., Dury S., Gafa V., Lebargy F., Deslée G., Guenounou M., Antonicelli F., Le Naour R. Impairment of neutrophil reactivity to elastin peptides in COPD. Thorax, 2013, vol. 68, no. 5, pp. 421–428. doi: 10.1136/thoraxjnl-2012-20183311. Grandel U., Heygster D., Sibelius U., Fink L., Sigel S., Seeger W., Grimminger F., Hattar K. Amplification of lipopolysaccharideinduced cytokine synthesis in non-small cell lung cancer/neutrophil cocultures. Mol. Cancer Res., 2009, vol. 7, no. 10, pp. 1729– 1735. doi: 10.1158/1541-7786.MCR-09-004812. Guedes-Martins L., Silva E., Gaio A.R., Saraiva J., Soares A.I., Afonso J., Macedo F., Almeida H. Fetal-maternal interface impedance parallels local NADPH oxidase related superoxide production. Redox Biol., 2015, vol. 5, pp. 114–123. doi: 10.1016/j.redox.2015.04.00713. Matsushima H., Geng S., Lu R., Okamoto T., Yao Y., Mayuzumi N., Kotol P.F., Chojnacki B.J., Miyazaki T., Gallo R.L., Takashima A. Neutrophil differentiation into a unique hybrid population exhibiting dual phenotype and functionality of neutrophils and dendritic cells. Blood, 2013, vol. 121, no. 10, pp. 1677–1689. doi: 10.1182/blood-2012-07-44518914. Mikami S., Aiboshi J., Kobayashi T., Kojima M., Morishita K., Otomo Y. Discrete roles of intracellular phospholipases A2 in human neutrophil cytotoxicity. J. Trauma Acute Care Surg., 2015, vol. 79, no. 2, pp. 238–246. doi: 10.1097/TA.000000000000073015. Nayak N.M., Madhumitha S., Annigeri R.A., Venkataraman R., Balasubramaian S., Seshadri R., Vadamalai V., Rao B.S., Kowdle P.C., Ramakrishnan N., Mani M.K. Clinical utility of urine neutrophil gelatinase-associated lipocalin measured at admission to predict outcomes in heterogeneous population of critically ill patients. Indian J. Nephrol., 2016, vol. 26, no. 2, pp. 119–124. doi: 10.4103/0971-4065.15780016. Nemzek J.A., Fry C., Moore B.B. Adoptive transfer of fibrocytes enhances splenic T-cell numbers and survival in septic peritonitis. Shock, 2013, vol. 40, no. 2, pp. 106–114. doi: 10.1097/SHK.0b013e31829c3c6817. Sagiv J.Y., Michaeli J., Assi S., Mishalian I., Kisos H., Levy L., Damti P., Lumbroso D., Polyansky L., Sionov R.V., Ariel A., Hovav A.H., Henke E., Fridlender Z.G., Granot Z. Phenotypic diversity and plasticity in circulating neutrophil subpopulations in cancer. Cell Rep., 2015, vol. 10, no. 4, pp. 562–573. doi: 10.1016/j.celrep.2014.12.03918. Saroni Arwa P., Zeraik M.L., Ximenes V.F., Da Fonseca L.M., Bolzani Vda S., Siqueira Silva D.H. Redox-active biflavonoids from Garcinia brasiliensis as inhibitors of neutrophil oxidative burst and human erythrocyte membrane damage. J. Ethnopharmacol., 2015, vol. 174, pp. 410–418. doi: 10.1016/j.jep.2015.08.04119. Watzlawick R., Kenngott E.E., Liu F.D., Schwab J.M., Hamann A. Anti-inflammatory effects of IL-27 in zymosan-induced peritonitis: inhibition of neutrophil recruitment partially explained by impaired mobilization from bone marrow and reduced chemokine levels. PLoS One, 2015, vol. 11, no. 10 (9), e0137651. doi: 10.1371/journal.pone.013765120. Yang T., Peleli M., Zollbrecht C., Giulietti A., Terrando N., Lundberg J.O., Weitzberg E., Carlström M. Inorganic nitrite attenuates NADPH oxidase-derived superoxide generation in activated macrophages via a nitric oxide-dependent mechanism. Free Radic. Biol. Med., 2015, vol. 83, pp. 159–166. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.02.01621. Zonneveld R., Molema G., Plotz F.B. Analyzing neutrophil morphology, mechanics, and motility in sepsis: options and challenges for novel bedside technologies. Crit. Care Med., 2016, vol. 44, no. 1, pp. 218–228. doi: 10.1097/CCM.0000000000001266