Immune system indicators in patients with acute opisthorchiasis

Svetlana A. Grigorieva; Григорьева Светлана Андреевна; K. B. Stepanova; Степанова К. Б.; T. F. Stepanova; Степанова Т. Ф.; L. V. Kurlaeva; Курлаева Л. В.; E. I. Shved; Швед Е. И.; Yu. V. Chirko; Чирко Ю. В.

doi:10.15789/2220-7619-ISI-18076

Immune system indicators in patients with acute opisthorchiasis

Authors: Grigorieva S.A.¹, Stepanova K.B.¹, Stepanova T.F.¹, Kurlaeva L.V.¹, Shved E.I.¹, Chirko Y.V.¹
Affiliations:
1. Tyumen Region Infection Pathology Research Institute
Issue: Vol 16, No 3 (2026)
Pages: 584-590
Section: SHORT COMMUNICATIONS
Submitted: 25.11.2025
Accepted: 20.03.2026
Published: 21.07.2026
URL: https://iimmun.ru/iimm/article/view/18076
DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-ISI-18076
ID: 18076

Cite item

Full Text

Abstract
Full Text
About the authors
References
Supplementary files
Statistics

Abstract

The Ob-Irtyshsky focus, which includes the Tyumen region is largest among Opisthorchis felineus invasion sites. The high intensity of invasion spreading in the outbreak underlies a high risk of infection often occurring with acute stage for the residents of the Tyumen region. The aim of this study was to evaluate the immunological parameters in patients with acute opisthorchiasis compared to healthy subjects. Ten patients at the clinic of the Tyumen Research Institute of Regional Infectious Pathology were examined with a diagnosis of acute opisthorchiasis. Immunological examination included lymphocyte phenotyping by flow cytometry. The concentration of immunoglobulins M, G, A, and E and cytokines IFNγ, IL-4, IL-8, IL-10 in blood serum was quantitated by enzyme immunoassay. Neutrophil absorbance was investigated in latex particle test (d = 1 μm). Neutrophil myeloperoxidase enzyme activity was measured spectrophotometrically, concentration of circulating immune complexes — by precipitation with PEG-6000 solution. In patients with acute opisthorchiasis, increased count of leukocytes, eosinophils, monocytes was detected; increased neutrophil scavenging and enzymatic activity; increased absolute number of CD3⁺ cells, absolute number of T-lymphocytes with CD3⁺HLA-DR⁺ marker, relative and absolute number of CD4⁺ cells were found as well. The concentration of total immunoglobulins G, A, M as well as circulating immune complexes and pro-inflammatory cytokine IL-8 were increased. A positive correlation between IL-8 levels and count of eosinophils, monocytes and percentage of natural killers was revealed in patients but not in control group. Patients have decreased levels of IFNγ and the cytokine IL-10. The level of IL-4 did not differ between patients with opisthorchiasis vs. control subjects. The correlation between IL-4 level and circulating immune complexes, count of eosinophils and natural killer cells was found in patients but not in control group. Thus, patients with acute opisthorchiasis were characterized by activated innate immune response as well as cellular and humoral arms of the adaptive immune response.

Keywords

acute stage of opisthorchiasis, Opisthorchis felineus, eosinophils, lymphocyte populations, innate immunity, adaptive immune response

Full Text

Введение

Среди основных факторов, влияющих на здоровье человека, гельминтозы занимают четвертое место [8]. Наиболее крупная эндемичная территория с чрезвычайно напряженной эпидемиологической обстановкой по инвазии Opisthorchis felineus находится в Западной Сибири, где расположен крупнейший Обь-Иртышский очаг инвазии [12]. Тюменская область входит в число регионов с неблагополучной эпидемиологической обстановкой [9]. Высокая интенсивность распространения описторхозной инвазии в природном очаге определяет для большинства жителей эндемичных регионов высокий риск заражения паразитом [7]. Первичное заражение возбудителем описторхоза людей, прибывших из эпидемиологически благополучных регионов, часто протекает с острой стадией, при которой иммунологический фактор играет ведущую роль. Острый описторхоз (ОО) — ранняя фаза заболевания, когда личинки (метацеркарии) паразита проникают в гепатобилиарную систему и поджелудочную железу. Спустя 2–3 недели после употребления в пищу необезвреженной рыбы появляются клинические синдромы, проявляющиеся многообразной симптоматикой, которые соответствуют признакам общеаллергической реакции организма на внедрение антигена паразита [11]. Острая стадия заболевания продолжается до двух, реже — трех месяцев, после чего клинические симптомы постепенно исчезают, и болезнь переходит в хроническую стадию [1, 6].

Актуальность проведенного исследования продиктована неблагоприятной ситуацией по описторхозу, что диктует необходимость нахождения новых средств борьбы с этой инвазией, изыскания новых путей лечения больных. Для этого необходимо определение всех параметров болезни, в том числе более глубокое изучение показателей иммунной системы на всех стадиях инвазионного процесса. Найденные литературные данные исследований иммунного статуса у больных ОО недостаточно полно отражают сложный процесс отношений в системе «хозяин–паразит». Нами была поставлена задача провести комплексное исследование иммунной системы пациентов, путем изучения врожденного, адаптивного (клеточного и гуморального звеньев) иммунного ответа, цитокинового баланса при инвазионном процессе в острой стадией болезни.

Цель исследования: изучить иммунологические показатели в острую стадию инвазионного процесса, для более полной характеристики иммунного ответа при описторхозе.

Материалы и методы

Было обследовано 10 пациентов клиники Тюменского научно-исследовательского института краевой инфекционной патологии с диагнозом «Острый описторхоз», поставленным на основании: эпидемиологического анамнеза (употребления недостаточно обезвреженной рыбы карповых пород); клинической симптоматики (лихорадочного, астенического, гепатобилиарного синдромов); лабораторных показателей (лейкоцитоз, эозинофилия, положительный ИФА на специфические IgM к Opisthorchis felineus) [3]. Все пациенты дали информированное согласие на участие в этом исследовании. Проведение исследования одобрено этическим комитетом ФБУН «Тюменский научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии» Роспотребнадзора (протокол № 5 от 31.10.2024 г.). Медиана возраста пациентов — 40 (32,8–46,3) лет. В контрольную группу (КГ) вошли здоровые люди города Тюмени, сопоставимые по возрасту и полу. Иммунологическое обследование включало исследование фенотипа лимфоцитов методом проточной цитометрии: Т-лимфоциты (CD3⁺/CD19^–/CD16^–+56^–/CD45⁺), Т-хелперы (CD3⁺/CD4⁺CD45⁺), Т-цитотоксические (CD3⁺/CD8⁺/CD45⁺), NK-клетки (CD3^–/CD16/56⁺/CD45⁺), NKT-клетки (CD3⁺/CD16/56⁺/CD45⁺), В-лимфоциты (CD3^–/CD19⁺/CD45⁺), активированные Т-лимфоциты (CD3⁺/HLA-DR⁺/CD45⁺). Абсолютные значения были получены по двухплатформенной технологии с использованием результатов гематологического анализа. Концентрацию иммуноглобулинов М, G, А и E в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с помощью коммерческих наборов «Иммуноскрин-G,M,A-ИФА-БЕСТ» и «IgE-общий-ИФА-БЕСТ» (Вектор-Бест, Россия). Концентрацию цитокинов (IFNγ, IL-4, IL-8, IL-10) определяли иммуноферментным методом с помощью коммерческих наборов «Гамма-интерферон-ИФА-БЕСТ», «Интерлейкин-4-ИФА-БЕСТ», «Интерлейкин-8-ИФА-БЕСТ», «Интерлейкин-10-ИФА-БЕСТ» (Вектор-Бест, Россия). Исследовалась поглотительная способность нейтрофилов (фагоцитарная активность нейтрофилов — ФАН) в тесте с частицами латекса (d = 1 мкм) (ООО «ДИАЭМ», Россия). Подсчитывали 200 нейтрофилов, среди них вычисляли процент нейтрофилов, имеющих поглощенные частицы [2]. Активность фермента миелопероксидазы (МП) нейтрофилов определяли спектрофотометрическим методом [10]. Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли методом преципитации раствором ПЭГ-6000, результат оценивали на спектрофотометре. Статистическая обработка результатов исследования выполнена с использованием пакета программ Statistics Kingdom (https://www.statskingdom.com). Оценка значимости различий между группами проводилась с помощью непараметрического критерия U Манна–Уитни. Количественные показатели представлены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (Q₂₅–Q₇₅). В статье представлены достоверно различающиеся показатели (р < 0,05).

Результаты

Показатели иммунного ответа пациентов с ОО значительно изменяются. Количество лейкоцитов у пациентов с ОО выше на 103% по сравнению с контрольной группой. У больных выше в 14 раз относительное и в 8 раз — абсолютное количество эозинофилов против лиц контрольной группы. Относительное количество моноцитов у пациентов с ОО ниже на 40%, а абсолютное выше на 53% по сравнению с показателями в КГ. У пациентов с ОО относительное количество нейтрофилов ниже на 41%, а абсолютное выше на 10%, чем у лиц группы сравнения. Активность фермента МП нейтрофилов выше в 3 раза у пациентов с ОО против лиц КГ. Поглотительная активность нейтрофилов выше на 22% у больных по сравнению со здоровыми (табл. 1). NK-клетки у пациентов с ОО не отличается от КГ.

Таблица 1. Некоторые показатели врожденного иммунного ответа пациентов с ОО по сравнению с контрольной группой

Table 1. Some indicators of the innate immune response in patients with OO compared to the control group

Показатель, единица измерения Indicator, unit of measurement	Контрольная группа Control group n = 30	Пациенты с острым описторхозом Patients with acute opisthorchiasis n = 10	Сравнение групп, p Comparison of groups, р
Лейкоциты, кл/мкл Leukocytes, cells/μL	6055 (5300–6600)	12 280 (8825–14 500)	0,000002 (U-тест)
Эозинофилы, % Eosinophils, %	2,6 (1,1–3,0)	36 (21–61)	0,000002 (U-тест)
Эозинофилы, кл/мкл Eosinophils, cells/μL	151 (73–196)	4162 (2029–8810)	0,000002 (U-тест)
Моноциты, % Monocytes, %	5 (4–6)	3 (2,1–3,8)	0,019 (U-тест)
Моноциты, кл/мкл Monocytes, cells/μL	282 (228–352)	430 (336–504)	0,020 (U-тест)
Нейтрофилы, % Neutrophils, %	57 (53–63)	34 (17,5–50,75)	0,0008 (U-тест)
Нейтрофилы, кл/мкл Neutrophils, cells/μL	3515 (3036–3893)	3831 (2828–4196)	0,06 (U-тест)
Миелопероксидаза, у.е. Myeloperoxidase, c.u.	261 (141–450)	766 (750–768)	0,0003 (U-тест)
ФАН, % PAN, %	74 (66–80)	90,5 (83–96,75)	0,004 (U-тест)
CD3^–CD16⁺CD56⁺, %	3 (1,6–5,0)	3,75 (1,8–5,3)	0,5092 (U-тест)
CD3^–CD16⁺CD56⁺, кл/мкл CD3^–CD16⁺CD56⁺, cells/μL	274 (195–389)	327 (186–405)	0,7575 (U-тест)

Показатели адаптивного иммунного ответа характеризуются следующими изменениями: относительное количество лимфоцитов ниже на 27%, а абсолютное количество лимфоцитов выше на 23% у пациентов с ОО по сравнению с КГ. Изменяется содержание популяций лимфоцитов — абсолютное количество Т-лимфоцитов (CD3⁺) выше на 30% у больных по сравнению со здоровыми, абсолютное количество B-лимфоцитов (CD19⁺) выше на 38%, чем у лиц группы сравнения. Выявлены изменения в субпопуляционном составе Т-лимфоцитов у больных по сравнению со здоровыми — относительное количество Т-хелперов (CD4⁺) выше на 14%, абсолютное выше на 38,4%; количество цитотоксических Т-лимфоцитов у пациентов с ОО не отличается от КГ. В результате повышенного количества Т-хелперов соотношение CD4/CD8 у пациентов с ОО выше на 30% по сравнению с КГ (табл. 2).

Таблица 2. Показатели клеточного звена адаптивного иммунного ответа пациентов с ОО по сравнению с контрольной группой

Table 2. Indicators of the cellular component of the adaptive immune response in patients with acute opisthorchiasis compared to the control group

Показатель, единица измерения Indicator, unit of measurement	Контрольная группа Control group n = 30	Пациенты с острым описторхозом Patients with acute opisthorchiasis n = 10	Сравнение групп, p Comparison of groups, р
Лимфоциты, % Lymphocytes, %	34 (31–37)	24,5 (15,5–28)	0,00004 (U-тест)
Лимфоциты, кл/мкл Lymphocytes, cells/μL	2046 (1692–2211)	2521 (2142–2853)	0,004 (U-тест)
CD3, кл/мкл CD3, cells/μL	1411 (1300–1725)	1842 (1664–1991)	0,001 (U-тест)
CD3⁺CD4⁺, %	43 (39–48)	48,5 (47–54)	0,0002 (U-тест)
CD3⁺CD4⁺, кл/мкл CD3⁺CD4⁺, cells/μL	875 (704–996)	1211 (1112–1431)	0,0002 (U-тест)
CD3⁺CD8⁺, %	28 (23–33)	23,5(21,5–25)	0,06849 (U-тест)
CD3⁺CD8 ⁺, кл/мкл CD3⁺CD8⁺, cells/μL	570 (424–718)	596 (510–712)	0,5716 (U-тест)
CD4/CD8	1,6 (1,3–1,9)	2,08 (1,89–2,15)	0,02 (U-тест)
CD3⁺HLA-DR⁺, кл/мкл CD3⁺HLA-DR⁺, cells/μL	164 (109–211)	260 (169–289)	0,02 (U-тест)
CD3^–CD19⁺, кл/мкл CD3^–CD19⁺, cells/μL	216 (172–280)	298 (244–384)	0,02 (U-тест)
CD3⁺CD16⁺CD56⁺, %	3 (1,6–5,0)	3,8 (1,8–5,3)	0,5092 (U-тест)
CD3⁺CD16⁺CD56⁺, кл/мкл CD3⁺CD16⁺CD56⁺,cells/μL	48,7 (31,6–112,3)	99 (48–104)	0,3365 (U-тест)

Показатели гуморального и цитокинового звеньев характеризуются следующими изменениями. Возрастают концентрации общих иммуноглобулинов — концентрация иммуноглобулина G выше на 65%, IgA на 59%, IgM на 60% у пациентов с ОО по сравнению с КГ. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов у больных ОО выше на 58% по сравнению с КГ (табл. 3). Концентрация IFNγ у пациентов с ОО ниже по сравнению с КГ (0 против 1,1 пг/мл). Содержание IL-4 у больных не отличается от значений КГ. Уровень IL-8 в сыворотке крови пациентов с ОО выше на 16,3% по сравнению с КГ. У пациентов с ОО IL-10 равен 0, тогда как в контрольной группе — 1,1 (табл. 3).

Таблица 3. Показатели гуморального и цитокинового звеньев пациентов с ОО по сравнению с контрольной группой

Table 3. Indicators of the humoral and cytokine links in patients with acute opisthorchiasis compared to the control group

Показатель, единица измерения Indicator, unit of measurement	Контрольная группа Control group n = 30	Пациенты с острым описторхозом Patients with acute opisthorchiasis n = 10	Сравнение групп, p Comparison of groups, р
IgG, мг/мл \| IgG, mg/mL	15,57 (11,40–18,11)	25,44 (18,56–27,16)	0,008 (U-тест)
IgA, мг/мл \| IgA, mg/mL	2,51 (1,57–2,69)	4,00 (3,48–4,68)	0,021 (U-тест)
IgM, мг/мл \| IgM, mg/mL	1,63 (0,90–2,53)	2,61 (1,56–4,24)	0,043 (U-тест)
ЦИК, у.е. \| CIC, c.u.	48 (35–58)	76 (53,75–119,5)	0,018 (U-тест)
IFNγ, пг/мл \| IFNγ, pg/mL	1,1 (0,5–1,8)	0 (0–0)	0,001 (U-тест)
IL-8, пг/мл \| IL-8, pg/mL	16,3 (12,7–27,2)	180 (50–216)	0,0004 (U-тест)
IL-10, пг/мл \| IL-10, pg/mL	1,1 (0–5,4)	0 (0–0)	0,001 (U-тест)

Обсуждение

Инвазия Opisthorchis felineus вызывает выраженный иммунный ответ у людей при первичном заражении возбудителем описторхоза. Первой линией защиты от патогенов являются механизмы врожденного иммунного ответа [4]. При анализе показателей врожденного иммунитета у пациентов с острой стадией описторхозной инвазии выявлена их активация. Это проявляется в значительном увеличении количества лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов. Высокая эозинофилия крови является одним из важнейших отличительных признаков ранней фазы описторзхоза [7]. Эозинофилы являются фактором протективного иммунитета при гельминтозах. Этим клеткам принадлежит ведущая роль в поглощении и разрушении чужеродных белков, в данном случае — антигенов гельминтов. Эозинофилы элиминируют продукты деградации гельминтов, их метаболиты и инактивируют гистамин, который является медиатором аллергических реакций. При индивидуальном анализе количества эозинофилов у 20% пациентов не выявлено повышения этих клеток, возможно, это связано с тем, что максимальное повышение количества эозинофилов происходит к третьей неделе инвазии [7]. Нейтрофилы, привлеченные хемотаксическими факторами, мигрируют в очаг для борьбы с внеклеточными патогенами. Нейтрофилы имеют широкий спектр эффекторных механизмов: фагоцитоз, выработка активных форм кислорода, протеаз и высвобождение нейтрофильных внеклеточных ловушек. Эти механизмы активируются в ответ на антигены Opisthorchis felineus [15]. В данном исследовании показатели функциональной активности нейтрофилов у пациентов с ОО повышены — об этом свидетельствует высокие значения ферментативной (МП) и поглотительной (ФАН) способности нейтрофилов. Моноциты также играют одну из ведущих ролей в иммунном ответе при заражении гельминтами — сигнализируют о вторжении трематод. Моноциты, мигрируя в ткани и становясь тканевыми макрофагами, вырабатывают ряд эффекторных молекул, которые стимулируют антигельминтную активность и привлекают другие иммунные клетки для борьбы с патогеном. При изучении литературных источников по адаптивному иммунному ответу при ОО в исследованиях Т.Ф. Степановой (2002) [5] находим данные о снижении абсолютного количества Т-РОК клеток, повышении В-РОК и иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM. Иммунологические показатели у больных ОО в исследованиях Т.Ф. Степановой (2004) [5] также демонстрируют снижение относительного и абсолютного количества CD3⁺, CD4⁺ и CD8⁺ лимфоцитов, повышение абсолютного количества CD22⁺ лимфоцитов. В нашем исследовании клеточное звено адаптивного иммунного ответа у пациентов с ОО, в отличие от исследований [5], активировано. Об этом свидетельствует повышение абсолютного количества Т-лимфоцитов (CD45⁺CD3⁺), абсолютного количества активированных Т-лимфоцитов (CD3⁺HLA-DR⁺), относительного и абсолютного количества Тh (CD3⁺CD4⁺). Тh являются регуляторами силы и направления иммунного ответа, и повышение в периферической крови этих клеток свидетельствует о гиперактивации иммунного реагирования. В литературных источниках гуморальное звено адаптивного иммунного ответа в исследованиях авторов [5, 9] у больных с ОО демонстрирует активацию: повышено содержание все классы иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов. В данном исследовании показатели адаптивного гуморального иммунного ответа также свидетельствуют об активации, так как у пациентов инвазированных Opisthorchis felineus повышена концентрация в сыворотке крови общих иммуноглобулин G, A и M и концентрация ЦИК. При анализе цитокинового звена у всех пациентов с ОО (100%) обнаружено значительное повышение концентрации провоспалительного цитокина IL-8. Спонтанная продукция IL-8 положительно коррелирует с количеством лейкоцитов (r = 0,810, p = 0,027), абсолютным (r = 0,833, p = 0,020) и относительным (r = 0,833, p = 0,020) количеством эозинофилов, абсолютным количеством моноцитов (r = 0,833, p = 0,020) и относительным количеством натуральных киллеров (r = 0,746, p = 0,034). С помощью IL-8 происходит привлечение этих клеток в очаг повреждения. В контрольной группе корреляции IL-8 с этими показателями не выявлено. Повышенное количество и корреляция IL-8 с клетками врожденного иммунного ответа говорит о выраженной активации и важности этого звена иммунного ответа в острую стадию инвазии Opisthorchis felineus. Снижен уровень противовоспалительного цитокина IL-10, являющийся универсальным ингибитором синтеза всех провоспалительных цитокинов. Влияние IL-10 заключается в снижении активности макрофагов и подавлении продукции провоспалительных цитокинов Th1-клетками. Снижение уровня IL-10 способствует развитию гуморального звена иммунного ответа, обусловливая антипаразитарную защиту и аллергическую реактивность организма [13]. Уровень спонтанной продукции INF-γ у пациентов с ОО снижен, а IL-4 не отличается от этих показателей КГ, возможно, это обусловлено модулирующим влиянием гельминтов, избегающих иммунных атак. Так, в экспериментальных исследованиях [14] показано, что повышение продукции IFNγ и IL-4 обладает противопаразитарным действием. Таким образом, с низкими уровнями этих цитокинов может быть связано последующее более тяжелое течение этой инвазии. В группе пациентов выявлена положительная связь IL-4 с циркулирующими иммунными комплексами (r = 0,794, p = 0,029), абсолютным (r = 0,759, p = 0,029) и относительным (r = 0,759, p = 0,019) количеством эозинофилов, количеством натуральных киллеров (r = 0,746, p = 0,034). В контрольной группе корреляционных связей IL-4 c показателями выявлено не было. Выявленные корреляционные связи между показателями цитокинового и иммунного статусов свидетельствуют об активации как врожденного так и адаптивного (клеточного и гуморального) звеньев иммунной системы в ответ на внедрение Opisthorchis felineus.