Trichosporon asahii, a fungus found in nature and human microbiota, has recently emerged as the most common cause of disseminated and deep-seated trichosporonosis, particularly in immunocompromised patients. Biofilm formation, one of the important virulence factors of T. asahii, facilitates its colonisation and proliferation, providing the fungus with antifungal and environmental stress’s resistance. In this study, we aimed to develop a reproducible T. asahii biofilm model for our future research by optimising the inoculum concentration, adhesion-time, biofilm maturation-time, static and shaking parameters. Materials and methods. We included two clinical isolates obtained from urine samples and a reference strain in the study. For each strain, we applied 36 different experimental parameters, including, 105, 106 and 107 CFU/mL inoculum consentrations, 60-, 90-, and 120-minutes adhesion-times, 48- and 72-hours maturation-times, and static versus shaking. We determined the biofilm formation of fungus using the most commonly used crystal violet method. We determined standard deviation values with three replicates within each experiment, and we compared all the graphs obtained by repeating these experiments twice. Results. After applying 36 different experimental parameter combinations, we determined the most optimised and reproducible parameters as 107 CFU/mL inoculum concentration, 120-minute adhesion-time, 72-hour maturation-time and static. Conclusion. In optimisation studies conducted worldwide on this subject, it has been reported that biofilms formation varies in terms of quantity and duration across different countries, but there isn’t any optimisation study in Turkey. We believe that the optimisation conditions we have firstly identified in our country will shed light on our future research and other studies to be conducted in the future.
Trichosporon asahii — грибок, встречающийся в природе и микробиоте человека, недавно стал наиболее распространенной причиной диссеминированного глубокого трихоспороноза, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Образование биопленки, один из важных факторов вирулентности T. asahii, облегчает его колонизацию и распространение, обеспечивая грибку устойчивость к противогрибковым препаратам и внешнему стрессу. В настоящем исследовании мы попытались разработать воспроизводимую модель биопленки T. asahii для последующих исследований путем оптимизации концентрации инокулята, времени адгезии, времени созревания биопленки, статических параметров и параметров встряхивания. Материалы и методы. В исследование были включены два клинических изолята, полученных из образцов мочи, и эталонный штамм. Для каждого штамма применялись 36 различных экспериментальных параметра, включая концентрации инокулята 105, 106 и 107 КОЕ/мл, время адгезии 60, 90 и 120 минут, время созревания 48 и 72 часа и статику против встряхивания. Мы определили образование биопленки грибка, используя наиболее часто используемый метод окраски кристаллическим фиолетовым. Были определены значения стандартного отклонения с тремя повторами каждого эксперимента со сравнением всех графиков, полученных при двухкратном повторе проведенных экспериментов. Результаты. После применения 36 различных комбинаций экспериментальных параметров были определены наиболее оптимизированные и воспроизводимые из них, такие как концентрация инокулята 107 КОЕ/мл, время адгезии 120 минут, время созревания 72 часа и статика. Заключение. В исследованиях по оптимизации, описанных в литературе, сообщалось, что образование биопленок различается по количеству и продолжительности в разных зарубежных лабораториях, но в Турции подобных исследований по оптимизации не описано. Мы считаем, что условия оптимизации, которые мы впервые определили в нашей стране, будут востребованы для последующих исследований.