Russian Journal of Infection and ImmunityRussian Journal of Infection and ImmunityИнфекция и иммунитет2220-76192313-7398SPb RAACI1777610.15789/2220-7619-MFP-17776SHORT COMMUNICATIONSКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯShort CommunicationMethod for phenotypic identification of Acinetobacter seifertii bacteriaМетод фенотипической идентификации бактерий Acinetobacter seifertiiSivolodskiiE. P.СиволодскийЕ. П.
Russian Federation

DSc (Medicine), Professor of the Department of Microbiology

д.м.н., профессор кафедры микробиологии

lykraeva@yandex.ruKraevaL. A.КраеваЛ. А.
Russian Federation

DSc (Medicine), Head of the Laboratory of Medical Bacteriology, St. Petersburg Pasteur Institute; Professor of the Department of Microbiology, Military Medical Academy named after S.M. Kirov

д.м.н., зав. лабораторией медицинской бактериологии ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера; профессор кафедры микробиологии ФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

lykraeva@yandex.ruMelnikovaE. V.МельниковаЕ. В.
Russian Federation

Head of the Laboratory of Microbiology, Central Clinical Diagnostic Laboratory

зав. лабораторией микробиологии Центральной клинико-диагностической лаборатории

lykraeva@yandex.ruMilitary Medical Academy named after S.M. KirovФГБВОУ ВО Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФSt. Petersburg Pasteur InstituteФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера20012025080720251523833881409202421122024Copyright ©; 2025, Sivolodskii E.P., Kraeva L.A., Melnikova E.V.Copyright ©; 2025, Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Мельникова Е.В.2025Sivolodskii E.P., Kraeva L.A., Melnikova E.V.Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Мельникова Е.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://iimmun.ru/iimm/article/view/17776

Abstract. The aim of the study is to increase the accuracy of Acinetobacter seifertii species identification by the phenotypic method. Study objects: 5 strains of A. seifertii (3 isolated in the microbiological laboratory at the Military Medical Academy, 2 strains obtained from the Pasteur Institute (St. Petersburg)). Clinical strains of the A. baumannii group (Ab group) isolated at the Military Medical Academy in 2023–2024 were also studied: A. baumannii (n = 152), of which 37 strains of the tryptophandestruens biovar, A. nosocomialis (n = 12), A. pittii (n = 6), 3 strains of A. calcoaceticus from the Neva River. The type of such strains was determined by MALDI-ToF mass spectrometry. The belonging of the strains to the Ab group was established by taxonomic tests. The biovar A. baumannii bv. tryptophandestruens was determined by a chromogenic reaction on sodium benzoate-containing nutrient medium. Urease of rapid activity was detected by a micro-volumetric method assessed 3 hours later. Utilization of D-xylose as the only carbon source was determined on a nutrient medium containing (g/l): D-xylose 2.0; NH4CI 5.0; NH4NO3 1.0; Na2SO4 2.0; K2HPO4 3.0; KH2PO4 1.0; MgSO4 0.1; bromothymol blue 1.6% aqueous solution 4 ml; bacteriological agar 15.0; distilled water 1 L; pH 7.2±0.2; sterilization at 112°C 20 min. A pure bacterial culture was studied, in which signs of the Ab group and growth on a sodium acetate-containing nutrient medium were previously detected (control of no auxotrophy). The agar bacteria culture was suspended in 0.1 ml of 0.85% sodium chloride solution, one loop of bacterial suspension was sown with a stroke on a nutrient medium with D-xylose and a medium without D-xylose (control), incubated aerobically at 30°C 24–48 hours. The absence of bacterial growth on a medium with D-xylose and a medium without D-xylose in the presence of their growth on a nutrient medium with sodium acetate indicates belonging to the species A. seifertii. Studies showed that all A. seifertii strains do not utilize D-xylose, and all strains of other species of the Ab group utilize D-xylose. A. seifertii bacteria do not utilize L-arabinose, however, 29.6±3.7% of A. baumannii strains do not utilize L-arabinose, including all 37 strains of the tryptophandestruens biovar, which determines the unreliability of this test for the identification of A. seifertii. Most strains of A. seifertii (4 out of 5) have a urease of rapid activity, which suggests their proximity to the species A. nosocomialis. A method has been developed for identification of A. seifertii bacteria based on a set of phenotypic features of Ab group bacteria with a test for D-xylose utilization. It has been established that the use of the D-xylose utilization test in conjunction with the detection of rapid urease activity allows to accurately identify the bacteria A. seifertii and A. nosocomialis among other species of the Ab group.

Цель исследования: повысить точность видовой идентификации Acinetobacter seifertii фенотипическим методом. Объекты исследования: 5 штаммов A. seifertii (3 выделены в микробиологической лаборатории Военно-медицинской академии, 2 штамма получены из Института имени Пастера (Санкт-Петербург)). Также изучали клинические штаммы группы A. baumannii (группы Ав), выделенные в Военно-медицинской академии в 2023–2024 гг.: A. baumannii (n = 152), из них 37 штаммов биовара tryptophandestruens, A. nosocomialis (n = 12), A. pittii (n = 6), 3 штамма A. calcoaceticus из реки Невы. Вид указанных штаммов определяли методом MALDI-ToF масс-спектрометрии. Принадлежность штаммов к группе Ав устанавливали таксономическими тестами. Биовар A. baumannii bv. tryptophandestruens определяли по хромогенной реакции на питательной среде с бензоатом натрия. Уреазу быстрой активности выявляли микрообъемным методом с учетом через 3 часа. Утилизацию D-ксилозы в качестве единственного источника углерода определяли на питательной среде, содержащей (г/л): D-ксилоза 2,0; NH4CI 5,0; NH4NO3 1,0; Na2SO4 2,0; K2HPO4 3,0; KH2PO4 1,0; MgSO4 0,1; бромтимоловый синий 1,6% водный раствор 4 мл; агар бактериологический 15,0; вода дистиллированная 1 л; рН 7,2±0,2; стерилизация при 112°С 20 мин. Исследовали чистую культуру бактерий, у которой предварительно выявлены признаки группы Ав и рост на питательной среде с ацетатом натрия (контроль отсутствия ауксотрофности). Агаровую культуру бактерий суспендировали в 0,1 мл 0,85% раствора хлорида натрия, засевали одну петлю взвеси бактерий штрихом на питательную среду с D-ксилозой и среду без D-ксилозы (контроль), инкубировали аэробно при 30°С 24–48 часов. Отсутствие роста бактерий на среде с D-ксилозой и среде без D-ксилозы при наличии их роста на питательной среде с ацетатом натрия указывает на принадлежность к виду A. seifertii. Исследования показали: все штаммы A. seifertii не утилизируют D-ксилозу, а все штаммы других видов группы Ав утилизируют D-ксилозу. Бактерии A. seifertii не утилизируют L-арабинозу, однако 29,6±3,7% штаммов A. baumannii не утилизируют L-арабинозу, в том числе все 37 штаммов биовара tryptophandestruens, что определяет ненадежность этого теста для идентификации A. seifertii. Большинство штаммов A. seifertii (4 из 5) имеют уреазу быстрой активности, что указывает на их близость к виду A. nosocomialis. Разработан метод идентификации бактерий A. seifertii по совокупности фенотипических признаков бактерий группы Ав с тестом на утилизацию D-ксилозы. Установлено, что использование теста на утилизацию D-ксилозы совместно с выявлением уреазы быстрой активности позволяет точно идентифицировать бактерии A. seifertii и A. nosocomialis среди других видов группы Ав.

Acietobacter seifertii identificacionAcinetobacter groupD-xylose utilizationL-arabinoseAcinetobacter nosocomialisbacterial ureaseидентификация Acinetobacter seifertiiгруппа Acinetobacter baumanniiутилизация D-ксилозыL-арабинозаAcinetobacter nosocomialisуреаза бактерийСиволодский Е.П., Зуева Е.В. Способ фенотипической идентификации бактерий Acinetobacter nosocomialis // Инфекция и иммунитет. 2021. Т. 11, № 3. С. 591–596. [Sivolodskii E.P., Zueva E.V. Menhod for phenotypic identification of Acinetobacter nosocomialis bacteria. Infektsiya i immunitet = Russian of Journal of Infection and Immunity, 2021, vol. 11, no. 3, pp. 591–596. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-MFP-1422Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Мельникова Е.В. Горелова Г.В. Метод идентификации Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens и его суббиоваров А и В // Инфекция и иммунитет. 2023. Т. 13, № 3. С. 591–595. [Sivolodskii E.P., Kraeva L.A., Melnikova E.V., Gorelova G.V. Method of Identification of Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens and its subbiovars A and B. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2023, vol. 13, no. 5, pp. 591–595. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-MFI-9379Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Старкова Д.А., Михайлов Н.В., Горелова Г.В. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens выделенный из клинического материала // Инфекция и иммунитет. 2021. Т. 11, № 5. С. 965–972. [Sivolodskii E.P., Kraeva L.A., Starkova D.A., Mikhailov N.V., Gorelova G.V. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens bv. nov. isolated from clinical simplex. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2021, vol. 11, no. 5, pp. 965–972. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-ABB-1676Cerezales C., Xantopoulou K., Ertel J., Bustamante Z., Seifert H., Gallego L., Higgins P.G. Identification of Acinetobacter seifertii isolated from Bolivian hospitals. J. Med. Microbiol., 2018, vol. 67, no. 6, pp. 834–837. doi: 10.1099/jmm.0.00075Cosgaya C., Mari-Almirall M., Van Assche A., Fernandez-Orth D., Mosqueda N., Telli M., Huys G., Higgins P.G., Seifertii H., Lievens D. Roca I., Vila J. Acinetobacter dijkshoorniae sp. nov., a member of the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex mainly recovered from clinical samples in different countries. Int. J. Sys. Evol. Microbiol., 2016, vol. 66, no. 10, pp. 4105–4111. doi: 10.1099.0.001318Kishii K., Kikuchi K., Tomido J.,Kawamura Y., Yoshido A., Okuzumi K., Moriva K. The first cases of human bacteremia caused by Acinetobacter seifertii in Japan. J. Infect.Chemother., 2015, vol. 22, no. 5, pp. 342–345. doi: 10.1016/j.jiac.2015.12.002Li L.H., Yang Y.S., Sun J.R., Huang T.W., Huang W.C., Chen F.J., Wang Y.C., Kuo T.H., Kuo S.C., Chen T.L., Lee Y.T.; ACTION study group. Clinical and molecular characterization of Acinetobacter seifertii in Taiwan. J. Antimicrob. Chemother., 2021, vol. 76, no. 2, pp. 312–321. doi: 10.1093/jac/dkaa432Nemec A., Krizova I., Maixnerova M., Sedo O., Brisse S., Higgins P.G., Acinetobacter seifertii sp. nov., a member of the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex, isolated from human clinical specccimens. Int. J. Sys. Evol. Microbiol., 2015, vol. 65, no. 3, pp. 934–942. doi: 10.1099/iijs.0.000043